原花青素B2對LPS誘導的心肌細胞凋亡的保護作用

張曉暉，曾繁典，孫智達，楊卓欣，熊益群，徐超英，劉心亮，林 堅，穆桂萍，徐紹鋼，劉文赫

（1．深圳市中醫院中醫藥研究所，廣東深圳 518033；2．華中科技大學同濟醫學院藥理系，湖北武漢 430030；3．華中農業大學食品科學技術學院，湖北武漢 430070）

原花青素B2對LPS誘導的心肌細胞凋亡的保護作用

張曉暉1，曾繁典2，孫智達3，楊卓欣1，熊益群1，徐超英1，劉心亮1，林 堅1，穆桂萍1，徐紹鋼1，劉文赫1

（1．深圳市中醫院中醫藥研究所，廣東深圳 518033；2．華中科技大學同濟醫學院藥理系，湖北武漢 430030；3．華中農業大學食品科學技術學院，湖北武漢 430070）

中國圖書分類號：R-332；R284．1；R322．11；R329．25；R542．2

摘要：目的 研究原花青素B2（procyanidin B2，PCB2）對脂多糖（lipopolysacchride，LPS）誘導的心肌細胞凋亡的保護作用及其機制。方法 采用原代培養新生大鼠心肌細胞，LPS誘導心肌細胞損傷模型，PCB2低、中、高劑量組分別用含有6.25、12.5、25.0 μmol·L－1PCB2的DMEM培養基持續培養24 h。采用四唑鹽（MTT）比色法測定心肌細胞存活率，光澤精化學發光法測定心肌細胞NOX的活性，Western blot法分析心肌NADPH氧化酶p47phox亞基的表達，TUNEL法檢測細胞凋亡，流式細胞術測定心肌細胞ROS的含量。結果 LPS誘導的細胞損傷組與正常對照組（Control）比較，心肌細胞活力明顯降低（P＜0.01），而心肌細胞NOX活性、p47phox亞基的表達、凋亡細胞數量以及ROS含量均明顯增加（P＜0.01）。PCB2處理后，低、中、高劑量組細胞活力均明顯升高，心肌細胞NOX活性、p47phox亞基的表達、凋亡細胞數量以及ROS含量均明顯下降，且具有劑量依賴性（P＜0.01）。結論 PCB2通過抑制NADPH氧化酶激活、p47phox的表達以及活性氧的產生發揮對LPS誘導的心肌細胞凋亡的保護作用。

關鍵詞：原花青素B2；脂多糖；心肌細胞；凋亡；NADPH氧化酶；活性氧自由基

網絡出版時間：2015－10－16 9：52 網絡出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／34．1086．R．20151016．0952．016．html

在膿毒癥中，心臟受影響最為常見，膿毒癥合并心功能衰竭，死亡率高達70%～90%［1］，臨床救治相當困難。但膿毒癥心功能不全的細胞內機制目前尚不完全清楚。近來的研究發現，膿毒癥心功能不全可能與細胞凋亡［2］和活性氧（reactive oxygen spe-cies，ROS）大量產生［3］有關。抗氧化劑的早期干預對于膿毒癥心肌細胞凋亡可能具有積極的意義。

天然植物藥作為天然抗氧化劑受到越來越多的重視，許多研究提示天然植物藥相比于化學藥物無明顯副作用的特點使其更具開發潛力。原花青素（procyanidins，PC）廣泛存在于植物中，是一種由單體（主要是兒茶素、表兒茶素等）、低聚原花青素（單體的二、三、四聚合物體）和高聚原花青素（五聚體以上）組成的化合物。其中二聚體在各類原花青素中分布最廣，抗氧化活性最強，是最重要的一類。二聚體因兩個單體的構象或縮合鍵位不同，有多種異構體，現已鑒定的8種異構體命名為B1～B8，其中B1～B4由C4－C8鍵合，B5～B8由C4－C6鍵合。在8種異構體中原花青素B2是活性最強的一個二聚體［4］，它的結構式如Fig 1。

Fig 1 Structure of procyanidin B2

二聚體原花青素B2是葡萄籽原花青素提取物的組分之一，它的生物學活性較其他水溶性多酚更強［1］。已經證實原花青素，尤其是原花青素B2具有清除自由基、抗氧化［5－6］、抗腫瘤［7－8］、抗炎癥［9－10］、抗凋亡［11］以及抗動脈粥樣硬化［12］等作用。

