高血糖后代父系和母系糖脂代謝障礙的差異研究

陳文秀 叢 林 姚 潔 袁 靜 陳 薇 方慧琴

高血糖后代父系和母系糖脂代謝障礙的差異研究

陳文秀 叢 林 姚 潔 袁 靜 陳 薇 方慧琴

目的 探討糖尿病合并妊娠和妊娠期糖尿病(GDM)的SD大鼠后代中父系和母系糖脂代謝障礙的差異。方法分別把SD大鼠用STZ小劑量腹腔注射和STZ加高糖高脂飲食誘導成GDM和糖尿病合并妊娠模型，得到F1代大鼠后，分別與正常異性8周大鼠雜交產生F2代，分為對照組、GDM母系組、GDM父系組、糖尿病合并妊娠母系組與糖尿病合并妊娠父系組。測定F2代SD大鼠體質量、血糖、胰島素、三酰甘油及瘦素水平。 結果 <1周時，GDM父系組和GDM母系組體質量差異有統計學意義(P<0.05)；8周時，糖尿病合并妊娠父系組和糖尿病合并妊娠母系組體質量差異有統計學意義(P<0.05)；<1周時的糖尿病合并妊娠組和8周時GDM組，父系組和母系組體質量差異均無統計學意義(P>0.05)。8周時，糖尿病合并妊娠父系組和糖尿病合并妊娠母系組的胰島素水平、三酰甘油水平差異有統計學意義(P<0.05)，空腹血糖水平、瘦素水平差異均無統計學意義(P>0.05)。GDM父系組與GDM母系組的空腹血糖水平、胰島素水平和三酰甘油水平差異有統計學意義(P<0.05)，瘦素水平差異無統計學意義(P>0.05)。 結論 糖尿病大鼠的糖脂代謝障礙存在父系和母系差異，糖尿病合并妊娠性成熟期和GDM組出生時體質量差異父系組顯著高于母系組。糖尿病合并妊娠母系組和GDM母系組TG水平的代謝障礙可能更明顯。子代代謝障礙可能與宮內高血糖環境有關。

妊娠期糖尿病；糖尿病合并妊娠；父系；母系；糖脂代謝

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)可能引起機體代謝異常的機制被稱為“胎兒編程”或代謝記憶[1]。宮內高血糖影響后代基因甲基化，從而影響胎兒的生長發育[2]。在蛋白質水平方面， PGC-1α基因甲基化的表達可能導致代謝異常[3]。在基因方面，胰腺組織中表達量最多的是過氧化物酶體增殖激活受體γ 輔激活因子1A (peroxisome proliferatoractivated receptor-γ coactivator-1A,PPARGC1A) 基因，PPARGC1A是調控線粒體新陳代謝的關鍵轉錄因子，外界生理刺激可以通過它來調控線粒體的生物合成[4]。GDM 和糖尿病合并妊娠可能通過誘導子代PPARGC1A 基因發生高甲基化，使子代成年期發生糖、脂代謝紊亂的風險升高[5]。表觀遺傳在性別傳代方面研究少見，Ding等[6]研究發現糖耐量減低(impaired glucose tolerance,IGT)在父系后代進展比母系更顯著。為探討是否存在性別傳代差異，本研究檢測了SD大鼠父系和母系的糖脂類代謝水平。

1 材料與方法

1.1 大鼠動物模型的建立及繁殖 實驗動物的選擇和糖尿病動物模型制備詳見我們的前期研究[5]。除前期研究中每組隨機選取12只處死進行F1代研究外，現從大量的F1代每組隨機選取4只雌鼠和4只雄鼠進入下一代與正常異性大鼠繁殖，并從F2代中每組隨機選取8只進行研究。統計學理論上可以和處死的F1代進行遺傳學比較。

