紫外分光光度法測定枇芩顆粒劑中總黃酮含量

王慶芬，倪曉霞，劉曉玲，高惠真

（中國人民解放軍第一七五醫院·廈門大學附屬東南醫院制劑科，福建 漳州 363000）

紫外分光光度法測定枇芩顆粒劑中總黃酮含量

王慶芬，倪曉霞，劉曉玲，高惠真

（中國人民解放軍第一七五醫院·廈門大學附屬東南醫院制劑科，福建 漳州 363000）

目的 建立測定枇芩顆粒劑中總黃酮含量的紫外分光光度法。方法 以蘆丁為對照品，采用70%的乙醇溶液加熱回流提取總黃酮，于509 nm波長處測定總黃酮含量。結果 蘆丁質量濃度在12.72～76.32 mg/L范圍內與吸光度有良好的線性關系，回歸方程為A=0.019 C+0.010 7（r=0.999 5）。結論 該法操作簡便、結果可靠，可為枇芩顆粒劑的質量控制提供依據。

枇芩顆粒劑；紫外分光光度法；總黃酮；含量

枇芩顆粒劑是我院自制中藥復方制劑，由枇杷葉、黃芩、白花 蛇舌草等13味中藥組方，君藥黃芩中的黃芩苷、黃芩素[1]，白花蛇舌草中的山柰酚、槲皮素等均為黃酮類化合物[2]。黃酮類化合物具有抗氧化、抗菌、抗炎、解熱等作用。現代藥理研究表明，白花蛇舌草含有的總黃酮具有抗腫瘤、抗菌、抗炎、增強免疫力等作用，是一類極具開發價值的天然活性物質[3]。茵陳中的色原酮類、黃酮類、香豆酸及揮發油等具清熱利濕、利膽退黃之功效，在體外對金黃色葡萄球菌有明顯的抑制作用，對痢疾桿菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、腦膜炎雙球菌等有不同程度的抑制作用[4]。因此，黃酮類化合物一直備受關注。本試驗中建立了紫外分光光度法用于測定枇芩顆粒劑中總黃酮的含量，為其質量控制提供了依據。

1 儀器與試藥

UV-2550微機型紫外分光光度計（日本島津公司）；AUX220型電子分析天平（日本島津公司）；HH-2型數顯恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市江南儀器廠）。蘆丁對照品（批號為100080-200707，中國食品藥品檢定研究院）；95%乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉等試劑均為分析純。

2 方法與結果[5]

2.1 溶液制備

精密稱取蘆丁對照品 0.015 9 g，加65%乙醇溶解（少量多次），定容至50 mL容量瓶中，搖勻，得對照品溶液（蘆丁含量為0.318 g/L）[6]。精密稱取枇芩顆粒劑5.0 g，以適量70%乙醇回流提取2 h，冷卻過濾，收集濾液，定容于100 mL容量瓶中[7]，得供試品溶液。

2.2 測定波長選擇

取適量的蘆丁對照品與供試品溶液，分別置25 mL容量瓶中，加65%乙醇至10.0 mL，再加入5%亞硝酸鈉溶液0.8 mL，搖勻，放置6 min，再加入10%硝酸鋁溶液0.8 mL，搖勻，放置8 min，加入4%氫氧化鈉溶液8.0 mL，用蒸餾水定容至刻度，搖勻放置15 min顯色，以65%乙醇為空白，立即測定，在300～600 nm波長范圍內掃描[8]。結果對照品溶液與供試品溶液在509 nm均有最大吸收，故選擇509 nm為測定波長。色譜圖見圖1。

圖1 紫外吸收光譜圖

2.3 方法學考察

線性關系考察：精密量取蘆丁對照品溶液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，分別置25 mL容量瓶中，加65%乙醇至10.0 mL，加入5%亞硝酸鈉溶液0.8 mL，搖勻，放置6 min，再加入10%硝酸鋁溶液0.8 mL，搖勻，放置8 min，加入4%氫氧化鈉溶液8.0 mL，用蒸餾水定容至刻度，搖勻放置15 mim，以相應試劑為空白，在509 nm波長處測定吸光度（A）[9]。以 A為縱坐標、質量濃度（C）為橫坐標，得回歸方程 A=0.019 C+0.010 7(r=0.999 5)。結果表明，蘆丁質量濃度在12.72～76.32 mg/L范圍內與吸光度線性關系良好。

