果核藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

陳 丹，史蕾，李 柯，李若存

(1．湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 湘潭 411102； 2．湖南省中醫(yī)藥研究院，湖南 長沙 410013)

果核藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

陳 丹1，史蕾2，李 柯2，李若存2

(1．湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 湘潭 411102； 2．湖南省中醫(yī)藥研究院，湖南 長沙 410013)

目的建立 果核藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為該藥用植物資源的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。方法采用薄層色譜（TLC）法、高效液相色譜（HPLC）法、水分測定法、灰分測定法及浸出物測定法。結(jié)果果核藥材沒食子酸薄層色譜中，在與對照品溶液同一位置顯相同顏色的斑點(diǎn)。HPLC法定量分析中，沒食子酸進(jìn)樣量線性范圍為0．336～2．016 g（r=0．999 9），平均回收率為103．78%，RSD為0．78%（n=6）。結(jié)論該方法簡便、準(zhǔn)確、可靠、重復(fù)性好，可作為 果核藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

果核；沒食子酸；薄層色譜法；高效液相色譜法；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

果核為漆樹科植物 果 Mangifera indica L．的果核，分布于熱帶與亞熱帶地區(qū)，我國廣東、廣西、海南、云南為主要產(chǎn)區(qū)，性味酸澀、平，功能為清熱消滯，用于疝氣、食滯； 果核中含大量多酚類物質(zhì)，對胃腸道和呼吸道感染菌株在體內(nèi)外均有較好的抗菌作用及良好的安全性，主要成分包括沒食子酸、沒食子乙酯、沒食子甲酯、間-二沒食子酸甲酯、丁二酸單甲酯和對羥基苯甲酸[1-2]。其中，沒食子酸為 果核中的主要有效成分，具有抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抗氧化和細(xì)胞毒性等作用[3-5]。 果核在內(nèi)蒙古、廣東、廣西應(yīng)用較廣泛，其標(biāo)準(zhǔn)收載于《廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)》，對 果核藥材的來源、性狀、性味、功能與主治、用法與用量、貯藏進(jìn)行了規(guī)定，但未建立定性定量指標(biāo)。本試驗(yàn)中考察了 果核中沒食子酸的薄層鑒別、含量測定及一些理化指標(biāo)，制訂了 果核的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為更好地開發(fā)利用其資源和臨床用藥提供質(zhì)量控制依據(jù)。

1 儀器與試藥

Series 200型高效液相色譜儀(Perkin Elmer公司)；AE-240型電子分析天平；超聲波清洗器（武漢恒信世紀(jì)科技有限公司）；Gamag TLC Visualizer型薄層掃描儀（大連依利特分析儀器有限公司）；定量毛細(xì)管（美國 Drummond公司）。 果核（廣東眾康中藥飲片有限公司，批號(hào)為20130916；廣東康美藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為 131010141；廣東茂名市俊幫中藥飲片有限公司，批號(hào)為 20131101；湖南上藥九旺醫(yī)藥有限公司，批號(hào)為20120101， 20120314，20120926），經(jīng)湖南省中醫(yī)藥研究院李若存研究員鑒定為漆樹科植物 果 Mangifera indica L．的果核；沒食子酸對照品（批號(hào)為110831-200302，中國藥品生物制品檢定所）；硅膠G（青島海浪硅膠干燥廠）；甲醇、乙腈（色譜純，湖南匯虹試劑有限公司）；其他試劑均為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2．1 薄層色譜（TLC）鑒別

藥材：取 果核藥材（批號(hào)為20120101）粉末1 g，共2份，加乙醇20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液濃縮至2 mL，作為供試品溶液。另取沒食子酸對照品，加甲醇制成每1 mL含0．5 mg的溶液，作為對照品溶液。照2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（6∶4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上分別顯相同顏色的斑點(diǎn)[6]，色譜圖見圖1 A。

