桔梗水煎劑對順鉑致小鼠腎損傷的影響

吳志麗，張瑤紓，周晶

(1天津醫科大學第二醫院，天津300211;2天津醫科大學)

順鉑廣泛應用于臨床各種惡性腫瘤的治療［1，2］，療效顯著，其療效與用藥劑量呈正比，但順鉑具有嚴重的腎毒性［3，4］，限制了其臨床使用。順鉑所致腎毒性與其抑制腎皮質清除自由基及增強脂質過氧化，進而損害腎組織有關［5～7］，但其確切作用機制目前尚不明確。桔梗為桔?？浦参铮瑲w肺經，具有宣肺、利咽、祛痰、排膿等作用，臨床用于咳嗽痰多、胸悶不暢、肺癰吐膿等治療。2010年7月 ～2013年11月，我們觀察了桔梗水煎劑對順鉑致小鼠腎毒性的影響。

1 材料與方法

1.1 動物 昆明種小鼠50只，雌雄各半，體質量(20±2)g，購自中國人民解放軍科學院實驗動物中心(許可證號:SCXK-軍2007-004)。

1.2 方法

1.2.1 試藥制備 順鉑(江蘇豪森藥業股份有限公司，批號090515):精密稱取順鉑9 mg，置于10 mL的容量瓶中，加入生理鹽水定容，60℃水浴加熱助溶，即得0.9 mg/mL的順鉑溶液。桔梗(購于天津藥材公司，由天津醫科大學藥學教研室周曄教授鑒定):取桔梗15、20、25 g分別加入120、160、200 mL水，于100℃水浴回流提取2 h，過濾，濾渣再用90、120、150 mL水100℃水浴回流提取1 h，合并濾液濃縮定容至100 mL，即配成濃度為0.15、0.20、0.25 g/mL的桔梗水溶液。

1.2.2 動物分組及處理 50只小鼠隨機分為5組，每組10只。對照組:連續7 d灌胃給予生理鹽水;造模組:連續7 d灌胃給予生理鹽水，于第8天腹腔注射順鉑(9 mg/kg);桔梗低、中、高劑量組:連續7 d灌胃分別給予0.15、0.2、0.25 g/mL的桔梗水煎劑，于第8天腹腔注射順鉑(9 mg/kg)。

1.2.3 標本采集及檢測方法 全部小鼠于腹腔注射順鉑后第3天眼眶取血，然后處死取腎組織。提取血清，采用二乙酰一肟法測定血尿素氮(BUN)水平，堿性苦味酸比色法測定血肌酐(Cr)水平;稱取一定量的腎組織加生理鹽水勻漿;另取部分腎組織，用稀甲醛溶液固定，切片處理。采用黃嘌呤氧化酶法測定腎組織超氧化物歧化酶(SOD)活性，化學比色法測定谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活力，具體操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。HE染色法觀察腎組織病理學變化。

1.2.4 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。計量資料采用s表示，組間比較采用方差分析，采用SNK法進行兩兩比較。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組血清BUN、Cr比較 見表1。

2.2 各組腎組織GSH-PX、SOD含量比較 見表2。

2.3 各組腎組織病理形態學觀察結果 對照組腎組織形態基本正常;造模組腎小管上皮細胞明顯濁腫，局部上皮細胞水腫;桔梗低劑量組與造模組腎組織形態基本相同;桔梗中劑量組腎組織局部水腫，且水腫僅局部于腎小管上皮細胞;桔梗高劑量組腎組織形態大致同對照組，未見明顯異常。見插頁Ⅰ圖1。

表1 各組血清BUN、Cr比較(n=10，s)

表1 各組血清BUN、Cr比較(n=10，s)

注:與對照組比較，*P＜0.05;與造模組比較，△P＜0.05。

組別 BUN(mmol/L) Cr(μmol/L) 52.66±6.94 77.71±15.73造模組 88.71±16.39* 115.33±16.37*桔梗低劑量組 80.37±10.89* 98.43±10.18*桔梗中劑量組 69.22±11.69＊△ 87.17±11.39△桔梗高劑量組 62.70±9.87△ 81.67±13.06對照組△

表2 各組腎組織GSH-PX、SOD含量比較(n=10，s)

表2 各組腎組織GSH-PX、SOD含量比較(n=10，s)

注:與對照組比較，*P＜0.05;與造模組比較，△P＜0.05。

組別 GSH-PX(U/mg) SOD(U/mg) 1 174.54±182.14 212.54±25.06造模組 686.26±96.61* 155.41±15.94*桔梗低劑量組 794.52±143.83* 175.29±23.36*桔梗中劑量組 970.49±115.08△ 197.53±21.32＊△桔梗高劑量組 1 094.48±144.65△ 210.63±22.23對照組△

