CRABPⅡ、E-FABP和Ki-67在乳腺浸潤性導管癌組織中的表達及臨床意義

吳化雷，包福德，王繼文

(深圳市寶安區石巖人民醫院外四科，廣東 深圳 518000)

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CRABPⅡ、E-FABP和Ki-67在乳腺浸潤性導管癌組織中的表達及臨床意義

吳化雷※，包福德，王繼文

(深圳市寶安區石巖人民醫院外四科，廣東 深圳 518000)

摘要：目的探討細胞視黃酸結合蛋白(CRABP)Ⅱ、表皮型脂肪酸結合蛋白(E-FABP)及Ki-67在乳腺浸潤性導管癌(IDC)組織中的表達及臨床意義。方法收集2009年1月至2013年1月深圳市寶安區石巖人民醫院收治的112例IDC患者的臨床資料，患者均采用手術切除，并對IDC組織進行免疫組織化學染色，觀察IDC組織中CRABPⅡ、E-FABP及Ki-67的表達情況。結果CRABPⅡ在Ki-67陰性表達組的陽性表達率高于Ki-67陽性表達組(67.6%比 19.2%，χ2=24.761，P=0.000)；E-FABP在K-i67陽性表達組中的陽性表達率高于Ki-67陰性表達組(84.6%比35.3%，χ2=27.245，P=0.000)。IDC組織中CRABPⅡ表達與Ki-67表達呈負相關(rspan=-0.467，P=0.000)，E-FABP表達與Ki-67表達呈正相關(rspan=0.916，P=0.000)。E-FABP與Ki-67共同表達與腫瘤大小、組織學分級、IDC淋巴轉移有關，與患者年齡、TNM分期均無關。結論CRABPⅡ和E-FABP可能參與了腫瘤細胞的增殖調控，CRABPⅡ對腫瘤細胞的增殖具有抑制作用，E-FABP對腫瘤細胞的增殖具有促進作用，E-FABP和Ki-67對IDC的進展具有協同作用，兩者的共同表達對IDC轉移的判斷具有一定的臨床價值。

關鍵詞：乳腺浸潤性導管癌；細胞視黃酸結合蛋白Ⅱ；表皮型脂肪酸結合蛋白；Ki-67

乳腺癌是女性發病率最高的惡性腫瘤，且近年來我國發病逐年增加，給女性的生命和健康帶來嚴重威脅。乳腺癌最常見的病理類型是浸潤性導管癌(invasive ductal carcinoma，IDC)[1]。研究顯示，細胞視黃酸結合蛋白(cellular retinoic acid binding protein，CRABP)Ⅱ和表皮型脂肪酸結合蛋白(epidermal type fatty acid binding protein，E-FABP)是維甲酸轉運蛋白，在IDC腫瘤細胞的增殖和凋亡過程中發揮重要作用[2]。Ki-67是增殖細胞核抗原，與細胞周期有關，可反映腫瘤細胞的增殖活性，IDC的發生、發展與細胞的增殖密不可分。本研究通過觀察IDC組織中3種蛋白的含量，探討CRABPⅡ、E-FABP、Ki-67的相關性及其在IDC發生、發展中的作用。

1資料與方法

1.1一般資料收集2009年1月至2013年1月深圳市寶安區石巖人民醫院收治的112例IDC患者的臨床資料，患者均為女性，均采用手術切除，術前均未行放療、化療或內分泌治療，術后病理證實為IDC。年齡36～74歲，平均(49±6)歲，其中年齡≥50歲者65例、年齡<50歲者47例；腫瘤直徑≥2 cm 73例，<2 cm 39例；有淋巴轉移89例，無淋巴轉移23例；國際抗癌聯盟TNM分期：Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期分別為15例、47例和50例；世界衛生組織乳腺病理組織分級：Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級分別為11例、55例和46例。患者均有完整的臨床資料和病理學資料。

1.2試劑與方法鼠抗人E-FABP 單克隆抗體(批號：YM10168)和羊抗人CRABPⅡ多克隆抗體(批號：08169H6)購自北京金橋生物制品公司，Ki-67鼠抗人單克隆抗體(批號：101220485D)購自福建邁新生物技術公司，所有標本由甲醛固定，石蠟包埋，并作4 μm連續連續切片，采用免疫組織化學染色，CRABPⅡ、E-FABP一抗工作液濃度為1∶200，陽性對照分別采用人健康前列腺組織和銀屑病皮膚組織，Ki-67采用 EnVision 二步法作免疫組織化學染色，陽性對照應用已知的陽性切片，CRABPⅡ、E-FABP、Ki-67均應用磷酸鹽緩沖液替代一抗作為陰性對照，嚴格按照試劑說明書進行操作。

