反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定正柴胡飲合劑中橙皮苷和芍藥苷含量

楊仕林，王雨來

（1．湖北省陽新縣人民醫(yī)院，湖北 黃石 435200； 2．湖北省黃石市中心醫(yī)院·湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院，湖北 黃石 435000）

反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定正柴胡飲合劑中橙皮苷和芍藥苷含量

楊仕林1，王雨來2

（1．湖北省陽新縣人民醫(yī)院，湖北 黃石 435200； 2．湖北省黃石市中心醫(yī)院·湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院，湖北 黃石 435000）

目的建立同時(shí)測(cè)定正柴胡飲合劑中橙皮苷和芍藥苷含量的反相高效液相色譜（RP-HPLC）法。方法采用超聲提取的方法，色譜柱為phenomenex-ODS柱(250 mm×4．60 mm，5 m)，柱溫為30～35℃，流動(dòng)相為乙腈-1 mol／L磷酸溶液（15∶85），橙皮苷和芍藥苷的檢測(cè)波長(zhǎng)分別為283 nm和230 nm，流速為0．8～1．0 mL／min。結(jié)果橙皮苷進(jìn)樣量在0．021 99～4．420 g（r=0．999 9）范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率為95．00%，RSD為4．64%；芍藥進(jìn)樣量在0．201 0～1．002 3 g（r=0．999 9）范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率為98．04%，RSD為3．60%。結(jié)論該法操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)靈敏，結(jié)果準(zhǔn)確，對(duì)于正柴胡飲合劑的質(zhì)量控制具有非常重要的作用和意義。

反相高效液相色譜法；正柴胡飲合劑；橙皮苷；芍藥苷

正柴胡飲合劑為衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)收載品種，具有一定的質(zhì)量控制方法，但尚待完善。筆者采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法同時(shí)測(cè)定正柴胡飲合劑中橙皮苷和芍藥苷的含量[1]，以期為完善藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

LC-2010A型高效液相色譜儀(日本島津公司)；自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)KQ-250B型超聲波清洗器，功率為250 W，頻率為40 kHz；UV-2450型島津紫外分光光度計(jì)；Lcsolution Version 1．11 SP1色譜數(shù)據(jù)工作站。甲醇、乙腈為高效液相色譜淋洗劑；磷酸、乙醇為分析純；芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)為07369912），橙皮苷對(duì)照品(批號(hào)為110721-200211)均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(供含量測(cè)定用)；正柴胡飲合劑(濟(jì)南民生大藥房有限公司，批號(hào)為130901)。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：phenomenex-ODS C18柱(250 mm×4．60 mm，5 μm)；柱溫：30～35℃；流動(dòng)相：乙腈-1 mol／L磷酸溶液（15∶85）；檢測(cè)波長(zhǎng)：橙皮苷和芍藥苷分別為283 nm和230 nm；流速：0．8～1．0 mL／min；進(jìn)樣量：20 μL。芍藥苷峰的理論板數(shù)不低于5 000。

2．2 溶液制備

采用五氧化二磷將芍藥苷對(duì)照品減壓干燥，精密稱量5 mg，置50 mL容量瓶中，加入乙醇進(jìn)行溶解和稀釋，加水至刻度，搖勻，得對(duì)照品溶液。精密量取樣品50 mL，置100 mL具塞錐形瓶，密封，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，冷卻至室溫，稱定，用稀乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，0．45 μm微膜過濾，即得供試品溶液。按處方制備陰性正柴胡飲合劑，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別吸取對(duì)照品溶液1，2，3，4，5 mL，置10 mL容量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，按擬訂色譜條件測(cè)定，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程橙皮苷為 A=1．655×106X+9 585．85，芍藥苷為A=788 525X-2 513．4。結(jié)果表明，進(jìn)樣量線性范圍橙皮苷在0．021 99～4．420 μg（r=0．999 9），芍藥苷在0．201 0～1．002 3 μg（r=0．999 9）。

專屬性試驗(yàn)：按擬訂色譜條件測(cè)定，可見陰性對(duì)照品溶液在橙皮苷和芍藥苷位置上無色譜峰，對(duì)測(cè)定無干擾。色譜圖見圖1和圖2。

圖1 橙皮苷高效液相色譜圖

圖2 芍藥苷高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn)：取對(duì)照品溶液注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果，橙皮苷和芍藥苷峰面積的 RSD分別為0．8%和2．01%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于0，1，3，5，9，12 h時(shí)依法測(cè)定。結(jié)果，橙皮苷和芍藥苷峰面積的 RSD分別為1．8%和4．00%（n=6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取50 mL樣品，共5份，分別置100 mL容量瓶中，精密加入適量橙皮苷對(duì)照品和1 mL芍藥苷對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為0．901 g／L），按供試品溶液的制備方法處理，在擬訂色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 橙皮苷和芍藥苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=5）

2．4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定橙皮苷和芍藥苷含量。結(jié)果批號(hào)為131001，131002，131003的樣品中橙皮苷含量分別為1．695 2，1．689 8，1．708 2 g／L；芍藥苷含量分別為2．901 2，2．899 3，2．997 2 g／L。

