氣相色譜法測定胃痛寧片中小茴香油含量

馬 麗，譚 華，周艷玲

（1．河北省承德市食品藥品檢驗檢測中心，河北 承德 067000； 2．承德新愛民制藥有限公司，河北 承德 067000）

氣相色譜法測定胃痛寧片中小茴香油含量

馬 麗1，譚 華2，周艷玲2

（1．河北省承德市食品藥品檢驗檢測中心，河北 承德 067000； 2．承德新愛民制藥有限公司，河北 承德 067000）

目的建立定量測定胃痛寧片中小茴香油含量的氣相色譜內標法。方法 DB-FFAP毛細管柱（30 m×0．32 mm，0．25 m），柱溫為145℃，進樣口溫度為180℃，FID檢測器溫度為230℃，載氣為高純氮，體積流量為0．8 mL／min，空氣體積流量為400 mL／min，氫氣體積流量為35 mL／min。結果小茴香油中主要成分反式茴香腦質量濃度在0．002 189～0．035 03 g／L范圍內與峰面積呈良好線性關系，平均加樣回收率為 100．12%，RSD為0．47%；對 14批次樣本測定了小茴香油的含量，含量差異極大，測定結果為每片含 0～0．147 4 mg。結論該法可有效監(jiān)控胃痛寧片中小茴香油的含量，將進一步完善胃痛寧片質量控制。

氣相色譜法；胃痛寧片；小茴香油；反式茴香腦；水楊酸甲酯；含量測定

胃痛寧片由蒲公英提取物、氫氧化鋁、甘草干浸膏、天仙子浸膏、龍膽粉、小茴香油(取小茴香，用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，即得)組方，具有清熱燥濕、理氣和胃、制酸止痛的功效，用于濕熱互結所致胃、十二指腸潰瘍，胃炎，癥見胃痙痛，胃酸過多等[1-2]。標準己有對甘草干浸膏和龍膽粉的薄層鑒別，蒲公英浸膏和氫氧化鋁的含量測定，但目前未見有對該制劑小茴香油測定的報道。為更好地控制該制劑質量，參考文獻[3-6]，本試驗中采用氣相色譜內標法測定胃痛寧片小茴香油中主要成分反式茴香腦的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 7890A型氣相色譜儀（美國 Agilent公司），包括 FID檢測器，CTC自動進樣器，7890A型色譜工作站；C9860A型超聲波清洗儀（天津科貝爾光電技術有限公司，500 W，40 kHz）；XS105DU型分析天平（梅特勒-托利多有限公司）；UMV-2型多管漩渦混合器(北京優(yōu)晟聯合科技有限公司)。反式茴香腦對照品（批號為 11835-201102，含量以 99．7%計），水楊酸甲酯對照品（批號為 110707-201112，含量以 99．4計）均由中國藥品生物制品檢定所提供；乙酸乙酯（天津光復科技有限公司，批號為 20141110）；胃痛寧片來源于廠家及市場購買（A廠，批號分別為140701，140702，140703，140704，140705，141001，141002，141003，141004，140901，130602；B廠，批號為20140601；C廠，批號分別為140201，140202）。

2 方法與結果

2．1 色譜條件

色譜柱：DB-FFAP毛細管柱（30 m×0．32 mm，0．25 μm）；檢測器：火焰離子化檢測器(FID)；載氣：高純氮氣；進樣方式：分流進樣；分流比：10∶1；進樣量：1 μL；柱溫：145℃；進樣口溫度180℃；檢測器溫度：230℃；體積流量：0．8 mL／min，空氣體積流量：400 mL／min，氫氣體積流量：35 mL／min。

2．2 溶液制備

精密稱取反式茴腦對照品12．28 mg，置50 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密稱取水楊酸甲酯對照品62．48 mg，置200 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解稀釋至刻度，搖勻，作為內標溶液。取本品20片，除去包衣，研細，混勻，稱取約1．0 g，精密稱定，置25 mL容量瓶中，精密加入內標溶液1 mL，加乙酸乙酯約20 mL，密塞，渦漩30 s，超聲處理30 min，放至室溫，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，0．45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按胃痛寧片生產方法制備不含小茴香油的空白樣品，同供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。2．3 方法學考察

專屬性試驗：分別吸取2．2項下3種溶液及樣品制備用溶劑（乙酸乙酯）各1 μL注入氣相色譜儀測定。結果在與反式茴香腦相應色譜峰保留時間處，陰性對照品溶液無色譜峰出現，對測定無干擾(見圖1)。

圖1 氣相色譜圖

線性關系考察:精密量取反式茴香腦對照品溶液 0．25，0．50，1．00，2．00，4．00 mL，分別置25 mL容量瓶中，精密加入內標溶液1．0 mL，加乙酸乙酯稀釋至刻度。按擬訂色譜條件測定，記錄色譜圖。以對照品的質量濃度（X，g／L）為橫坐標、對照品與內標物峰面積比（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程 Y= 0．008 134 9 X+0．000 115 97，r=0．999 94(n=5)。結果表明，反式茴香腦質量濃度在0．002 189～0．035 03 g／L范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗：取同一對照品溶液，連續(xù)進樣測定6次，以反式茴香腦與內標峰面積的比值計算 RSD。結果的 RSD為0．8%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，分別于制備后 0，2，4，8，12，16，20，24 h時測定，以反式茴香腦與內標峰面積的比值計算RSD。結果的 RSD為0．5%，表明供試品溶液在24 h內基本穩(wěn)定。