果核不同部位：分別取 果核仁、 果核藥材及 果核殼粉末（批號(hào)為20120101）各1 g，加乙醇20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液濃縮至2 mL，作為供試品溶液。照2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液及藥材鑒別項(xiàng)下對照品溶液各5 μL，方法同藥材鑒別項(xiàng)，結(jié)果見圖1 B。

不同產(chǎn)地 果核：取 果核藥材粉末（批號(hào)分別為20130916，131010141，20131101，20120101，20120314，20120926）各 1 g，加乙醇20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液濃縮至2 mL，作為供試品溶液。照《中國藥典（一部）》附錄ⅥB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液及藥材鑒別項(xiàng)下對照品溶液各5 μL，方法同藥材鑒別項(xiàng)，結(jié)果見圖1 C。

圖1 果核藥材薄層色譜圖

2．2 沒食子酸含量測定

2．2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Ultimate LP-C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0．05%磷酸溶液（3∶97）；柱溫：25℃；流速：1．0 mL／min；檢測波長：270 nm。理論板數(shù)以沒食子酸峰計(jì)應(yīng)不低于5 000，在此條件下的色譜圖見圖2。

圖2 果核藥材高效液相色譜圖

2．2．2 溶液制備

取沒食子酸對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 mL含0．1 mg的溶液，即得對照品溶液。取 果核藥材粉末（批號(hào)為20120101，過4號(hào)篩）約0．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。以甲醇溶液為陰性對照品溶液。

在“一帶一路”倡議助推我國圖書出版業(yè)產(chǎn)業(yè)持續(xù)升級(jí)、合作模式不斷創(chuàng)新，帶動(dòng)外國作家創(chuàng)作與講述中國故事與中國主題并傳播中國文化的過程中，外國作家及作品對“一帶一路”文化進(jìn)行現(xiàn)代闡釋的積極意義不言而喻。

2．2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取質(zhì)量濃度為0．168 g／L的沒食子酸對照品溶液2，4，6，8，10，12 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積。以進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=1 772．864 0 X-10．192 8，r=0．999 9（n=6）。結(jié)果表明，沒食子酸進(jìn)樣量在0．336～2．016 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果的 RSD為0．42%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：分別精密吸取同一供試品溶液10 μL，按上述色譜條件于0，1，2，4，8，12，24 h時(shí)進(jìn)樣測定峰面積。結(jié)果的 RSD為1．02%(n=7)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取 果核藥材粉末（批號(hào)為 20120101，過4號(hào)篩）約0．5 g，共6份，精密稱定，依法制備供試品溶液，精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，測定含量。結(jié)果的 RSD為0．62%（n=6），表明方法重復(fù)性好。

加樣回收試驗(yàn)：取沒食子酸含量為13．53 mg／g的 果核藥材粉末（批號(hào)為20120101，過4號(hào)篩）約 0．25 g，共 6份，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入沒食子酸對照品溶液（質(zhì)量濃度為3．45 g／L）1 mL和50%甲醇49 mL，按供試品溶液的方法制備，測定含量。結(jié)果見表1。

表1 沒食子酸加樣回試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2．2．4 樣品含量測定

2．3 不同藥用部位樣品測定

取 果核仁、 果核殼（批號(hào)為20120101），依法制備供試品溶液并測定含量，結(jié)果該批樣品的 果核仁和 果核殼中沒食子酸含量分別為1．26%和0．25%，核仁含量遠(yuǎn)高于核殼。

2．4 含量限定確定

根據(jù)4批樣品含量測定結(jié)果， 果核中沒食子酸含量最高1．70%，最低1．25%，平均1．48%（n=10）。考慮各種變動(dòng)因素，暫訂 果核中沒食子酸含量不得低于1．20%。

2．5 水分、總灰分和浸出物測定

照2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅨH水分測定法（第一法烘干法）、ⅨK灰分測定法、ⅩA浸出物測定法（以水為溶劑，冷浸法）[7]依法測定。結(jié)果2批樣品水分為9．9%和9．7%，總灰分為3．8%和3．9%，浸出物為18．7%和19．0%。各批次間差異不顯著，故該測定結(jié)果可作為測定 果核藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的參考依據(jù)。

