參芎葡萄糖注射液中總酚酸含量測定方法研究

朱 迪，譚 丹，侯靖宇，王愛民，3，蘭燕宇，3，鄭 林，3

（1.貴陽醫(yī)學院民族藥與中藥開發(fā)應用教育部工程研究中心，貴州 貴陽 550004； 2.貴陽醫(yī)學院藥學院貴州省藥物制劑重點實驗室，貴州 貴陽 550004； 3.貴陽醫(yī)學院藥學院，貴州 貴陽 550004）

參芎葡萄糖注射液中總酚酸含量測定方法研究

朱 迪1，譚 丹2，侯靖宇1，王愛民1，3，蘭燕宇1，3，鄭 林2，3

（1.貴陽醫(yī)學院民族藥與中藥開發(fā)應用教育部工程研究中心，貴州 貴陽 550004； 2.貴陽醫(yī)學院藥學院貴州省藥物制劑重點實驗室，貴州 貴陽 550004； 3.貴陽醫(yī)學院藥學院，貴州 貴陽 550004）

目的 建立測定參芎葡萄糖注射液中總酚酸含量的紫外分光光度（UV）法。方法 以原兒茶醛為對照品，對參芎葡萄糖注射液中總酚酸進行測定。結果 原兒茶醛質量濃度在0.008～0.030 g/L范圍內與吸光度呈良好線性關系，A=31.541 04 C-0.103 97(r=0.999 6，n=5），平均回收率為103.61%，RSD為4.85%(n=9)。結論 該方法操作簡便、準確可靠，可作為參芎葡萄糖注射液的質量控制方法。

參芎葡萄糖；總酚酸；含量測定；紫外分光光度法

參芎葡萄糖注射液為上市的中藥注射劑品種，由丹參和鹽酸川芎嗪配伍組方，具有抗血小板聚集、擴張冠狀動脈作用，臨床用于閉塞性腦血管病及其他缺血性血管疾病的治療[1-3]。但其現行質量標準僅對丹參素和鹽酸川芎嗪進行定量控制，難以全面控制產品內在質量。結合國家食品藥品監(jiān)督管理總局《關于開展中藥注射劑安全性再評價工作的通知》（國食藥監(jiān)辦〔2009〕28號）文件精神，本課題組研究建立了參芎葡萄糖注射液中6種主要成分的含量測定方法以及指紋圖譜測定方法[4-5]，尤其是建立了參芎葡萄糖注射液總酚酸的含量測定方法，為產品的質量控制與綜合評價提供了科學依據。

1 儀器與試藥

UV 2401型紫外分光光度計（日本島津公司）；超聲波清洗器（250 W，頻率27～34 kHz，北京醫(yī)療設備二廠）；AE240型十萬分之一電子天平（梅特勒-托利多儀器＜上海＞有限公司）；超純水機（四川沃特爾科技發(fā)展有限公司）；80-2B型臺式離心機（湖南星科科學儀器有限公司）；TAISITE水浴鍋。原兒茶醛對照品（批號為110810，中國食品藥品檢定研究院）；亞硝酸鈉對照品（重慶江川化工有限公司，批號為201012117）；硝酸鋁（批號為20090905，科密歐化學試劑有限公司）；氫氧化鈉（批號為10019718），鐵氰化鉀（批號為 10016718），三氯化鐵（批號為 10011918），十二烷基硫酸鈉（批號為30166428)，均為國藥集團化學試劑有限公司產品；參芎葡萄糖注射液（批號為 20131125-1，20131125-2，20130979-1，20130979-2，20131104-1，20131104-2，20131211-1，20131211-2）均由貴州景峰注射劑有限公司提供。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

稱取原兒茶醛對照品5.30 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，得對照品溶液。取樣品1 mL，加水定容至10 mL，搖勻后，取3 mL，置10 mL離心管中，加水補足5 mL，搖勻后，再加入10%亞硝酸鈉溶液0.5 mL，10%硝酸鋁溶液1.0 mL，搖勻后，暗處放置5 min，加入2 mol/L氫氧化鈉溶液定容至10 mL，搖勻后，暗處放置20 min，即得供試品溶液。

2.2 檢測波長

以2 mol/L氫氧化鈉溶液為參比溶液，分別于紫外分光光度計上對系列對照品溶液和供試品溶液進行全掃描，結果對照品溶液最大吸收波長為514 nm，供試品溶液最大吸收波長為508 nm，二者紫外光譜和最大吸收波長基本一致，見圖1。故確定參芎葡萄糖注射液中總酚酸含量的測定波長為508 nm。

2.3 方法學考察

線性關系考察：精密量取對照品溶液 1.5，2.0，2.5，3.0，5.0 mL，置10 mL離心管中，加水補足5 mL，搖勻后，再加入0.5 mL 10%亞硝酸鈉溶液，1.0 mL 10%硝酸鋁溶液，搖勻后，暗處放置5 min，加入2 mol/L氫氧化鈉溶液定容至10 mL，搖勻后，暗處放置20 min，即得對照品工作液。分別取對照品工作液，以2 mol/L氫氧化鈉溶液為參比溶液，在508 nm波長處測定吸光度，以質量濃度 C為橫坐標、吸光度 A為縱坐標繪制標準曲線，回歸方程為A=31.541 04 C-0.103 97，r=0.999 6（n=5）。結果表明，原兒茶醛質量濃度在0.008～0.030 g/L范圍內與吸光度呈良好的線性關系。

