B23和Ki67與宮頸癌患者預(yù)后的關(guān)系探討*

王鑾虹， 李俊東

(1.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院婦瘤科， 廣東 汕頭 515031 2.中山大學(xué)腫瘤防治中心婦科，廣東 廣州 510060)

宮頸癌是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤。尋找能提示腫瘤治療效果的指標(biāo)具有重要意義。目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)B23在宮頸癌中的表達(dá)及其與宮頸癌預(yù)后關(guān)系的相關(guān)研究報(bào)道。我們采用免疫組化SP方法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性相關(guān)的指標(biāo)B23和Ki67在宮頸癌中的表達(dá)，探討兩者的表達(dá)與宮頸癌患者生存率的關(guān)系，為宮頸癌治療效果和預(yù)后提供有效的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本資料:104例宮頸鱗癌標(biāo)本蠟塊進(jìn)行4m厚連續(xù)切片做免疫組化染色。對(duì)照組為同期因良性病變手術(shù)切除子宮的正常宮頸組織存檔組織蠟塊20例。所有病例均經(jīng)隨訪，有完整、詳細(xì)的臨床病理資料及隨訪結(jié)果。復(fù)發(fā)診斷根據(jù)臨床、影像學(xué)檢查結(jié)果和(或)病理學(xué)診斷，并參考血清學(xué)檢查的結(jié)果。截至末次隨訪時(shí)間，104例患者共23例復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為22.1%。

1.2 方法:B23鼠抗人單克隆抗體及Ki67鼠抗人單克隆抗體為北京中杉金橋生物技術(shù)公司產(chǎn)品。免疫組化染色程序嚴(yán)格按S－P試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS15.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料用卡方檢驗(yàn)或精確概率法檢驗(yàn);等級(jí)資料用秩和檢驗(yàn);等級(jí)相關(guān)用Spearman等級(jí)相關(guān)分析;用壽命表法計(jì)算生存率，用Kaplan－meimer法繪制生存曲線，用Log－Rank法檢驗(yàn)。P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 B23、Ki67在正常宮頸組織和宮頸鱗癌中的表達(dá):B23、Ki67陽(yáng)性表達(dá)均定位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒，細(xì)胞膜、細(xì)胞漿不染色。20例正常宮頸組織中B23陽(yáng)性率為30.0%(6/20)，104例宮頸癌中陽(yáng)性率為76.9%(80/104)，后者高于前者，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。20例正常宮頸組織中Ki67陽(yáng)性率為15.0%(3/20)，104例宮頸癌中陽(yáng)性率為44.2%(46/104)，后者高于前者，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.014)。

2.2 宮頸鱗癌組織中B23、Ki67表達(dá)之間的相關(guān)性:Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示:B23與Ki67的表達(dá)存在正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.212(P=0.031)。

2.3 B23及Ki67表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系:B23陰性、陽(yáng)性的患者5年無(wú)進(jìn)展生存率分別為95.8%、72.2%，差異有顯著性(P=0.021)(見(jiàn)圖1A)。B23陰性、陽(yáng)性的患者5年生存率分別為91.7%、80.9%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.186)(見(jiàn)圖1B)。Ki67陰性、陽(yáng)性的患者5年無(wú)進(jìn)展生存率分別為89.5%、62.7%，差異有顯著性(P=0.001)(見(jiàn)圖1C)。Ki67陰性、陽(yáng)性的患者5年生存率分別為94.7%、69.2%，差異有顯著性(P=0.001)(見(jiàn)圖 1D)。

圖1 A，B23表達(dá)陰性和陽(yáng)性患者的無(wú)進(jìn)展生存曲線;B，B23表達(dá)陰性和陽(yáng)性患者的總生存曲線;C，Ki67表達(dá)陰性和陽(yáng)性患者的無(wú)進(jìn)展生存曲線;D，Ki67表達(dá)陰性和陽(yáng)性患者的總生存曲線。

3 討論

宮頸癌是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤。目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者都在致力于研究能夠預(yù)測(cè)宮頸癌病人預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)，目的是為了進(jìn)一步改進(jìn)治療措施，改善宮頸癌患者預(yù)后，提高生存率。

B23蛋白廣泛存在于真核細(xì)胞內(nèi)，參與監(jiān)控核仁活性及細(xì)胞增生。B23高表達(dá)見(jiàn)于增殖活躍的細(xì)胞，包括腫瘤細(xì)胞和干細(xì)胞，在分化和凋亡的細(xì)胞中B23的表達(dá)下調(diào)。B23在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用主要研究集中在人實(shí)體瘤及血液淋巴系統(tǒng)惡性腫瘤中的B23mRNA 水平檢測(cè)。它在胃癌、膀胱癌［1，2］、甲狀腺癌［3］、肝癌［4］等呈高表達(dá)。在血液系統(tǒng)惡性疾病中常發(fā)生B23的基因重排和基因融合，有學(xué)者認(rèn)為B23基因突變可作為監(jiān)測(cè)微量殘留白血病的新指標(biāo)［5］。這些研究表明，B23可能參與正常細(xì)胞和癌變細(xì)胞的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)，可能作為腫瘤患者的預(yù)后評(píng)價(jià)指標(biāo)。