1.2 F2代的分組方法 當F1代大鼠達到8周性成熟時，將雌性F1代大鼠與正常雄鼠交配，產生F2代母系SD鼠，將雄性F1代大鼠與正常雌鼠交配產生F2代父系SD鼠。具體方式：糖尿病合并妊娠組分為父系(糖尿病合并妊娠♂- C♀)和母系(糖尿病合并妊娠♀-C♂);GDM組分為父系(GDM♂- C♀)和母系(GDM♀-C♂);以及對照組(C♀ - C♂)。同F1代喂養方法至8周，每組隨機選取8只子鼠進行研究。由此，F2代分為以下5組：糖尿病合并妊娠父系組、糖尿病合并妊娠母系組、GDM父系組、GDM母系組、對照組。

1.3 取材 F2代飼養至8 周齡，水合氯醛(天津福晨化學試劑廠) 腹腔注射0.004 mL/kg 麻醉， 分離并采集胰腺組織，置于無菌EP管中，-80 ℃冰箱保存。注射器抽取心臟血3 mL，室溫靜置20 min，2 000 r/min離心15 min。分離上層血清置于無菌EP管中，保存于-80℃冰箱。

1.4 體質量及血糖檢測方法 體質量采用上海力衡儀器儀表有限公司的電子天平測量，精確到0.01 g。血糖檢測：距大鼠尾尖0.2 cm 處剪斷，從尾根向尾尖按摩，待斷端出現完整血滴時，用血糖儀(瑞士羅氏診斷產品有限公司)測量。

1.5 血清生化指標的檢測 采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附(ELISA)法檢測子鼠血清胰島素(insulin,INS)、三酰甘油(triglyceride,TG)、瘦素(leptin,LEP)的含量，按試劑盒(美國RB公司)說明操作。

2 結果

2.1 糖尿病合并妊娠組和GDM組體質量比較 8周時，糖尿病合并妊娠父系組和糖尿病合并妊娠母系組體質量差異有統計學意義(F=25.6，P<0.05)；<1周時，GDM父系組和GDM母系組體質量差異有統計學意義(F=4.26，P<0.05)；<1周時的糖尿病合并妊娠組和8周時GDM組，父系組和母系組體質量差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 糖尿病合并妊娠組、GDM組與對照組不同時期體質量比較

2.2 糖尿病合并妊娠組和GDM組糖脂類指標比較 8周時，糖尿病合并妊娠父系組與母系組的胰島素水平、三酰甘油水平差異有統計學意義(P<0.05)，空腹血糖水平、瘦素水平差異均無統計學意義(P>0.05)。GDM父系組與母系組的空腹血糖水平、胰島素水平和三酰甘油水平差異有統計學意義(P<0.05)，瘦素水平差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 糖尿病合并妊娠組、GDM組與對照組糖脂類指標比較

3 討論

GDM對母親和胎兒均有長遠的影響，包括圍產期不良結果、后代的肥胖及葡萄糖耐受不良的長期風險等[7]。這些遺傳基因在胚胎期，胎兒期，嬰兒期和青春期對于組織發育和生長的調節異常是最敏感的。

Ding 等[6]報道糖尿病大鼠子代血糖可能受到親代性別差異的產生不同代謝影響，在F2代糖尿病合并妊娠組母系發育早期，存在體質量增加和血糖升高或IGT，這也本研究結果相似。對人類糖尿病性別傳代的研究較少，國外有建立在胎兒臍帶血與產婦血清的研究[9]，同類研究顯示新生兒GDM組脂肪量顯著高于正常組[10]，但均無性別差異研究。本實驗中GDM組SD大鼠糖、脂代謝均存在性別傳代差異；糖尿病合并妊娠組存在脂代謝性別傳代差異，母系高于父系。這種可遺傳的糖脂代謝的性別傳代特異性，其機制可能與脫離宮內高血糖環境有關，或與胰島β細胞的功能受損，引發糖耐量受損和胰島素抵抗有關[5]。也可能與懷孕期間母體或胎兒胰島素抵抗有關，宮內高糖環境致胎盤分泌各種脂肪因子和激素[11]。Boney等[12]的研究闡述了三酰甘油水平存在跨代遺傳，本研究也證實三酰甘油存在跨代遺傳和性別傳代差異，提示在糖尿病孕婦的后代存在脂代謝紊亂的可能，后代心血管相關疾病的風險增加[13]。

