復(fù)方黃根顆粒（無糖型）質(zhì)量標準研究*

唐德智，勞廣耀，楊 輝

(1．廣西壯族自治區(qū)南寧食品藥品檢驗所，廣西 南寧 530001； 2．廣西壯族自治區(qū)平樂縣中醫(yī)醫(yī)院，廣西 桂林 542400)

復(fù)方黃根顆粒（無糖型）質(zhì)量標準研究*

唐德智1，勞廣耀2，楊 輝1

(1．廣西壯族自治區(qū)南寧食品藥品檢驗所，廣西 南寧 530001； 2．廣西壯族自治區(qū)平樂縣中醫(yī)醫(yī)院，廣西 桂林 542400)

目的 建立復(fù)方黃根顆粒（無糖型）的質(zhì)量標準。方法 采用薄層色譜（TLC）法對方中葉下珠、黃芪進行定性鑒別；采用高效液相色譜法測定葉下珠中有效成分沒食子酸的含量。結(jié)果 TLC特征明顯，陰性無干擾，專屬性強；沒食子酸進樣量在0．252～2．264 χg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好(r=0．999 9，n=6)，平均加樣回收率為100．88%，RSD=1．78%（n=6）。結(jié)論 該標準可用于復(fù)方黃根顆粒（無糖型）的質(zhì)量控制。

復(fù)方黃根顆粒（無糖型）；薄層色譜法；高效液相色譜法；質(zhì)量標準

復(fù)方黃根顆粒（無糖型）是由廣西平樂縣中醫(yī)醫(yī)院根據(jù)傳統(tǒng)壯醫(yī)藥新研制開發(fā)的院內(nèi)制劑，主要由黃根、葉下珠、黃芪、絞股藍等中藥制成。其君藥黃根為茜草科植物三角瓣花 Prismatomeric connate Y．Z．Ruan的干燥根，具有祛瘀生新、利濕退黃的功效[1]254，臨床用于治療慢性乙型肝炎、脂肪肝、酒精性肝病所致食欲不振。葉下珠為大戟科植物葉下珠 Phyllanthusurinaria Linn．的干燥全草，具有平肝清熱、利水解毒的功效[1]89。動物試驗證明，葉下珠對乙型肝炎病毒有抑制作用，具有保護肝細胞及提高細胞免疫力作用，其中沒食子酸為主要活性成分，具有抗病毒作用。黃芪為豆科植物蒙古黃芪 Astragalus membra-naceus Bge．var．mongholicus (Bge．)Hsiao或膜莢黃芪 Astragalus membra-naceus(Fisch．)Bge．的干燥根，能增強淋巴細胞免疫功能，對細菌和病毒均有明顯抑制作用[2]。本試驗中用薄層色譜（TLC）法對方中葉下珠、黃芪進行鑒別，用高效液相色譜（HPLC）法測定制劑中沒食子酸含量，建立了可靠、準確、專屬性強的質(zhì)量控制標準。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；AE240型電子天平（瑞士梅特勒公司）；KQ-300型超聲波清洗器(江蘇昆山市超聲儀器有限公司)。沒食子酸對照品（批號為110831-200803），黃芪甲苷對照品（批號為110781-200613），葉下珠對照藥材（批號為121374-200401）均由中國藥品生物制品檢定所提供；復(fù)方黃根顆粒（無糖型，廣西平樂縣中醫(yī)院自制 ，批號為20120112，20120202，20120303，20120315，20120327，20120510，規(guī)格為每袋裝3 g）；硅膠G薄層板（青島海洋化工廠）；甲醇為色譜純，磷酸為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 定性鑒別

葉下珠[3]：取本品3 g，研細，加水15 mL使溶解，濾過，濾液用乙酸乙酯30 mL振搖提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取葉下珠對照藥材2 g，加75%乙醇20 mL，加熱品流30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水100 mL，煮沸30 min，濾過，濾液用乙酸乙酯30 mL振搖提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為對照藥材溶液。再取沒食子酸對照品，加甲醇制成每1 mL含0．5 mg的溶液，作為對照品溶液。再取陰性樣品(缺葉下珠的樣品)，按照供試品溶液的制備方法制備，即得陰性對照品溶液。吸取上述4種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-氯仿-丙酮-甲酸(8∶5∶7∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜和對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照品溶液無干擾。見圖1 A。

圖1 薄層色譜圖

黃芪[4]：取本品內(nèi)容物 3 g，研細，加甲醇 50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水15 mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用l%氧氧化鈉溶液洗滌2次，每次20 mL，棄去堿液，再加正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水液，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。再取陰性樣品(缺黃芪的樣品)，按照供試品溶液的制備方法制備，即得陰性對照品溶液。吸取上述溶液各5 μL，分別點于同一硅膠 G薄層板上，以正丁醇-醋酸 -水(4∶1∶5)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。見圖1 B。

2．2 含量測定[5-8]

2．2．1 色譜條件

色譜柱：Agilent Zorbax SB C18柱(250 mm×4．6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-0．1%磷酸（10∶90）；檢測波長：270 nm；流速：1．0 mL／min；柱溫：30℃；進樣量：10 μL。

2．2．2 溶液制備

精密稱取干燥至恒重的沒食子酸對照品12．58 mg，置50 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得0．2516 g／L對照品貯備液，精密吸取5 mL，置10 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取本品內(nèi)容物，混勻，研細，取約0．8 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50%甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min(功率300 W，頻率40 kHz)，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，用微孔濾膜（0．45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按質(zhì)量標準中的處方，按制備工藝制成缺葉下珠的陰性供試品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。