重復性試驗：取同一樣品6份，按供試品制備方法制備，進樣測定。結果反式茴香腦含量的平均值為每片含0．068 5 mg，RSD為1．0%(n=6)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：精密稱取己知含量的同一樣品9份，每份約1 g，分為低、中、高 3組，每組 3份，分別精密加入對照品溶液0．8，1．0，1．2 mL，按2．2項下制備供試品溶液，測定，計算回收率。結果見表1。

2．4 樣品含量測定

取14批胃痛寧片樣品，按2．2項下方法制備供試品溶液，按擬訂方法進樣測定，根據色譜圖峰面積，以內標校正因子計算樣品含量。結果見表2。

表1 反式回香腦加樣回收試驗結果（n=9)

表2 樣品含量測定結果（mg／片）

3 討論

校正因子測定：精密量取對照品貯備液1 mL，置25 mL容量瓶中；精密加入內標溶液1 mL，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，進樣，計算校正因子。

提取方法選擇：考察了不同超聲處理時間對提取效果的影響，結果表明，短于30 min時，隨超聲時間延長反式茴香腦含量增加，但超聲超過30 min后含量不再有明顯增加，最后確定采用渦漩30 s，超聲處理（500 W，40 kHz）30 min。

色譜條件選擇：選用了DB-FFAP，HP-INNOWax，Dimension PEG-20M 3根色譜柱進行試驗，結果各組分出峰順序一致，分離度均達到要求；DB-FFAP保留時間相比更適宜，分離度良好。比較了不同分流比的出峰情況，分流比過小，溶劑峰過大，影響內標峰形，分流比過大，因反式茴香腦含量較低，靈敏度下降，故認為10∶1的分流比更理想。

內標選擇：對比了外標法測定小茴香油的含量，結果的 RSD較大；故本試驗摸索了用內標法進行測定，結果精密度明顯提高。本試驗中選取了水楊酸甲酯和3-環(huán)己丙酸作為內標，依法測試，結果3-環(huán)己丙酸保留時間較長，而水楊酸甲酯與反式茴香腦能達到較好的分離度，且保留時間理想。本試驗在前處理步驟即加入內標，亦可以校正前處理過程導致的誤差。

含量測定結果分析：14批小茴香油含量測定結果為每片0～0．147 2 mg，差異明顯。小茴香藥材采收后隨貯存時間延長，其揮發(fā)油含量降低，如企業(yè)使用陳舊藥材投料可能會影響其含量；小茴香中揮發(fā)油含量容易受環(huán)境影響，如貯存溫度高，揮發(fā)油亦有流失。上述因素都可能造成主要成分很低甚至為0，因此難以保證藥品質量，對胃痛寧片中小茴香油進行定量指標的確定非常必要。同時，也應督促生產廠家購買藥材或投料前提前對小茴香中揮發(fā)油含量進行測定，掌握小茴香藥材質量。本試驗中用內標定量測定小茴香油的含量，前處理簡便，方法專屬，重現性好，具有較強實用性，對該品種質量控制有一定的借鑒作用。

[1]WS3-B-3287-98，中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑(第十七冊)[S]．

[2]YBZ00612005，國家食品藥品監(jiān)督管理局標準（試行）[S]．

[3]吳玫涵，聶凌云．氣相色譜-質譜法分析不同產地小茴香藥材揮發(fā)油成分[J]．藥物分析雜志，2001，21(6):415-418．

[4]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010：51．

[5]樓之岑，秦 波．常用中藥材品種整理和質量研究（第6冊）[M]．北京：北京大學醫(yī)學出版社，2003：549-569．

[6]帕提古麗·馬合木提，高 莉．時間對小茴香揮發(fā)油成分的影響[J]．食品科學，2005，26（11）：190-191．

Determination of Fennel Oil in Weitongning Tablets by GC

Ma Li1,Tan Hua2,Zhou Yanling2
（1．Chengde Institute for Food and Drug Control,Chengde,Hebei,China 067000; 2．Chengde Xinaimin Pharmaceuticai Co,Hebei Normal University, Chengde,Hebei,China 067000)

Objective To establish a GC internal reference method for the determination of fennel oil in Weitongning Tablets．M ethods DB-FFAP Capillary column(30 mm×0．32 mm,0．25 μm)at 145℃;the injection entrance temperature was 180℃ and FID detector temperature was 230℃;high purity nitrogen was used as carrier gas at 0．8 mL／min flow．The air flow was 400 mL／min and the hydrogen was 35 mL／min．Results The trans-anethole,which was the main component of fennel oil,indicated a great linear range of between 0．002 189-0．035 03 g／L and the recovery rate was 100．12%，RSD was 0．47%．The contents of fennel oil were 0-0．147 4 mg per pill in 14 batches of Weitongning Tablets．Conclusion The method is efficient to control the content of fennel oil and could improve the quality control of Weitongning Tablets．

GC;Weitongning Tablets;fennel oil;trans-anethole;methyl salicylate;content determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)21-0127-03

馬麗，女，副主任藥師，主要從事藥品檢驗工作，（電話）0314-2251948（電子信箱）cdyjml＠sina．com。

2015-05-27)