3 討論

中藥中所含化學(xué)成分的綜合作用是決定藥效的重要因素，建立中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)對(duì)其進(jìn)行定性鑒別，能充分反映藥品的內(nèi)在品質(zhì)，為藥物使用提供指導(dǎo)[2-4]。近年來，隨著色譜分析技術(shù)的進(jìn)一步提高，可完成中藥中多種成分含量的測(cè)定，同時(shí)可對(duì)同一種藥材中不同性質(zhì)的成分或制劑指標(biāo)進(jìn)行測(cè)量[5-8]，中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的含量測(cè)定變得更簡(jiǎn)便、快速和全面[9-10]。本研究中，采用 RPHPLC法同時(shí)測(cè)定正柴胡飲合劑橙皮苷和芍藥苷的含量，具有操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)靈敏，結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)勢(shì)，對(duì)于正柴胡飲合劑的質(zhì)量控制具有非常重要的作用和意義。

[1]呂光華，程世瓊，陳金泉，等．HPLC測(cè)定川芎藥材和飲片中游離阿魏酸和總阿魏酸的含量及其質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)[J]．中國(guó)中藥雜志，2010，12(2):1 259-1 260．

[2]胡曉蓮，張 華．大孔吸附樹脂在中藥研究中應(yīng)用概況[J]．浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，10(6):323-325．

[3]吳家顯，陳新蘭，歐陽松山．高效液相色譜法測(cè)定五香暖胃顆粒中橙皮苷含量的研究[J]．中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2011，7(3):183-184．

[4]Sun Y，Cai TT，Zhou XB．Saikosaponin a inhibits the proliferation and ac-tivation of T cells through cell cycle arrest and induction of apoptosis[J]．International Journal of Immunopharmacology，2009，11(4):1 078-1 079．

[5]黃島平，陳建紅，黃 艷，等．廣西產(chǎn)柑桔果皮中橙皮苷含量的測(cè)定研究[J]．科技創(chuàng)業(yè)家，2013，9(10):273-274．

[6]唐洪梅，何嘉侖，廖小紅，等．HPLC法測(cè)定腸激安提取物中芍藥苷的含量[J]．中國(guó)藥房，2012，23(3):232-233．

[7]Chen L，Qi J，Chang YX，et al．Identification and determination ofthe major constituents in Traditional Chinese Medicinal formulaDanggui-Shaoyao-San by HPLC-DAD-ESI-MS／MS[J]．Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2012，12(5):59-60．

[8]李 霞，潘海軍，趙京云，等．正柴胡飲顆粒微生物限度檢查法的建立[J]．中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志．2012，10(5):101-102．

[9]Dai Y，Xue L，Dou C，et al．Metabolomics study on theanti-depression effect of xiaoyaosan on rat model of chronicunpredictable mild stress[J]．Journal of Ethnobiology，2010，10(8):109-110．

[10]王靜靜，蔣 俊，朱粉霞，等．HPLC法同時(shí)測(cè)定膽木及其制劑中酚酸和生物堿類成分[J]．中成藥，2012，5(12):1 021-1 022．

Simultaneous Determination of Hesperidin and Paeoniflor in Radix Bupleuri Decoction by RP-HPLC

Yang Shilin1,Wang Yulai2
(1．Yangxin County of Hubei Province People′s Hospital,Huangshi,Hubei,China 435200; 2．Huangshi Central Hospital Affiliated Hospital of Hubei College of Science and Engineering,Huangshi,Hubei,China 435000)

Objective To establish the simultaneous determination of hesperidin and paeoniflorin in Radix Bupleuri Decoction by RPHPLC．Method By using the method of ultrasonic extraction,and the phenomenex-ODS chromatographic column(250 mm×4．60 mm, 5 μm),the column temperature was 30-35℃,the mobile phase was-1 mL／L phosphoric acid solution (15∶85),the detection wavelength of hesperidin and paeoniflorin were 283 nm and 230 nm,and the flow rate was 0．8-1．0 mL／min．Results In 0．021 99-4．420 μg (r=0．999 9)range,the linear relationship of hesperidin was good,the average recovery was 95．00%,RSD was 4．64%;in 0．201 0-1．002 3 μg (r=0．999 9)range,the linear relationship of paeoniflorin was good,the average recovery was 98．04%,RSD was 3．60%．Conclusion This method has the advantages of simple operation,sensitive detection,accurate results,and has an important role and significance of the quality control of Radix Bupleuri Decoction．

RP-HPLC method;Radix Bupleuri Decoction;hesperidin;paeoniflorin

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)21-0121-03

楊仕林(1972-)，男，湖北黃石人，大學(xué)本科，副主任藥師，主要從事醫(yī)院藥學(xué)工作，（電子信箱）119139247＠qq．com；王雨來(1972-)，男，湖北黃石人，大學(xué)本科，副主任藥師，主要從事臨床藥學(xué)及臨床藥師工作，（電話）0714-6261069（電子信箱）rulerwang1234＠163．com。

2015-02-05)