1.3結果判讀CRABPⅡ、E-FABP以細胞質和(或)細胞核內呈現黃色、棕黃、黃褐色顆粒為陽性判斷，并按照細胞著色程度進行評分：0分，無著色；1分，黃色；2分，棕黃色；3分，黃褐色。高倍鏡下隨機選擇5個視野，分別計算每個視野中陽性細胞所占百分率，取平均值，并按照陽性細胞所占百分率進行評分：0分，≤5%；1分，>5%~25%；2分，>25%~50%；3分，>50%~75%；4分，>75%。兩項評分乘積作為總積分，并據此進行陽性判斷[3]：陰性(-)，總積分0分；弱陽性(+)，總積分1～4分；中等強度陽性(++)，總積分5～8分；強陽性(+++)，總積分≥9分。細胞Ki-67著色程度評分同上，陽性細胞所占百分率≤14%為0分、15%～25%為1分、26%～50%為2分、>50%為3分。著色程度評分與陽性細胞所占百分率評分之和為總積分，根據總評分進行陽性判斷[4]：陰性(-)，總積分0～1分；弱陽性(+)，總積分為2分；中等強度陽性(++)， 總積分3～4分；強陽性(+++)，總積分5～6分。三者均以(-)為陰性，(+)、(++)和(+++)為陽性。

1.4統計學方法應用SPSS 19.0統計軟件進行統計分析。計數資料比較采用χ2檢驗，相關性分析應用Spearman等級相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1IDC組織中CRABPⅡ、E-FABP表達與Ki-67表達的關系112例IDC組織標本中，Ki-67陽性表達78例，陰性表達34例。CRABPⅡ在Ki-67陰性表達組的陽性表達率高于Ki-67 陽性表達組(χ2=24.761，P=0.000)；E-FABP在Ki-67陽性表達組中的陽性表達率高于Ki-67陰性表達組(χ2=27.245，P=0.000)，見表1。

表1　IDC組織中CRABPⅡ、E-FABP

IDC：浸潤性導管癌；CRABPⅡ：細胞視黃酸結合蛋白Ⅱ；E-FABP：表皮型脂肪酸結合蛋白；a與Ki-67陽性表達組比較,P<0.01

2.2IDC組織中CRABPⅡ、E-FABP表達與Ki-67表達的相關性IDC組織中CRABPⅡ表達與Ki-67表達呈負相關(rs=-0.467，P=0.000)，E-FABP表達與Ki-67表達呈正相關(rs=0.916，P=0.000)，見表2。

表2　IDC組織中CRABPⅡ、E-FABP

IDC：浸潤性導管癌；CRABPⅡ：細胞視黃酸結合蛋白Ⅱ；E-FABP：表皮型脂肪酸結合蛋白

2.3IDC組織中E-FABP與Ki-67共同表達與臨床病理指標的關系112例IDC組織標本中， E-FABP與Ki-67均為陽性表達63例，均為陰性表達22例，E-FABP與Ki-67共同表達與IDC腫瘤直徑、組織分級和淋巴轉移有關，與患者年齡、TNM分期均無關，見表3。

表3　IDC組織中E-FABP與Ki67共同

IDC：浸潤性導管癌；E-FABP：表皮型脂肪酸結合蛋白

3討論

E-FABP是一種來源于表皮細胞的低相對分子質量胞質蛋白，由135個氨基酸組成，分布于機體多種組織中，可調節組織細胞對長鏈脂肪酸的攝取、轉運及代謝活動[5]，CRABP Ⅱ是調節維甲酸及其受體的重要物質，與維甲酸的轉錄活性有關。E-FABP和CRABP Ⅱ 均為維甲酸的轉運蛋白，CRABP Ⅱ 將維甲酸轉運至細胞核后，在維甲酸受體的作用下，發揮