我們前期的研究結果發現，從荔枝殼提取的原花青素預處理能夠明顯減輕膿毒癥大鼠心肌細胞凋亡，可能與其抗氧化性損傷作用有關［13］。另外，原花青素還能通過抑制NADPH氧化酶的活性達到抗血小板聚集的作用［14］。那么，原花青素中活性最強的原花青素B2是否通過NADPH氧化酶途徑達到抗膿毒癥心肌細胞凋亡的作用，目前還不清楚。本研究以脂多糖誘導的心肌細胞損傷為模型，從NADPH氧化酶／活性氧途徑探討原花青素B2對心

肌細胞凋亡的作用，將有助于更深入研究原花青素B2的藥理學作用機制。

1　材料與方法

1．1實驗材料 出生24 h內Sprague-Dawley（SD）新生乳鼠由廣東省醫學實驗動物中心提供；原花青素B2（procyanidin B2，PCB2）、脂多糖（lipopolysac-chride，LPS）、Lucigenin、NAD（P）H、α-actin antibody均購自Sigma；TUNEL試劑盒購自Roche；p47phoxAn-tibody購自Cell Signaling Technology；lysotracker-blue、Dead Cell Apoptosis Kit with Annexin V Alexa Fluor488＆PI-for Flow Cytometry、CellROXDeep Red Flow Cytometry Assay Kit均購自Invitrogen；Tiron購自Fluka。

1．2原代心肌細胞培養 采用文獻的方法［15］，無菌操作取出生24 h內健康SD乳鼠左心室，剪碎成1 mm×1 mm×1 mm大小，加入適量0.15%胰蛋白酶，37℃水浴下輕柔攪動、反復消化，制備心肌細胞懸液，差速貼壁。用含15%新生牛血清的DMEM培養液，調整細胞濃度為每瓶3×106個，接種于底面積為75 cm2的培養瓶，置CO2培養箱進行原代培養。

1．3分組與造模 模型復制選擇LPS 5、25、50 mg ·L－1進行實驗，選用細胞存活率約為60%的濃度為實驗復制模型濃度。選擇2、4、8、12、24 h作為分析損傷的時間點，選用細胞存活率在60%左右的時間點為實驗復制模型時間。LPS對心肌細胞的損傷隨著濃度的增大而增強，當濃度在25 mg·L－1時，細胞存活率在61.25%，同時LPS對心肌細胞的損傷隨著時間的延長而增強，用25 mg·L－1LPS對心肌細胞持續作用達24 h，細胞存活率在60.22%。因此，本實驗研究選用25 mg·L－1LPS作用心肌細胞24 h復制細胞損傷模型。

取原代培養心肌細胞，置于CO2培養箱常規培養24 h，換無新生牛血清的DMEM培養液同步化24 h后進行實驗。實驗分為以下6組：①正常對照（Control）組：細胞置于DMEM培養基中持續培養24 h；②LPS誘導的細胞損傷組：細胞置于含有25 mg·L－1LPS的DMEM培養基中持續培養24 h；③PCB2低劑量組：細胞置于含有25 mg·L－1LPS和6.25 μmol·L－1PCB2的DMEM培養基中持續培養24 h；④PCB2中劑量組：細胞置于含有25 mg·L－1LPS和12.5 μmol·L－1PCB2的DMEM培養基中持續培養24 h；⑤PCB2高劑量組：細胞置于含有25 mg·L－1LPS和25 μmol·L－1PCB2的DMEM培養基中持續培養24 h。

1．4檢測指標

1．4．1細胞活力檢測 采用MTT比色法檢測心肌細胞存活率。各組細胞以5×107·L－1的細胞密度接種于96孔培養板中，37℃培養。待細胞穩定生長2 d后，加入不同濃度LPS處理相應的時間，然后每孔加入濃度為5 g·L－1的MTT液20 μL，37℃孵育4 h，棄培養上清液，再每孔加入二甲基亞砜150 μL，充分溶解結晶后，酶標儀在490 nm處測定各孔的吸光度值，即OD值，以間接反映各組活細胞數量。

1．4．2光澤精化學發光法測定心肌細胞NOX的活性 細胞處理結束后，用4℃預冷的PBS洗滌細胞2次，加入Jude Krebs buffer［Jude Krebs（JK）Buffer：119 mmol·L－1NaCl，20 mmol·L－1Hepes，4.6 mmol·L－1KCl，1 mmol·L－1MgSO4，0.15 mmol· L－1Na2HPO4·2H2O，136.09 mmol·L－1KH2PO4，84.01 mmol·L－1NaHCO3，147 mmol·L－1CaCl2，180.2 mmol·L－1glucose，使用前加入protease in-hibitor cocktail（Roche）］，刮下細胞。冰上超聲后4°C離心，800×g，4 min。取少量樣本進行蛋白定量（Bradford法）。避光96孔板內加入40 μg的細胞蛋白，5 μL DMSO，10 μmol·L－1lucigenin，50 mmol·L－1Tiron，加入新鮮配制的NADPH 100 μmol·L－1啟動反應，以化學發光檢測儀進行檢測，酶活性檢測結果以每μg蛋白的光單位表示（light unit）。