精密度試驗：精密量取對照品溶液 1 mL，置 25 mL容量瓶中，依法操作，并以相應試劑為空白，連續5次。結果測得質量濃度分別為31.571，31.668，31.713，31.696，31.997 mg/L，RSD為0.502%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液(批號為140220)，按擬訂方法分別于0，10，20，30，40，50，60 min時測定吸光度。結果分別為31.835，31.537，31.185，31.712，31.407，31.066，31.918 mg/L，RSD為1.082%（n=7），表明供試品溶液在60 min內穩定性良好。

重復性試驗：精密稱取同一批樣品（批號為140220）5份，每份5.0 g，按供試品溶液制備方法平行制備，依法測定。結果分別為31.536，31.725，31.085，31.642，31.545 mg/L，RSD為 0.79%（n=5），表明該方法重復性良好。

加樣回收試驗：精密吸取已知含量的蘆丁對照品溶液1 mL (0.318 g/L)，分別加入9份各0.5 mL已知含量的供試品溶液中(批號為140220)，按供試品溶液制備方法制備，依法操作。結果見表1。

表1 蘆丁加樣回收試驗結果（n=9）

2.4 樣品含量測定

精密稱取3批樣品各5 g，依法制備供試品溶液并測定吸光度，計算總黃酮的含量，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果

3 討論

枇芩顆粒劑處方涉及中藥材組分眾多，有效成分復雜。黃酮類藥是該制劑的主要有效成分之一，且處方中多味中藥含有黃酮成分，因此需對總黃酮進行質量控制，確保藥品的質量。

本試驗中采用紫外分光光度法測定枇芩顆粒劑中總黃酮的含量，采用比色法，即向供試品溶液中加入顯色劑后測定吸光度以測定其含量[10-11]。黃酮類化合物分子中具有3-羥基、5-羥基或鄰二酚羥基，易與金屬鹽類如鋁鹽、鋯鹽、鎂鹽等反應，生成有色金屬絡合物，這些絡合物作用在光譜上能產生明顯變化，如吸收峰紅移，常用金屬試劑為硝酸鋁溶液。蘆丁為黃酮苷，能與鋁離子生成黃色配合物，在亞硝酸鈉堿性溶液中呈紅色，在509 nm波長處有最大吸收，故本試驗中試劑為亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉溶液[12]。以蘆丁為對照品，測出總黃酮含量較穩定，此法簡便、準確、靈敏度高，可為枇芩顆粒劑的質量控制提供參考。

本試驗中，枇芩顆粒劑的總黃酮溶液提取采用70%的乙醇溶液回流2 h再過濾，試驗過程時曾與等處方枇芩溶液等量時測得的總黃酮收得率無明顯差別，表明此方法提取完全。

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Determination of Total Flavonoids from Piqin Granules by UV Spectrophotometry

Wang Qingfen,Ni Xiaoxia,Liu Xiaoling,Gao Huizhen (Department of Pharmacy,175 Hospital of PLA/Affiliated Southeast Hospital of Xiamen University,Zhangzhou,Fujian,China 363000)

Objective To establish a UV spectrophotometry method for determining the content of total flavonoids from Piqin Granules.M ethods With rutin as the reference substance,total flavonoids were extracted from Piqin Granules by the 70% ethanol solution heating reflux extraction.Then,the content of total flavonoids was detected at 509 nm by UV Spectrophotometry.Results The rutin mass concentration in the range of 12.72-76.32 mg/L showed the good linear relationship with absorbancy.The regression equation wasA=0.019 C+0.010 7(r=0.999 5).Conclusion This method is simple to operate and reliable in the detection results,and can provide the basis for the quality control of Piqin Granules.

Piqin Granules;UV Spectrophotometry;total flavonoids;content

王慶芬，大學本科，主管藥師，主要從事醫院制劑檢驗，（電子信箱）wqf0596＠163.com。

2014-10-28)

醫院青年苗圃基金資助項目，項目編號:13Y016。

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)13-0031-03