反相高效液相色譜法同時測定正柴胡飲合劑中橙皮苷和芍藥苷含量

楊仕林，王雨來

（1．湖北省陽新縣人民醫院，湖北 黃石 435200； 2．湖北省黃石市中心醫院·湖北理工學院附屬醫院，湖北 黃石 435000）

反相高效液相色譜法同時測定正柴胡飲合劑中橙皮苷和芍藥苷含量

楊仕林1，王雨來2

（1．湖北省陽新縣人民醫院，湖北 黃石 435200； 2．湖北省黃石市中心醫院·湖北理工學院附屬醫院，湖北 黃石 435000）

目的建立同時測定正柴胡飲合劑中橙皮苷和芍藥苷含量的反相高效液相色譜（RP-HPLC）法。方法采用超聲提取的方法，色譜柱為phenomenex-ODS柱(250 mm×4．60 mm，5 m)，柱溫為30～35℃，流動相為乙腈-1 mol／L磷酸溶液（15∶85），橙皮苷和芍藥苷的檢測波長分別為283 nm和230 nm，流速為0．8～1．0 mL／min。結果橙皮苷進樣量在0．021 99～4．420 g（r=0．999 9）范圍內與峰面積線性關系良好，平均回收率為95．00%，RSD為4．64%；芍藥進樣量在0．201 0～1．002 3 g（r=0．999 9）范圍內與峰面積線性關系良好，平均回收率為98．04%，RSD為3．60%。結論該法操作簡便，檢測靈敏，結果準確，對于正柴胡飲合劑的質量控制具有非常重要的作用和意義。

反相高效液相色譜法；正柴胡飲合劑；橙皮苷；芍藥苷

正柴胡飲合劑為衛生部藥品標準收載品種，具有一定的質量控制方法，但尚待完善。筆者采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法同時測定正柴胡飲合劑中橙皮苷和芍藥苷的含量[1]，以期為完善藥品質量標準提供參考，現報道如下。

1 儀器與試藥

LC-2010A型高效液相色譜儀(日本島津公司)；自動進樣系統KQ-250B型超聲波清洗器，功率為250 W，頻率為40 kHz；UV-2450型島津紫外分光光度計；Lcsolution Version 1．11 SP1色譜數據工作站。甲醇、乙腈為高效液相色譜淋洗劑；磷酸、乙醇為分析純；芍藥苷對照品（批號為07369912），橙皮苷對照品(批號為110721-200211)均由中國藥品生物制品檢定所提供(供含量測定用)；正柴胡飲合劑(濟南民生大藥房有限公司，批號為130901)。

2 方法與結果

2．1 色譜條件

色譜柱：phenomenex-ODS C18柱(250 mm×4．60 mm，5 μm)；柱溫：30～35℃；流動相：乙腈-1 mol／L磷酸溶液（15∶85）；檢測波長：橙皮苷和芍藥苷分別為283 nm和230 nm；流速：0．8～1．0 mL／min；進樣量：20 μL。芍藥苷峰的理論板數不低于5 000。

2．2 溶液制備

采用五氧化二磷將芍藥苷對照品減壓干燥，精密稱量5 mg，置50 mL容量瓶中，加入乙醇進行溶解和稀釋，加水至刻度，搖勻，得對照品溶液。精密量取樣品50 mL，置100 mL具塞錐形瓶，密封，稱定質量，超聲處理30 min，冷卻至室溫，稱定，用稀乙醇補足減失的質量，搖勻，過濾，0．45 μm微膜過濾，即得供試品溶液。按處方制備陰性正柴胡飲合劑，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2．3 方法學考察

線性關系考察：分別吸取對照品溶液1，2，3，4，5 mL，置10 mL容量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，按擬訂色譜條件測定，以峰面積(Y)為縱坐標、進樣量（X，μg）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程橙皮苷為 A=1．655×106X+9 585．85，芍藥苷為A=788 525X-2 513．4。結果表明，進樣量線性范圍橙皮苷在0．021 99～4．420 μg（r=0．999 9），芍藥苷在0．201 0～1．002 3 μg（r=0．999 9）。