1．4．3Western blot法分析心肌NADPH氧化酶p47phox亞基的表達并定量 收集細胞蛋白后，采用15%濃度的聚丙烯酰胺凝膠測目的蛋白，經SDS-PAGE電泳后將蛋白轉至PVDF膜上，5%脫脂牛奶封閉后，將一抗（1∶500）4℃孵育過夜后，用TBST每次7 min洗2次后，用相應的稀釋好的二抗（HRP標記二抗，1∶3 000，Forevergen）室溫下孵育1～2 h，用TBST每次7 min洗3次后，進行化學發光顯影（ECL，Forevergen）。用Image J分析目標條帶的光密度值。以GAPDH（1∶5 000）作為內參照，比較不同處理后上述蛋白表達的差異。

1．4．4TUNEL法測定細胞凋亡 按TUNEL試劑盒的說明逐步添加試劑，檢測心肌細胞凋亡。每片隨機選取5個視野，計算陽性細胞百分率即細胞凋亡率（每一片100個細胞核中凋亡核所占的百分比）。

1．4．5流式細胞術測定心肌細胞ROS的含量 細胞處理結束后，用4℃預冷的PBS洗滌細胞2次，加入0.25%胰蛋白酶消化細胞后收集，將配制好的10

μmol·L－1DCFH-DA溶液500 μL重懸細胞，37℃孵育30 min，離心，800×g，5 min，棄上清，預冷的PBS洗滌細胞2次，制成1×108cells·L－1的懸液，立即進行流式細胞儀檢測，以488 nm為激發波長，530 nm為發射波長。

2　結果

2．1PCB2對LPS誘導的細胞活力的影響 用MTT的方法評價PCB2是否對LPS誘導的心肌細胞損傷具有保護作用。如Fig 2所示，LPS誘導的細胞損傷組（LPS）與正常對照組（Control）比較，心肌細胞活力明顯降低（P＜0.01），PCB2低、中、高劑量組與LPS組相比細胞活力均明顯升高，且具有劑量依賴性（P＜0.01）。

Fig 2 Influence of PCB2on LPS-induced cell vitality（±s）

2．2PCB2對LPS誘導的心肌細胞NOX活性的影響 NADPH氧化酶是心血管系統ROS的重要來源，因此我們觀察了心肌細胞NOX活性是否與PCB2的抗凋亡作用有關。如Fig 3所示，LPS誘導的細胞損傷組與正常對照組比較，心肌細胞NOX活性明顯增加（P＜0.01），PCB2低、中、高劑量組與LPS組相比，細胞NOX活性均明顯降低，且具有劑量依賴性（P＜0.01）。

2．3PCB2對LPS誘導的心肌NADPH氧化酶p47phox亞基表達的影響 用Western blot的方法分析NADPH氧化酶p47phox亞基的表達。如Fig 4所示，LPS誘導的細胞損傷組與正常對照組比較，p47phox亞基的表達明顯增加（P＜0.01），PCB2低、中、高劑量組與LPS組相比p47phox亞基的表達均明顯降低，且具有劑量依賴性（P＜0.01）。

2．4PCB2對LPS誘導的細胞凋亡的影響 TUNEL法檢測心肌細胞凋亡，Fig 5結果顯示，LPS誘導的細胞損傷組與正常對照組比較，凋亡細胞明顯增加（P＜0.01）；PCB2低、中、高劑量組與LPS組相比凋亡細胞均明顯減少，且具有劑量依賴性（P＜0.01）。

Fig 3 Influence of PCB2on LPS-induced NOX activity（±s）

Fig 4 Influence of PCB2on LPS-induced p47phoxexpression（±s）

2．5PCB2對LPS誘導的心肌細胞ROS含量的影響 為了確定ROS是否涉及PCB2的抗凋亡作用，用流式細胞術檢測ROS的含量。如Fig 6所示，LPS誘導的細胞損傷組與正常對照組比較，ROS含量明顯增加（P＜0.01）；PCB2低、中、高劑量組與LPS組