圖1 紫外分光光譜圖

精密度試驗：取同一對照品工作液（質量濃度0.013 g/L），依法測定6次吸光度值。結果的 RSD為0.44%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取同一批樣品（批號為20131125-1）6份，依法制備供試品溶液，分別測定吸光度值并計算含量。結果的 RSD為0.49%（n=6），表明方法重復性良好。

穩(wěn)定性試驗：精密稱取同一供試品溶液，分別于0，1，2，4，6，8，24 h時依法測定。結果的 RSD為3.4%（n=7），表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗：精密稱取同一批樣品（批號為20131125-1）9份，每份0.5 mL，分別精密加入原兒茶醛對照品溶液適量，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測定并計算回收率。結果見表1。

表1 原兒茶醛加樣回收試驗結果（n=9）

2.4 樣品含量測定

取8批樣品，制備供試品溶液，依法測定吸光度值，計算總酚酸含量。結果見表2。

3 討論

目前測定總酚酸的方法有三氯化鐵法和亞硝酸鈉法[6-11]，但三氯化鐵顯色法穩(wěn)定性差。經試驗，結果表明，三氯化鐵顯色法測定總酚酸，室溫放置30 min后吸光度就開始增加，室溫放置2 h后便無法測定。參芎葡萄糖注射液是由鹽酸川芎嗪與丹參總酚酸提取物組成的復方制劑，而鹽酸川芎嗪與丹參總酚酸的最大吸收波長相近，故采用分光光度法直接測定其中丹參總酚酸的含量時，鹽酸川芎嗪將對其含量測定產生顯著的影響；丹參總酚酸可與硝酸鋁形成絡合物而使其最大吸收波長紅移，從而亦可以消除鹽酸川芎嗪的影響[7]。因此，選擇亞硝酸鈉顯色法對總酚酸進行測定，試驗結果表明，亞硝酸鈉顯色法在24 h內穩(wěn)定性良好。本試驗所用測定方法方便、快速、專屬性及重現性好，結果準確可靠，可用于該制劑的質量控制。

表2 樣品總酚酸含量測定結果(g/L)

為更好控制參芎葡萄糖注射液的內在質量，本研究中以《中藥、天然藥物注射劑基本技術要求》為依據對該制劑進行了上市安全性再評價，該要求提出了中藥注射劑“689”質控標準。而本研究正是基于此，在前期多成分含量測定和指紋圖譜研究的基礎上，進一步采用紫外分光光度法建立了參芎葡萄糖注射液中總酚酸的定量測定方法，進一步完善了其質量控制方法，更好地保障了臨床用藥的安全可靠。

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Study on M easurement M ethod of Total Phenolic Acid Content in Shenxiong Glucose Injection

Zhu Di1,Tan Dan2,Hou Jingyu1,Wang Aimin1，3,Lan Yanyu1，3,Zheng Lin2，3(1.Engineering Research Center for Development and Application of Ethnic Medicine and Traditional Chinese Medicine of Ministry of Education,Guiyang Medical College,Guiyang,Guizhou,China 550004; 2.Guizhou Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics,School of Pharmacy,Guiyang Medical
College,Guiyang,Guizhou,China 550004; 3.School of Pharmacy,Guiyang Medical College,Guiyang,Guizhou,China 550004)

Objective To establish a method for the determination of total phenolic acid in Shenxiong Glucose Injection.M ethods The UV spectrophotometry was adopted with protocatechuic aldehyde as the reference substance,the total phenolic content in Shenxiong Glucose Injection was measured.Results The mass concentration of total phenolic acids in the range of 0.008-0.030 g/L demonstrated the good linearrelation with the absorbance,A=31.541 04 C-0.103 97,r=0.999 6(n=5),the average recovery rate was 103.61%,RSD=4.85%(n=9).Conclusion The method is simple,accurate and reliable,and can be used as the quality control method of Shenxiong Glucose Injection.

Shenxiong Glucose Injection;total phenolic acid;content determination;ultraviolet spectrophotometry

朱迪(1991-)，女，在讀碩士研究生，研究方向為藥物新劑型、新技術、新工藝研究與新藥研究開發(fā)，（電子信箱）412928703＠qq.com；鄭林，女，副教授，研究方向為中藥藥效物質基礎及質量控制，本文通訊作者，（電話）0851-6908468（電子信箱）mailofzl＠126.com。

2014-11-13)

國家科技支撐計劃課題，項目編號:2013BAI11B01；貴州省科技重大專項，項目編號:黔科合重大專項字[2011]6019號；貴州省中藥現代化專項，項目編號:黔科合中藥字[2013]5062號。

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)13-0028-02