2．2．3 方法學(xué)考察

專屬性考察：分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，結(jié)果見圖2。結(jié)果陰性對照品溶液的色譜圖中，在沒食子酸保留時間的相應(yīng)位置上無沒食子酸峰出現(xiàn)，表明此方法專屬性強，陰性對照無干擾。

圖2 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密吸取2．2．2項下對照品貯備溶液1，3，5，7，9 mL，分別置10 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻。分取上述不同質(zhì)量濃度對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以進樣量為橫坐標、以峰面積為縱坐標進行線性回歸，回歸方程為 Y=3 069．2 X-4．669 5，r=0．999 9（n=5）。結(jié)果表明，沒食子酸進樣量在0．252～2．264 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗：精密吸取對照品溶液10 μL，重復(fù)進樣6次，測定沒食子酸峰面積。結(jié)果的 RSD為0．19%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取供試品溶液(批號為20120315)，分別在0，2，4，6，8，10，12，24 h進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為0．96% （n=8），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：取同一批號樣品（無糖型，批號為20120315），按2．2．2項下方法制備供試品溶液，分別測定，計算沒食子酸含量。結(jié)果平均含量為每袋10．95 mg，RSD為0．89%（n=5），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗：取已知沒食子酸含量的樣品（批號為20120315，每袋10．95 mg）粉末約0．4 g，共6份，精密稱定，分別精密加入一定量的沒食子酸對照品，按2．2．2項下制備供試品溶液，測定沒食子酸的含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 沒食子酸加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

2．2．4 樣品含量測定

取不同批號的樣品，依法制備供試品溶液。精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，按外標法以峰面積計算樣品中沒食子酸的含量。結(jié)果見表2。

表2 復(fù)方黃根顆粒（無糖型）含量測定結(jié)果（n=3）

3 討論

制劑中的君藥為黃根，但因制劑過程中提取工藝的原因，黃根的薄層色譜未檢出，因此本試驗選擇了方中另2味主藥葉下珠、黃芪進行定性鑒別。現(xiàn)代藥理試驗證明，葉下珠具有抗乙型肝炎病毒、保肝等作用[9]。沒食子酸為其有效成分之一，是可水解鞣質(zhì)的單體，具有抗病毒作用。本試驗中用HPLC法測定沒食子酸的含量，方法簡便、快速。

在提取溶劑考察時分別用稀乙醇、乙醇、甲醇、50%甲醇為提取溶劑，結(jié)果50%甲醇對沒食子酸提取效率高，故以50%甲醇作為提取溶劑。對提取方法冷浸法、熱回流提取法、超聲處理法進行考察，結(jié)果表明超聲處理法效果較理想。

在試驗中，取沒食子酸對照品溶液，在200～400 nm波長范圍內(nèi)進行光譜掃描，結(jié)果其在270 nm波長處吸收值最大，靈敏度最高，故選擇270 nm為測定波長。

[1]廣西壯族自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局．廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標準（第二卷）[M]．南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，2011．

[2]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：283．

[3]冀德富，郭東艷，王軍練，等．葉下珠中沒食子酸的定性定量方法研究[J]．現(xiàn)代中醫(yī)藥，2007，27(6)：60-61．

[4]馬 睿，代 龍，孫明江，等．白芪龍膠囊的質(zhì)量標準研究[J]．中國實驗方劑學(xué)雜志，2011，17(8)：52-55．

[5]張芝英．高效液相色譜法測定葉下珠中沒食子酸的含量[J]．中國藥業(yè)，2002，11(7)：53．

[6]郭朝暉，倪 琳，蔣祥生．HPLC測定苦味葉下珠膠囊中沒食子酸的含量[J]．華西藥學(xué)雜志，2007，22(1)：81-82．

[7]胥道寶，張轉(zhuǎn)平．葉下珠中鞣酸及沒食子酸的含量測定[J]．西北藥學(xué)雜志，2008，23(1)：31-32．

[8]湯迎爽，康阿龍，宋紅儒．高效液相色譜法測定痔速寧片中沒食子酸含量[J]．中國藥業(yè)，2010，19(23)：39-40．

[9]玉順子．葉下珠及其制劑藥理作用及臨床應(yīng)用研究進展[J]．中國藥業(yè)，2010，19(7)：87-88．

Study on Quality Standard of Compound Huanggen Granules(Sugar Free)

Tang Dezhi1,Lao Guangyao2,Yang Hui1
(1．Nanning Municipal Institute for Food and Drug Control,Nanning,Guangxi,China 530001; 2．Pingle County Hospital of Traditional Chinese Medicine,Guilin,Guangxi,China 542400)

Objective To establish the quality standard of Compound Huanggen Granules(sugar free)．M ethods Phyllanthus urinaria and Astragali radix in this preparation were identified by TLC and the content of gallic acid as the effective component in Phyllanthus urinaria was determined by HPLC．Results The TLC characteristics were distinctive without interference by the negative control and with strong specificity;the linear concentration range of gallic acid was 0．252-2．264 μg(r=0．999 9,n=6)and the average sample recovery rate was 100．88%，RSD=1．78%(n=6)．Conclusion The established standard can be used for the quality control of Compound Huanggen Granules(sugar free)．

Compound Huanggen Granule(sugar free);TLC;HPLC;quality standard

唐德智，男，副主任藥師，主要從事中藥制劑的分析研究，（電話）0771-3132340（電子信箱）tangdz7497＠163．com；楊輝(1963-)，男，副主任藥師，主要從事藥品檢驗、質(zhì)量標準研究與提高方面工作，本文通訊作者，（電話）0771-3100835（電子信箱）yh07719001＠21cn．com。

2014-01-28；

2014-06-04)

χ廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳基金資助項目，項目編號：GZYZ-10-40。

R284．1；R286．0

A< class="emphasis_bold">文章編號：1

1006-4931(2015)03-0025-03