3 討論

采用薄層色譜法可檢出 果核藥材中的主要成分沒食子酸，斑點(diǎn)清晰且方法簡便、快速、可行，故可作為 果核藥材的定性鑒別依據(jù)。

取沒食子酸對照品的50%甲醇溶液(0．168 g／L)，經(jīng)紫外掃描，在200～400 nm波長范圍內(nèi)記錄吸收光譜。結(jié)果沒食子酸在270 nm波長處有最大吸收，故采用270 nm作為檢測波長。

果核占 果總重的20%～60%，其中核仁占 果核總重的45%～75%，核殼（系 果種子的堅(jiān)硬外殼）占 果核總重的25% ～55%[8]。現(xiàn)行藥材標(biāo)準(zhǔn)收載的藥用部位為漆樹科植物 果的果核[9]。對 果核仁和核殼含量測定結(jié)果表明，核仁中沒食子酸的含量比核殼要高得多。故 果核中沒食子酸含量限度的確定，是以藥材標(biāo)準(zhǔn)的藥用部位為依據(jù)。

[1]廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳．廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)[M]．南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，1990：55．

[2]莫武桂，劉華鋼，鄭陳光，等． 果核提取物動(dòng)物體內(nèi)外的抗菌作用及安全性研究[J]．中國臨床新醫(yī)學(xué)，2009，2(8):779-782．

[3]謝曉艷，劉洪濤，張 吉，等．沒食子酸體外抗氧化作用的研究[J]．重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，36(3)：319-322．

[4]柯發(fā)敏，張開蓮．沒食子酸的研究進(jìn)展[J]．瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，34(4)：440-442．

[5]衛(wèi)智權(quán)，鄧家剛，閻 莉，等． 果苷對脂多糖誘導(dǎo)慢性炎癥的抗炎作用[J]．中藥藥理與臨床，2011，27(2):43-45．

[6]鐘振國，李學(xué)堅(jiān)，董明嬌，等．余甘子葉中的沒食子酸的定性定量分析[J]．時(shí)珍國醫(yī)國藥，2009，20(6):1 374-1 375．

[7]國家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄52-53，附錄62．

[8]Pitchaon Maisuthisakul，Michael HG．Antioxidant and tyrosinase inhibitory activity of mango seed kernel by product[J]．Food Chemistry，2009，117（2）：332．

[9]內(nèi)蒙古自治區(qū)衛(wèi)生廳．內(nèi)蒙古蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)[M]．赤峰:內(nèi)蒙古科技出版社，1987：402．

Quality Standard of Mango Nucler L．

Chen Dan1,Shi Leizhe2,Li Ke2,Li Ruocun2
(1．Xiangtan Vocational and Technical College,Xiangtan,Hunan,China 411102; 2．Hunan Academy of TCM,Changsha,Hunan,China 410013)

Objective To provide scientific basis for the utilization and development ofMango Nucler L．by establishing its quality control standard．Methods The bioactive constituents were analyzed by TLC and HPLC．Moisture,ash and the extracts of mango nucler were all determined．Results The TLC spots of Gallic acid had similar color with the control group at the same position．The results of HPLC quantitative analysis showed that the liner range of Gallic acid was 0．336～2．016 μg（r=0．999 9）,and the average recovery was 103．78%,RSD=0．78%(n=6)．Conclusion This method is convenient accurate reliable with good reproducibility,so it can be used to establish quality standard for the medicinal material．

Mango Nucler L．;gallic acid;TLC;HPLC;quality standard

R284.1；R282.71

A

1006-4931(2015)21-0117-03

陳丹（1982-）女，講師，研究方向?yàn)橹兴幮轮苿娮有畔洌﹜xw0915＠163．com；李柯，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幹苿┡c質(zhì)量控制，本文通訊作者，（電話）0731-88807491（電子信箱）17848689＠qq．com。

2014-08-29；

2015-05-26)