表觀遺傳機制可能是參與代謝性疾病的發病機理的一個早期事件，對表觀遺傳引起的疾病起到預防和治療作用。本課題組的前期研究顯示，F1代糖尿病合并妊娠組和GDM組大鼠的子代PPARGC1A基因可能發生了高甲基化狀態，抑制了其mRNA 的表達，課題組將在F2代后期研究中繼續開展表觀遺傳的研究。GDM和2型糖尿病都是多基因、多因素疾病，PPARGC1A位于染色體4 p15.1,它在各種組織包括脂肪組織,骨骼肌和胰腺，PPARGC1A與2型糖尿病風險增加有關[14]。除了DNA甲基化可能會引起糖脂代謝紊亂，糖尿病后代DNA多態性產生的后果的相關描述包括體質量、巨舌、眼間距過遠和畸形足等[15]。另外，線粒體DNA突變也可以讓部分患者發展為GDM[16]。研究數據證實高風險多態性對2型糖尿病患者的影響，同時證明配合經典遺傳學方法進行前瞻性的研究是有價值的[17]。為預防GDM的后代風險增加，需要針對不同地區人群的差異施行后代長期隨訪[18]。

綜上所述，糖尿病大鼠的糖脂代謝障礙存在父系和母系差異，可能糖尿病合并妊娠母系組和GDM母系組TG水平的代謝障礙可能更明顯。

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(2014-09-15收稿 2014-12-10修回)

Investigation on paternal and maternal differences of glycolipid metabolism disorder in hyperglycemia SD rat offsprings

ChenWenxiu,CongLin,YaoJie,etal

DepartmentofObstetricsandGynecology,FirstAffiliatedHospitalofAnhuiMedicalUniversity,Hefei230022,China

Objective To investigate the paternal and maternal differences of glycolipid metabolism disorder in the offsprings of SD rats with diabetic pregnancy and gestational diabetes mellitus (GDM).MethodsThe GDM or diabetic pregnancy models of SD rats were induced by intraperitoneal injection of a small dose of STZ or STZ combined with high-sugar and high-fat diet, and then their F1 generation rats were hybridized with normal heterosexual rats of eight weeks to produce the F2 generation hybrid rats, which were divided into five groups: control group, GDM maternal group, GDM paternal group, diabetic pregnancy maternal group, and diabetic pregnancy paternal group. The body mass, levels of blood glucose, insulin, triglyceride and leptin of the F2 generation SD rats in the five groups were detected and compared.ResultsAt <1 week after grouping, the difference in the body mass between the GDM paternal group and the GDM maternal group was statistically significant (P<0.05), while at 8 weeks, the difference in the body mass between the diabetic pregnancy paternal group and the diabetic pregnancy maternal group also became statistically significant (P<0.05). But in the diabetic pregnancy groups at <1 week and the GDM groups at 8 weeks, comparison with body mass between paternal and maternal groups showed no significant difference (P>0.05). At 8 weeks, there had significant differences in the insulin level and triglyceride level between the diabetic pregnancy paternal group and the diabetic pregnancy maternal group (P<0.05), with no significant differences in the fasting blood glucose level and leptin level between the two groups (P>0.05). The differences in the fasting blood glucose level, insulin level, and triglyceride level between the GDM paternal group and the GDM maternal group were significant (P<0.05), but not in the leptin level (P>0.05).ConclusionThere is paternal and maternal differences of glycolipid metabolism disorder in diabetic rats. The paternal and maternal differences of body mass in the diabetic pregnancy groups within sexual maturity period and the GDM groups within newborn period were significant. The metabolic disorder of triglyceride level in the diabetic pregnancy maternal group and the GDM maternal group may be more obvious. The offspring metabolic disorders may be associated with intrauterine environment of hyperglycemia.

Gestational diabetes mellitus; Diabetic pregnancy; Paternal; Maternal; Glycolipid metabolism

2012年度安徽省自然科學基金項目(項目編號：1208085MH172 )

230022 合肥 安徽醫科大學第一附屬醫院婦產科產前診斷中心

叢林，conglin1957@163.com

10.3969/j.issn.1000-0399.2015.02.003