維甲酸對細胞分化的調節作用和細胞周期的調控作用，從而誘導細胞的凋亡，對細胞的生長分裂發揮抑制作用[6]。國內外有研究顯示，卵巢癌組織中CRABPⅡ表達水平高于卵巢良性腫瘤和卵巢異位癥組織，推斷CRABPⅡ可能介導維甲酸在惡性腫瘤細胞的增殖和分化中發揮重要作用[7-8]。動物實驗也顯示，CRABPⅡ可在一定程度上抑制乳腺癌小鼠的腫瘤細胞增殖[9]。E-FABP轉運維甲酸至細胞核后，通過活化過氧化物酶體增殖物激活受體β/δ，抑制細胞的凋亡，促進細胞的分化和增殖，國內有研究顯示E-FABP在不同種屬肝癌組織[10]、非小細胞肺癌組織[11]中呈高表達，并且對腫瘤患者的預后評估具有一定價值。Ki-67是一種核蛋白，可表達于除G0期外的所有的細胞周期，在M期達到峰值。Ki-67具有較短的半衰期，在細胞有絲分裂后很快降解，因此，Ki-67可作為判斷細胞增殖活性的確切指標，并可對惡性腫瘤化療的敏感性做出預測[12]。黃澤楠等[13]研究結果顯示，Ki-67的表達與多數乳腺浸潤性導管癌病理及臨床指標有相關，可作為監測患者預后的指標。國外也有研究表明，乳腺癌組織Ki-67陽性表達患者無病生存期和總生存期均較短于Ki-67陰性表達患者[14]。

本研究結果顯示，CRABPⅡ在Ki-67陰性表達的IDC組織中的陽性表達率較高，而E-FABP在Ki-67陽性表達的IDC組織中的陽性表達率較高，CRABPⅡ、E-FABP與Ki-67在IDC組織中的表達情況分別呈負相關和正相關(P=0.000)，E-FABP 與Ki-67共同表達與腫瘤的大小、組織學分級和淋巴結轉移有關，表明CRABPⅡ和E-FABP可能通過不同的機制調控腫瘤細胞的增殖，從而參與IDC發生、發展。在這個發展過程中，CRABPⅡ對腫瘤細胞的增殖具有抑制作用，相反，E-FABP 腫瘤細胞的增殖具有促進作用，而在發生轉移的IDC患者中，E-FABP的作用可能占據優勢，E-FABP與Ki-67對于IDC的進展具有協同作用，兩者的共同表達對于IDC轉移的評估和預測具有一定臨床價值。

本研究不足之處在于僅對E-FABP與Ki-67的共同表達與腫瘤的轉移的關系進行分析，未對兩者共同陽性表達與患者療效及預后的影響進一步探討，有待于在進一步研究中增加樣本量深入探討。

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Clinical Significance and Expression of CRABPⅡ,E-FABP and Ki-67 in Breast Invasive Ductal CarcinomaWUHua-lei，BAODe-fu，WANGJi-wen.(DepartmentofFourSurgery，ShiyanPeople′sHospitalofBao′anDistrict,Shenzhen518000,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the clinical significance and expression of cellular retinoic acid binding protein(CRABP)Ⅱ,epidermal type fatty acid binding protein(E-FABP) and Ki-67 in breast invasive ductal carcinoma(IDC).MethodsClinical data of 112 patients with IDC admitted to Shiyan People′s Hospital of Bao′an District from Jan. 2009 to Jan. 2013 was collected.All patients were treated with surgical resection,and the IDC was performed immunohistochemical staining,to observe the expressions of CRABPⅡ，E-FABP and Ki-67 in the IDC tissues.ResultsThe positive expression rate of CRABP Ⅱ in the Ki-67 negative expression group was higher than that of the Ki-67 positive expression group(67.6% vs 19.2%， χ2=24.761,P=0.000).The positive expression rate of E-FABP in the Ki-67 positive expression group was higher than that of the Ki-67 negative expression group(84.6% vs 35.3%，χ2=27.245,P=0.000).The expression of CRABP Ⅱ was negatively correlated with Ki-67 in IDC tissues(rspan=-0.467,P=0.000),the expression of E-FABP was positively correlated with Ki-67(rspan=0.916,P=0.000). E-FABP and Ki-67 coexpression was correlated with tumor size,histological grade,IDC lymph metastasis,but not related with patient age,and TNM stage.ConclusionCRABPⅡ and E-FABP may be involved in tumor cell proliferation:CRABPⅡ has inhibiting effect on proliferation of tumor cells,while E-FABP can promote the proliferation of tumor cells,E-FABP and Ki-67 has a synergistic effect on the progression of IDC,the co-expression of the two has a certain clinical value for judgment of IDC metastasis.

Key words：Breast invasive ductal carcinoma; Cellular retinoic acid binding proteinⅡ; Epidermal type fatty acid binding protein; Ki-67

收稿日期：2014-09-22修回日期：2015-02-07編輯：伊姍

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.18.050

中圖分類號：R737.9

文獻標識碼：A

文章編號：1006-2084(2015)18-3398-03