B23高表達(dá)于增殖活躍的細(xì)胞，在腫瘤形成過(guò)程中發(fā)揮重要作用。高增殖活性是宮頸癌細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)之一，本結(jié)果顯示B23在宮頸癌組織中呈高表達(dá)。宮頸癌細(xì)胞惡性增殖及其細(xì)胞中B23高表達(dá)的分子機(jī)制仍不清楚。已有研究表明高危型HPV感染是引起宮頸癌的主要因素。HPV整合入宿主細(xì)胞不僅使病毒的癌蛋白得到長(zhǎng)期穩(wěn)定的表達(dá)，而且因插入造成宿主DNA的重排，相應(yīng)的基因紊亂，對(duì)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化起著重要作用。高危型HPV－16 E6蛋白在宮頸癌組織中高表達(dá)，而且也定位在細(xì)胞核［6］。有趣的是B23蛋白擁有可以結(jié)合NLS幫助蛋白質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核的空間結(jié)構(gòu)［7］，這使得B23與E6蛋白在理論上具有結(jié)合的可能。本研究中B23在宮頸癌中的高表達(dá)提示B23在宮頸癌的發(fā)生中可能起一定作用。

Ki67即增殖細(xì)胞核相關(guān)抗原，是存在于細(xì)胞增殖期的蛋白質(zhì)，在多種腫瘤中呈高表達(dá)，對(duì)該蛋白質(zhì)的檢測(cè)有助了解細(xì)胞的增殖活性。在宮頸上皮內(nèi)瘤變中，Ki67分級(jí)結(jié)果較常規(guī)組織學(xué)分級(jí)更可靠，其靈敏性、特異性、陽(yáng)性和陰性預(yù)測(cè)值均較高［8］。Ki67在G0期不表達(dá)，G1期后期開(kāi)始出現(xiàn)，S、G2期升高，M期達(dá)高峰，隨后迅速降解，半衰期為1h，而且在靜止的細(xì)胞中無(wú)表達(dá)，故可用Ki67辨別生長(zhǎng)中的正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，評(píng)估細(xì)胞增殖狀態(tài)。Ki67在多種腫瘤中均呈高表達(dá)，其表達(dá)與乳腺癌［9］、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌的組織學(xué)分級(jí)、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、術(shù)后復(fù)發(fā)率和死亡率等臨床病理特征及預(yù)后存在一定的相關(guān)性。

本組研究中，B23陰性的患者5年無(wú)進(jìn)展生存率高于陽(yáng)性患者(P=0.021)。B23陰性的患者5年生存率高于B23陽(yáng)性的患者，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.186)。以上結(jié)果提示B23表達(dá)與宮頸鱗癌無(wú)進(jìn)展生存相關(guān)，B23陽(yáng)性的患者復(fù)發(fā)危險(xiǎn)度較高。B23表達(dá)與細(xì)胞增殖有關(guān)，其表達(dá)越高，細(xì)胞增殖活性越強(qiáng)，預(yù)后越差。本組研究B23陽(yáng)性的患者生存率低于陰性的患者，初步顯示B23高表達(dá)提示著預(yù)后不良。

本組研究中，Ki67陰性的患者5年無(wú)進(jìn)展生存率高于陽(yáng)性的患者(P=0.001)，Ki67陰性的患者5年生存率高于陽(yáng)性的患者(P=0.001)。以上結(jié)果提示在宮頸癌的預(yù)后判斷方面，Ki67是一個(gè)有效的指標(biāo)，與無(wú)進(jìn)展生存及總生存相關(guān)。

B23和Ki67均與細(xì)胞增殖相關(guān)，在細(xì)胞增生活躍的腫瘤細(xì)胞中均呈高表達(dá)。本研究經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示:B23與Ki67的表達(dá)存在正相關(guān)關(guān)系(P=0.031)。B23和Ki67都是細(xì)胞增殖活性相關(guān)的蛋白，從不同角度反映細(xì)胞的增殖。B23在細(xì)胞周期中表達(dá)增加，細(xì)胞增殖后不降解，半衰期達(dá)到24h，而Ki67半衰期僅1h，所以在本組研究中，Ki67特異性較高。

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