IL-2通過Jak3-Stat5通路促進巨噬細胞M1極化

亓文靜，李 巖，王 玉，于愛蓮

(泰山醫學院基礎醫學院病原生物學研究所，山東泰安271000)

IL-2是免疫系統中多效能的細胞因子，對巨噬細胞和單核細胞有激活作用［1］。IL-2在病毒性感染，惡性腫瘤和其他疾病中具有重要臨床價值。

巨噬細胞極化是一異質過程，不同極化產生不同功能的活化細胞。根據表型和分泌的細胞因子，可將其激活分為經典活化(classically-activated，M1)和選擇活化(alternatively-activated，M2)，不同活化誘導不同的胞內信號。常見M1型標志物:IFN-γ、IL-1β、IL-12、IL-23及 TNF-α 等;M2 型標志物有:Arginase-1、CD163、IL-10、IL-4R1 及 TGF-β 等［2］。巨噬細胞極化是多因子相互作用的復雜過程，受到胞內多種分子及通路的調控。

IL-2能夠有效激活、提高巨噬細胞的吞噬及殺傷活性［3-4］。但IL-2對巨噬細胞極化及其機制很少有報道。IL-2同家族的IL-4，已被證實能夠促使M0向M2極化［5］。因此，本研究擬通過與IL-4作用的對比，探求IL-2在調控巨噬細胞極化中的作用及其所涉及的通路。

1 材料與方法

1.1 材料

小鼠單核巨噬細胞RAW 264.7(中國科學院細胞庫);重組小鼠白介素-2(rmIL-2)和重組小鼠白介素-4(rmIL-4)(Sigma公司);Trizol、反轉錄試劑盒、SYBR-Green熒光染料［寶生物工程(大連)有限公司］;引物由上海生工生物工程技術服務公司合成;蛋白裂解液RIPA、PMSF蛋白酶抑制劑和BCA蛋白定量試劑盒(碧云天生物技術研究所);anti-F4/80-PE，anti-CD206-APC(eBbioscience)和 anti-CD11c-FITC(Biolegend)(達科為公司);anti-iNOS(sc-650)和anti-Arg-1(sc-20150)(Santa Cruz公司);anti-Phospho-Stat5(p-Stat5，#4322)，anti-Stat5(#9358)，anti-Phospho-Jak3(p-Jak5，#5031)，anti-Jak3(#8863)和辣根過氧化物酶標記的二抗(Cell Signaling Technology公司);ECL Plus發光液(Millipore公司)。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養與處理:巨噬細胞RAW 264.7培養于含10%胎牛血清的高糖DMEM培養液中，37℃，5%CO2培養，0.05%胰蛋白酶消化傳代，傳至3～8代內用于實驗。重組細胞因子rmIL-2(IL-2)和rmIL-4(IL-4)對細胞的處理濃度均為20 ng/mL，對照組處理采用同樣濃度的BSA。……