CD44促進HUVECs增殖和黏附

石 歆

（河南中醫學院第一附屬醫院內科，河南鄭州 450000）

腦血管內皮細胞損傷是高血壓、腦卒中及腦梗阻等多種腦血管疾病的病理基礎之一，血管內皮細胞的增殖和黏附是血管內皮修復的一個重要步驟。因此，揭示內皮細胞增殖和黏附機制是修復血管的關鍵。CD44（cluster of differentiation 44）是一類相對分子質量在80～200 ku之間的單鏈跨膜糖蛋白，是廣泛表達于細胞表面的透明質酸受體［1］。CD44最早是作為一種細胞黏附因子被發現的，后來發現CD44還能夠促進內皮細胞的增殖［2］，在維護血管完整性中扮演重要作用［3］。但CD44在內皮細胞增殖和黏附中的作用機制研究較少。本文研究CD44在血管內皮細胞增殖和黏附中的作用及其機制。

1 材料與方法

1.1 材料

DMEM培養基（Gibco公司）;pcDNA3.1、Trizol試劑和LipofectamineTM2000轉染試劑（Invitrogen公司）;oligo-dT引物和PrimeScript? RT試劑盒（Takara公司）;FuGENE HD轉染試劑盒（Roche，美國）;MTT、RIPA裂解液和ECL標記的二抗（碧云天，江蘇）;CD44抗體（Abcam公司）;Akt抗體、p-Akt抗體、PECAM1抗體、Ki67抗體、β-actin抗體、Akt siRNA、PECAM1 siRNA和對照siRNA（Santa Cruz公司）。

1.2 方法

1.2.1 人臍靜脈血管內皮細胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）的培養:HUVECs置于含5% 胎牛血清的DMEM培養基中，于37℃，8%CO2培養箱中培養。3 d胰蛋白酶消化傳代1次。

1.2.2 過表達載體的構建及細胞轉染:將HUVECs分為3組:1）對照組不做任何處理，2）空載體組HUVECs進行空載體轉染，3）CD44轉染組HUVECs進行CD44過表達載體轉染。采用Trizol試劑提取細胞總 RNA。使用 oligo-dT引物和 PrimeScript?RT試劑盒將總RNA反轉錄成cDNA。參照文獻［4］引物克隆CD44 cDNA，將CD44 cDNA插入載體pcDNA3.1中，獲取 pcDNA3.1-CD44重組表達載體，以空載體為陰性對照。待細胞增殖至匯合度為60%時，使用FuGENE HD轉染試劑盒進行轉染，具體過程參照試劑說明書進行。

1.2.3 細胞增殖測定:收集細胞，胰蛋白酶消化并計數。……