3 討論

藥物化療在臨床治療惡性腫瘤過程中發揮重要作用，但其在殺死腫瘤細胞的同時對機體正常組織細胞也產生損害。順鉑是國際推薦的首選化療藥物之一，但其致腎毒性嚴重［8～11］。在本研究中，造模組腎小管上皮細胞明顯水腫，血清BUN、Cr明顯升高，說明順鉑已造成明顯腎損害。針對順鉑致腎損傷，臨床有一些防護措施，主要為應用抗氧化劑、改變給藥方式、應用利尿劑等。

桔梗作為藥食同源的傳統中藥，具有祛痰、抗炎、免疫調節、抗氧化、保肝、利尿消腫、降血脂等作用。桔梗在中藥方劑中作為引經藥使用由來已久。它的引經作用主要體現在“舟楫”之說，認為桔梗“可為諸藥舟楫，載之上浮”。引經中藥歸經理論的一部分指某些藥物能帶引其他藥物直達病灶而起向導作用。現代研究中對中藥引經藥物的實驗研究很少，尤其是利用中藥的引經作用實現對化學藥物的“引經”。研究發現，桔梗與異煙肼合用可顯著提高異煙肼在小鼠體內的血藥濃度［12］，并促進異煙肼向肺組織分布。此外，桔梗對異煙肼和利福平致小鼠肝損傷具有保護作用，能降低MDA含量、提高SOD活性，抑制脂質過氧化反應［13～15］。李英倫等［16］認為，由桔梗皂苷表面活性所決定的增溶作用和對細胞膜通透性的影響是桔梗引經作用的內在基礎。

本實驗結果顯示，與造模組比較，桔梗中、高劑量能明顯降低小鼠血清BUN、Cr水平;桔梗中、高劑量組與造模組比較，腎組織GSH-PX、SOD含量均升高;HE染色顯示，桔梗高、中劑量組可顯著改善順鉑致腎組織損害。由此推測，中藥桔梗水煎劑對順鉑致小鼠腎損傷具有保護作用，抗氧化作用可能是其作用機制之一，但其確切作用機制還有待進一步研究。

［1］楊一昆，普紹平，高文桂，等.CDDP的應用及鉑類金屬抗癌藥物的研究進展［J］.中國新藥雜志，1999，8(12):797-801.

［2］曾健，勞山.順鉑腎毒性機制及其防護的研究進展［J］.中國實用醫藥，2008，3(10):194-195.

［3］郭培培，馬曉月，高麗萍.紅景天提取物對順鉑所致小鼠腎毒性防護作用的實驗研究［J］.時珍國醫國藥，2013，24(5): 1122-1123.

［4］吳京秦，段美麗.急性腎損傷流行病學特點及相關生物標志物的研究現狀［J］.山東醫藥，2014，54(12):97-100.

［5］Yolanda IC，Jose PC.Role of oxidative and nitrosative stress in cisplatin-induced nephrotoxicity［J］.Toxicol Pathol，2009，61 (3):223-236.

［6］徐華，常陸林，馬天江，等.燈盞花素對腎損害小鼠腎組織細胞凋亡及相關蛋白的影響［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19 (6):260-263.

［7］廖英俊，湯浩，金亞平.抗癌藥順鉑對小鼠的耳、腎和肝毒性及其機制的研究［J］.中國藥理學通報，2004，20(1):82-85.

［8］王文翔，范文強，董學彩.等.小劑量紫杉醇聯合順鉑周療方案在Ⅰb2～Ⅱb期宮頸癌新輔助化療中的應用［J］.山東醫藥，2012，52(30):39-40.

［9］薛英，黎七雄，李爽.川芎嗪對順鉑所致大鼠腎氧化損傷的保護作用［J］.醫藥導報，2012，31(2):150-153.

［10］張林，劉伏友，彭佑銘.維生素E對順鉑所致的小鼠腎毒性的影響及其機制研究［J］.腫瘤藥學，2012，2(5):343-346.

［11］任亮，張印坡，徐華，等.燈盞花素對小鼠順鉑腎損害的防治作用［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18(1):162-164.

［12］吳志麗，張瑤紓，周晶.中藥對小鼠血液中異煙肼濃度的影響［J］.中國醫院藥學，2010，30(6):481-482.

［13］張瑤紓，吳志麗，姚智.中藥對利福平異煙肼致小鼠肝損害的保護作用［J］.天津醫科大學學報，2010，12(4):577-579.

［14］欒海艷，歐芹，趙曉蓮，等.桔?？傇碥諏?型糖尿病大鼠肝臟并發癥的治療作用［J］.中國老年學雜志，2011，31(17): 3322-3323.

［15］吳敬濤，王建軍，湯衛東，等.桔梗皂苷對高脂大鼠血清指標的調節［J］.濟南大學學報(自然科學版)，2010，24(1):68.

［16］李英倫，蔣智鋼，何曉俐.桔梗對左氧氟沙星在健康雞體內藥動力學影響的研究［J］.畜牧獸醫學報，2006，37(2):183-186.