專屬性試驗：按擬訂色譜條件測定，可見陰性對照品溶液在橙皮苷和芍藥苷位置上無色譜峰，對測定無干擾。色譜圖見圖1和圖2。

圖1 橙皮苷高效液相色譜圖

圖2 芍藥苷高效液相色譜圖

精密度試驗：取對照品溶液注入液相色譜儀，重復進樣5次。結果，橙皮苷和芍藥苷峰面積的 RSD分別為0．8%和2．01%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0，1，3，5，9，12 h時依法測定。結果，橙皮苷和芍藥苷峰面積的 RSD分別為1．8%和4．00%（n=6），表明供試品溶液在12 h內穩定。

加樣回收試驗：精密量取50 mL樣品，共5份，分別置100 mL容量瓶中，精密加入適量橙皮苷對照品和1 mL芍藥苷對照品溶液（質量濃度為0．901 g／L），按供試品溶液的制備方法處理，在擬訂色譜條件下進樣測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 橙皮苷和芍藥苷加樣回收試驗結果（n=5）

2．4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測定橙皮苷和芍藥苷含量。結果批號為131001，131002，131003的樣品中橙皮苷含量分別為1．695 2，1．689 8，1．708 2 g／L；芍藥苷含量分別為2．901 2，2．899 3，2．997 2 g／L。

3 討論

中藥中所含化學成分的綜合作用是決定藥效的重要因素，建立中藥質量標準時對其進行定性鑒別，能充分反映藥品的內在品質，為藥物使用提供指導[2-4]。近年來，隨著色譜分析技術的進一步提高，可完成中藥中多種成分含量的測定，同時可對同一種藥材中不同性質的成分或制劑指標進行測量[5-8]，中藥質量標準的含量測定變得更簡便、快速和全面[9-10]。本研究中，采用 RPHPLC法同時測定正柴胡飲合劑橙皮苷和芍藥苷的含量，具有操作簡便，檢測靈敏，結果準確等優勢，對于正柴胡飲合劑的質量控制具有非常重要的作用和意義。

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[5]黃島平，陳建紅，黃 艷，等．廣西產柑桔果皮中橙皮苷含量的測定研究[J]．科技創業家，2013，9(10):273-274．

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Simultaneous Determination of Hesperidin and Paeoniflor in Radix Bupleuri Decoction by RP-HPLC

Yang Shilin1,Wang Yulai2
(1．Yangxin County of Hubei Province People′s Hospital,Huangshi,Hubei,China 435200; 2．Huangshi Central Hospital Affiliated Hospital of Hubei College of Science and Engineering,Huangshi,Hubei,China 435000)

Objective To establish the simultaneous determination of hesperidin and paeoniflorin in Radix Bupleuri Decoction by RPHPLC．Method By using the method of ultrasonic extraction,and the phenomenex-ODS chromatographic column(250 mm×4．60 mm, 5 μm),the column temperature was 30-35℃,the mobile phase was-1 mL／L phosphoric acid solution (15∶85),the detection wavelength of hesperidin and paeoniflorin were 283 nm and 230 nm,and the flow rate was 0．8-1．0 mL／min．Results In 0．021 99-4．420 μg (r=0．999 9)range,the linear relationship of hesperidin was good,the average recovery was 95．00%,RSD was 4．64%;in 0．201 0-1．002 3 μg (r=0．999 9)range,the linear relationship of paeoniflorin was good,the average recovery was 98．04%,RSD was 3．60%．Conclusion This method has the advantages of simple operation,sensitive detection,accurate results,and has an important role and significance of the quality control of Radix Bupleuri Decoction．

RP-HPLC method;Radix Bupleuri Decoction;hesperidin;paeoniflorin

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)21-0121-03

楊仕林(1972-)，男，湖北黃石人，大學本科，副主任藥師，主要從事醫院藥學工作，（電子信箱）119139247＠qq．com；王雨來(1972-)，男，湖北黃石人，大學本科，副主任藥師，主要從事臨床藥學及臨床藥師工作，（電話）0714-6261069（電子信箱）rulerwang1234＠163．com。

2015-02-05)