相比ROS含量均明顯減少，且具有劑量依賴性（P＜0.01）。

Fig 5 Influence of PCB2on LPS-induced apoptosis（±s）

Fig 6 Influence of PCB2on LPS-induced cardiacmyocyte ROS content（±s）

3　討論

本研究結果發現，原花青素B2能夠保護脂多糖誘導的心肌細胞凋亡。這種保護作用與其抑制NADPH氧化酶的激活，NADPH氧化酶p47phox亞基的表達以及ROS的生成有關。

細胞凋亡與細胞內大量產生的ROS有關。ROS作為細胞內的一種信號分子，在細胞死亡過程中發揮著重要的作用［16］。它能改變細胞信號，損傷蛋白質和DNA，從而導致細胞凋亡［17］。氧化應激可間接通過對DNA、脂質和蛋白的損害，或更直接地激活ASK-1、JNK和ERK1／2等促凋亡信號分子而導致心肌細胞凋亡［18］。脂多糖能誘導心肌細胞ROS產生增加，ROS是具有高化學反應活性的分子，在血管張力、細胞生長、遷移、增殖、肥大，細胞凋亡和基質沉積等許多生理和病理過程的調節中發揮關鍵作用［19］。心肌細胞內ROS的來源包括線粒體電子傳遞鏈、黃嘌呤氧化酶、“非偶聯”的一氧化氮合酶、細胞色素P450和NADPH氧化酶。在這些來

源當中，只有NADPH氧化酶是以高度受調節的方式產生ROS，是細胞內ROS的主要來源［20］。NAD-PH氧化酶是由5個同型異構體組成的酶家族：Nox1、Nox2、Nox3、Nox4、Nox5。酶復合體由2個位于細胞膜的亞基（gp91phox和gp22phox，兩者構成細胞色素b558）和至少4種胞質蛋白（p40phox、p47phox、p67phox和Rac-1／2，構成胞質復合體）組成。在心血管系統，Nox2、Nox4在內皮細胞、心肌細胞和成纖維細胞中表達［21－23］。急性心肌梗死大鼠細胞損傷就與Nox2表達增加有關［24］。胞質蛋白p47phox對激活Nox2起著關鍵性的作用［25］。在本研究中，我們發現LPS處理以后，心肌細胞NOX活性明顯增強，p47phox表達以及ROS產生明顯增多；PCB2能明顯減弱NOX活性，減少p47phox的表達以及ROS的產生，并伴隨著心肌細胞凋亡的減少，提示PCB2是通過抑制NADPH氧化酶衍生的ROS，達到保護LPS誘導的心肌細胞凋亡的作用。目前有兩種以NADPH氧化酶為靶點的治療藥物：一種是抑制p47phox與Nox2的結合［26］，另一種是抑制轉錄因子Ets-1［27］和LOX-1［28］的表達，進而抑制NADPH氧化酶的表達。PCB2是否通過上述機制發揮抑制NADPH氧化酶的作用，值得進一步研究。

總之，本研究結果發現PCB2通過抑制NADPH氧化酶激活、p47phox的表達以及活性氧的產生，發揮對脂多糖誘導的心肌細胞凋亡的保護作用。我們的工作為PCB2對心肌細胞的保護作用提供了新的見解，這有可能是未來作為臨床應用治療膿毒癥相關的心肌細胞凋亡的一個潛在的藥理學基礎。

［致謝：本文實驗在深圳市中醫院國家中醫藥科研三級實驗室（No：TCM－2009－289）完成，在此表示衷心感謝。］

參考文獻：

［1］ Merx M W，Weber C．Sepsis and the heart［J］．Circulation，2007，116（7）：793－802．

［2］ Wesche-Soldato D E，Swan R Z，Chung C S，et al．The apoptotic pathway as a therapeutic target in sepsis［J］．Curr Drug Targets，2007，8（4）：493－500．

［3］ Matsuno K，Iwata K，Matsumoto M，et al．NOX1／NADPH oxi-dase is involved in endotoxin-induced cardiomyocyte apoptosis ［J］．Free Radic Biol Med，2012，53（9）：1718－28．

［4］ 陳召桂，盧艷花，魏東芝．HPLC測定葡萄籽提取物中原花青素B2的含量［J］．中成藥，2007，29（11）：1645－7．

［4］ Chen Z G，Lu Y H，Wei D Z．Determination of procyanidin B2in grape seed extract by RP-HPLC［J］．Chin Tradit Patent Med，2007，29（11）：1645－7．

［5］ Shao Z H，Becker L B，Vanden Hoek T L，et al．Grape seed pro-anthocyanidin extract attenuates oxidant injury in cardiomyocytes［J］．Pharmacol Res，2003，47（6）：463－9．

