腫瘤干細胞標志物CD133在大腸癌組織中的表達及意義

姜林鶴， 宋云駿

(1.河北省承德市中心血站， 河北 承德 067000 2.河北省承德市第三醫院， 河北 承德 067000)

大腸癌(colorectal cancer，CRC)包括結腸癌(colon cancer)和直腸癌(rectal cancer)，是臨床最常見的消化道惡性腫瘤之一。其發病率在西方發達國家居所有惡性腫瘤的第二位，且呈逐年上升趨勢［1］。近年來研究發現，腫瘤組織中少量的瘤細胞具有造血干/祖細胞(stem/ancestral cell)的特征，如具有旺盛的自我更新能力、可轉移到遠端部位、長壽命、抗凋亡、多潛能分化等生物學特性，這些細胞被稱為腫瘤干細胞(tumor stem cell，TSC)或癌癥干細胞(cancer stem cell，CSC)。TSC/CSC在成瘤、癌組織形成、腫瘤的轉移和復發等過程中起重要的作用。據此人們提出了腫瘤干細胞學說(tumor stem cell theory)。目前腫瘤干細胞在臨床上的研究重點是其與腫瘤的轉移和復發關系以及對放、化療的抵抗性和耐受性。CD133(Prominin－l)是典型的TSC表面標記物之一，在乳腺癌、腎癌、大腸癌等多種惡性腫瘤中均有表現，目前被認為是一種公認的TSC細胞標記物［2］。本文旨在通過檢測CD133在大腸癌組織中的表達情況，探討其在大腸癌中的臨床診斷價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料:收集承德醫學院附屬醫院和承德市腫瘤醫院(2010～2012年)經確診并有完整的臨床病理資料及隨訪結果的60例大腸癌病人的癌組織及癌旁組織，患者術前均未經過任何放化療等術前干預性治療。其中男性病人35例，女性病人25例。患者年齡范圍30～76歲，平均48.47歲。手術切取癌組織及癌旁組織(距癌組織3cm左右)。

1.2 實驗方法:免疫組織化學染色(SP三步法)抗原修復后三步法檢測大腸癌和癌旁組織中CD133的表達。嚴格按試劑盒步驟進行操作。兔抗人CD133多克隆抗體為美國Santa Cruz公司產品，工作濃度均為1:100。染色判斷標準:按 D.Horst等的標準［3］。選擇5個具有代表性的高倍視野(10×40)，以上皮細胞的細胞膜或細胞質以及腺體內腫瘤細胞碎片DAB染色染成棕黃或棕褐色為陽性染色。不著色為陰性(－)，＞0為陽性。低表達定義為陽性細胞數＜5%，高表達則陽性細胞數＞5%。

1.3 統計學分析:采用SPSS13.00統計軟件包進行統計學處理，應用列聯表χ2檢驗。檢驗標準取雙側α=0.05，P＜0.05 或 P＜0.01 為具有顯著性差異。

2 結果

2.1 CD133在大腸癌中的表達:CD133在大腸癌組織中主要著色部位為異型腺體腔內細胞膜或細胞質，間質內及肌間神經叢均無染色(圖1)。其陽性表達率為48.33%(29/60)，高于癌旁組織中的 16.67%(10/60)(P=0.000)，具有顯著性差異。

圖1 CD133在大腸癌組織中的表達(免疫組化染色)

2.2 大腸癌組織中CD133的表達與臨床病理特征的關系:CD133的表達與大腸癌患者的年齡、性別及腫瘤大小均無明顯相關性，而與腫瘤的組織學分化程度、腫瘤浸潤深度及淋巴結是否轉移密切相關(P=0.008，0.017，0.014)。見表 1。

表1 CD133的表達與臨床病理特征的關系

3 討論

大腸癌是消化系統常見的惡性腫瘤，其高發率及高死亡率使人類生命健康受到嚴重威脅。目前常用治療方法都以殺滅腫瘤細胞為目的，但這些治療方法在殺滅腫瘤細胞的同時也對正常組織有明顯的殺傷作用，并且腫瘤患者的遠期生存率得到明顯提高，轉移和復發使大腸癌患者的死亡人數仍然居高不下。近年來，人們提出了腫瘤干細胞假說(cancer stem cells hypothesis)。此學說認為腫瘤細胞在成瘤性方面存在不均一性，其中只有極少數腫瘤干細胞具有誘發并維持腫瘤惡性表達的能力［4］，這些干細胞是腫瘤不斷生長和轉移的根源［5］。腫瘤干細胞的數目相對恒定，具有無限增殖、自我更新和多向分化的特性，因此表現出很強的遷移、浸潤、轉移能力。CD133是Prominin家族成員［6］，被認為是實體腫瘤干細胞的分子標志［7］。Obrien等［8］研究發現CD133是結直腸癌干細胞的特異性標志物之一。本研究通過免疫組織化學染色方法檢測并分析了CD133在大腸癌中的表達情況，結果顯示，CD133在大腸癌組織中的表達水平明顯高于其在癌旁組織中表達，由此可以推測其可能以某種機制參與了大腸癌發生及發展過程，對該基因的進一步研究對闡明大腸癌發病機制，尋找早期診斷大腸癌的標志可能有所幫助。

本研究通過分析大腸癌組織中CD133的表達情況與患者臨床病理參數之間的關系，發現該蛋白的表達與大腸癌的組織學分化程度、腫瘤浸潤深度及淋巴結是否轉移密切相關，此結果提示CD133可能與大腸癌的發生發展及惡性程度密切相關，該基因在腫瘤進展過程中表達增強，可能促進了大腸癌的進展。

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［7］ Singh SK，Clarke D，Terasaki M，et al.Identification of a cancer stem cell in human brain tumors［J］.Cancer Res，3003，63:5821～5828.

［8］ Obrien CA，Pollett A，Gallinger S，et al.A human colon cancer cell capale of initiating tumor growth in immunodeficient mice［J］.Nature，2007，445:106～110.