牛沙門氏菌病的實驗室診斷

牛沙門氏菌病的實驗室診斷

呂學思

(黑龍江省青年農場150050)

牛的沙門氏菌病比較嚴重，尤其是犢牛，可引起很高的發病率和死亡率。沙門氏菌病的臨床癥狀和剖檢變化沒有特異性，雖然可作為初步診斷的依據，但必須通過走患病動物進行病原菌分離或尸體剖檢做出確診。

1活菌計數

有腸炎癥狀的發病動物糞便排出大量病原菌，應進行活菌計數而非增菌培養。正因如此，應采取糞便樣品而不是棉拭子取樣，應在使用抗生素之前采樣。從口腔分泌物和血樣中也可能分到細菌，但這些樣品的可靠性不如糞便培養，并且操作中必須嚴格防止污染。死于沙門氏菌病的動物組織中含有大量的沙門氏菌，脾臟、肝臟以及肝、縱膈和支氣管的淋巴結細菌數量可超過106個/g。從回腸、盲腸、結腸壁和內容物以及相關淋巴結細菌量與此相近。樣品應取自腸和其他內臟器官，以區別于死于腸炎而無敗血癥的動物。流產動物應采取胎兒內容物、陰道黏液和胚胎絨毛葉樣本同樣活菌計數的結果比較可靠，因感染都柏林沙門氏菌而引起流產的動物的胚胎絨毛葉含菌量通常在108~1010個/g。通過細菌學檢查檢驗帶菌者比較困難，必須采取一種能區分“主動”帶菌者(持續排菌)和“被動”或“蓄伏攜帶者”(間歇排菌)的方法。在區分“主動”帶菌者方面，糞便樣品比拭子樣品更可靠一些，糞樣中沙門氏菌含量通常超過105個/g。一次分離到沙門氏菌并不能判定動物是帶菌者，只有至少3次糞樣檢測均陰性才可以判斷未感染，即便是這樣，一些“潛在攜帶者”和一些最終能清除感染但仍帶菌的動物還會被漏檢。分娩牛中采樣有一定的優勢，但也必須小心區分“被動攜帶者”。傳統方法是在屠宰時從膀胱、膽汁中采樣來確定帶菌者。然而，這些樣品中并非總是含有沙門氏菌，除非同時并發肝片吸蟲病，還應對消化道內容物和表皮淋巴結等多個組織進行檢測。當其他組織偽陰性時，還可從瓣胃壁、皺胃壁、瘤胃壁或支氣管淋巴結、肩胛淋巴結、咽后淋巴結等處分離沙門氏菌。

2細菌培養

一系列增菌技術和分離培養基可用于沙門氏菌的培養。這些培養基可選擇性促進沙門氏菌生長，而抑制雜菌生長，根據菌落形態和生化反應對細菌進行鑒定。培養基的選擇取決于分離沙門氏菌的環境，常常也取決于沙門氏菌分離培養專業人員。通常需要有多種液體增菌培養基和至少兩種的固體培養基才能保證大多數沙門氏菌血清型的分離。增菌培養基能滿足沙門氏菌生長的需要，但為了抑制其他雜菌的生長，需在培養基中加入化學物質、染料、抗生素和提高培養溫度。通常使用的培養基中都含有亞硒酸鈉、聯四硫酸鹽和亮綠、孔雀石綠等染料，沙門氏菌對這些物質相對具有一定的抗性。

3細菌鑒定

在經液體培養增菌后，可在固體選擇培養基上分離到沙門氏菌菌落，常用的選擇培養基有麥康凱瓊脂、亮綠瓊脂、去氧膽酸枸櫞酸瓊脂、EF-18、鉍亞硫酸鹽和沙門氏菌-志賀氏瓊脂。這些培養基是基于沙門氏菌對多種抗生素、膽鹽和染料具有一定的抗性，對其他雜菌有抑制作用，沙門氏菌菌落均不發酵乳糖和蔗糖，這點可與其他細菌相區別。近來有一些新技術用于沙門氏菌的診斷，包括免疫磁性分離技術(IMS)、PCR或熒光PCR技術，但這些技術目前還只限于一些研究機構使用。一旦分離到沙門氏菌，可通過生化反應鑒定到菌屬，有許多快速試劑盒可進行此類鑒定。可利用玻片和試管凝集試驗鑒定血清型。既然需要大量的血清型，這就需要各地實驗室的共同努力。

4血清型分類

諸如鼠傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌等重要血清型可進一步分類，常用的方法有噬菌體分型(鼠傷寒沙門氏菌有200種以上的噬菌體型，我國通常有20~30種存在，但在任何時候都只有一兩種噬菌體型占主導地位)、質粒分析和一系列分子技術，包括核糖體分型技術(rRNA基因限制性酶切圖譜)、PFGE(脈沖場電泳)、IS200分型(與針對沙門氏菌一個獨特的插入序列(IS200)的探針雜交后比較DNA限制性酶切圖譜)、DNA指紋分析技術(RFLP：限制片段長度多態性)和AFLP(擴增片段長度多態性分析)等。