羊藿三七膠囊中淫羊藿苷高效液相色譜法含量測定方法改進

鄭小平

（重慶市食品藥品檢驗所，重慶 401121）

羊藿三七膠囊中淫羊藿苷高效液相色譜法含量測定方法改進

鄭小平

（重慶市食品藥品檢驗所，重慶 401121）

目的改進測定羊藿三七膠囊中淫羊藿苷含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱采用Agilent C18柱(150 mm×4．6 mm，5 m)，流動相為乙腈-0．05%磷酸溶液（26∶74），流速為1．0 mL／min，檢測波長為270 nm，柱溫為30℃。結果樣品中淫羊藿苷色譜峰達到基線分離，進樣量在0．514～6．616 g范圍內與峰面積呈良好線性關系（r=0．999 7），平均回收率為98．36%，RSD為1．76%(n= 6)。結論改進方法簡化了流動相組成和供試品溶液制備方法，簡便、快速，重復性好，可用于羊藿三七膠囊的質量控制。

羊藿三七膠囊；淫羊藿苷；高效液相色譜法；含量測定

羊藿三七膠囊由淫羊藿和三七經提取制成，具有溫陽通脈、化瘀止痛的功效，用于陽虛血瘀所致胸痹，癥見胸痛、胸悶、心悸、乏力、氣短等，可用于冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(簡稱冠心病)、心絞痛屬上述證候者。現行標準中采用高效液相色譜（HPLC）法測定方中淫羊藿所含淫羊藿苷的含量，流動相為乙腈-水-四甲基氫氧化銨（28∶72∶0．1）[1]，組分復雜，其中四甲基氫氧化銨為不常用的試劑，供試品溶液制備采用甲醇索氏提取4 h，操作煩瑣。本試驗中對流動相組成和供試品溶液制備方法進行了簡化，即流動相為乙腈-0．05%磷酸溶液（26∶74），樣品采用稀乙醇直接超聲提取，樣品中淫羊藿苷色譜峰達到基線分離，含量測定結果可靠，現報道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀（Waters 2489型紫外檢測器＜美國＞，Empower色譜工作站）。淫羊藿苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110737-200415，含量測定用）；羊藿三七膠囊（重慶三峽云海藥業股份有限公司，批號為130601，131201，131202）；乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 色譜條件

色譜柱：Agilent C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0．05%磷酸溶液（26∶74），流速：1．0 mL／min；檢測波長：270 nm，柱溫：30℃；進樣量：10 μL。

2．2 溶液制備

精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0．2 mg的溶液，即得對照品溶液。取羊藿三七膠囊裝量差異項下的內容物，混勻，取約0．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，密塞，稱定質量，超聲（功率 220 W，頻率50 kHz）處理1 h，放冷，再稱定質量，用稀乙醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。另取缺淫羊藿的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備，即得陰性對照品溶液。

2．3 方法學考察

專屬性試驗：取 2．2項下 3種溶液各 10 μL，按擬訂色譜條件進樣。結果陰性對照品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相同保留時間處未見色譜峰，陰性無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：精密稱取淫羊藿苷對照品33．08 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，質量溶度為0．661 6 g／L，作為對照品貯備液。精密吸取3 mL，置5 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成質量濃度為0．661 6，0．397 0，0．238 2，0．142 9，0．085 7，0．051 4 g／L系列對照品溶液，分別進樣10 μL，測定峰面積，以進樣量(C，μg)為橫坐標、峰面積(A)為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程 A=2．2×107C-99 693，r=0．999 7(n=6)。結果表明，淫羊藿苷進樣量在0．514～6．616 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液10 μL，連續進樣5次，測定峰面積。結果的 RSD=0．10%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，于放置0，2，4，8，10 h時依法測定淫羊藿苷峰面積。結果的 RSD=0．90%（n=5），表明供試品溶液在10 h內穩定性良好。

重復性試驗：取同一批號的樣品，按2．2項下方法制備供試品溶液5份，測定淫羊藿苷的含量。結果平均含量為每粒4．4 mg，RSD=1．30%（n=5），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：精密稱取已測定含量的同一批樣品約0．25 g，各5份，分別加入對照品適量，按供試品溶液制備方法制備待測溶液，依法測定，計算回收率。結果見表1。

表1 淫羊藿苷加樣回收試驗結果（n=6）

2．4 樣品含量測定

取5批羊藿三七膠囊，依法制備供試品溶液，分別進樣，測定峰面積，計算淫羊藿苷的含量。結果批號為 130601，131201，131202，140101，120501的樣品中淫羊藿苷的含量分別為每粒4．5，5．5，4．7，4．4，4．8 mg。

3 討論

考察比較流動相乙腈-水(28∶72)[2]和乙腈-0．05%磷酸(26∶74)，結果兩者均能使樣品中淫羊藿苷色譜峰達到良好的分離，陰性對照品溶液無干擾，但前者淫羊藿苷色譜峰保留時間不恒定，易發生飄移；后者因加入的適量酸，淫羊藿苷色譜峰保留時間恒定。故選定乙腈-0．05%磷酸(26∶74)為含量測定的流動相。

樣品分別采用甲醇、50%甲醇、乙醇、稀乙醇超聲提取1 h和甲醇索氏提取4 h（原標準方法），含量測定結果無明顯差異。綜合考慮，選定稀乙醇為提取溶劑。同時對稀乙醇超聲提取時間進行了考察，結果1 h即可將樣品中淫羊藿苷基本提取完全。

[1]YBZ01792009．國家食品藥品監督管理局標準[S]．

[2]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2010：306．

Determination of Icariin in Yanghuo Sanqi Capsules by Modified HPLC

Zheng Xiaoping
(Chongqing Institute for Food and Drug Control,Chongqing,China 401121)

Objective To provide more effective HPLC method for the quality control of Yanghuo Sanqi Capsules by improving the method for content determination of icariin．Methods Agilent C18column(150 mm×4．6 mm，5 m)was used with the mobile phase of acetonitrile -0．05% phosphoric acid(26∶74)at the flow rate of 1．0 mL／min．The detection wavelength was 270 nm and the column temperature was 30℃．Results Icariin in Yanghuo Sanqi Capsules could be well separated，and the calibration curve was linear in the range of 0．514-6．616 μg(r=0．999 7)．The average recovery was 98．36% with RSD of 1．76%(n=6)．Conclusion This method is accurate，rapid，simple and reproducible，and can be used for the qualitative analysis of icariin in Yanghuo Sanqi Capsules．

Yanghuo Sanqi Capsules;icariin;HPLC;content determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)21-0117-02

2015-05-13)