［6］ Sakano K，Mizutani M，Murata M，et al．Procyanidin B2has anti-and pro-oxidant effects on metal-mediated DNA damage［J］．Free Rad Biol Med，2005，39（8）：1041－9．

［7］ Avelar M M，Gouvêa C M．Procyanidin B2cytotoxicity to MCF-7 human breast adenocarcinoma cells［J］．Indian J Pharm Sci，2012，74（4）：351－5．

［8］ Mackenzie G G，Adamo A M，Decker N P，Oteiza P I．Dimeric procyanidin B2inhibits constitutively active NF-kappaB in Hodgkin′s lymphoma cells independently of the presence of Ikap-paB mutations［J］．Biochem Pharmacol，2008，75（7）：1461－71．

［9］ Chen D M，Cai X，Kwik-Uribe C L，et al．Inhibitory effects of procyanidin B（2）dimer on lipid-laden macrophage formation ［J］．J Cardiovasc Pharmacol，2006，48（2）：54－70．

［10］Houde V，Grenier D，Chandad F．Protective effects of grape seed proanthocyanidins against oxidative stress induced by lipopolysac-charides of periodontopathogens［J］．J Periodontol，2006，77 （8）：1371－9．

［11］Li B Y，Li X L，Cai Q，et al．Induction of lactadherin mediates the apoptosis of endothelial cells in response to advanced glycation end products and protective effects of grape seed procyanidin B2and resveratrol［J］．Apoptosis，2011，16（7）：732－45．

［12］Cai Q，Li B Y，Gao H Q，et al．Grape seed procyanidin B2inhibits human aortic smooth muscle cell proliferation and migration in-duced by advanced glycation end products［J］．Biosci Biotechnol Biochem，2011，75（9）：1692－7．

［13］張曉暉，孫智達，李書藝，等．荔枝殼原花青素對膿毒癥大鼠心肌細胞凋亡的作用及其機制研究［J］．中國藥理學通報，2015，31（7）：931－5．

［13］Zhang X H，Sun Z D，Li S Y，et al．Protective effects of LPPC on cardiomyocyte apoptosis in septic rats［J］．Chin Pharmacol Bull，2015，31（7）：931－5．

［14］張曉暉．葡萄籽原花青素體外抗血小板聚集的機制研究［J］．中國病理生理雜志，2012，28（4）：714－7．

［14］Zhang X H．In vitro anti-platelet aggregative effect of procyanidins isolated from grape seeds［J］．Chin J Pathophysiol，2012，28 （4）：714－7．

［15］劉 蜜，王曉秖，陶天琪，等．西洋參莖葉總皂苷通過抑制內質網應激減輕毒胡蘿卜素誘導的心肌細胞凋亡［J］．中國病理生理雜志，2014，30（10）：1735－41．

［15］Liu M，Wang X R，Tao T Q，et al．PQS attenuates cardiomyocyte apoptosis induced by thapsigargin through inhibiting endoplasmic reticulum stress［J］．Chin J Pathophysiol，2014，30（10）：1735－41．

［16］Bao M H，Dai W，Li Y J，et al．Rutaecarpine prevents hypoxia-reoxygenation induced myocardial cell apoptosis via inhibition of NADPH oxidases［J］．Can J Physiol Pharmacol，2011，89（3）：177－86．

［17］Choi J Y，Kim B M，Kim Y J，et al．Hypoxia／reoxygenation-in-duced cytotoxicity in cultured human lymphocytes［J］．Biochem Biophys Res Commun，2007，352（2）：366－71．

［18］Matsuzawa A，Ichijo H．Stress-responsive protein kinases in redox-

regulated apoptosis signaling［J］．Antioxid Redox Signal，2005，7 （3－4）：472－81．

［19］Akki A，Zhang M，Murdoch C，et al．NADPH oxidase signaling and cardiac myocyte function［J］．J Mol Cell Cardiol，2009，47 （1）：15－22．

［20］Bedard K，Krause K H．The NOX family of ROS-generating NAD-PH oxidases：physiology and pathophysiology［J］．Physiol Rev，2007，87（1）：245－313．

［21］Ago T，Kitazono T，Ooboshi H，et al．Nox4 as the major catalytic component of an endothelial NAD（P）H oxidase［J］．Circulation，2004，109（2）：227－33．

［22］Cucoranu I，Clempus R，Dikalova A，et al．NAD（P）H oxidase 4 mediates transforming growth factor-β1-induced differentiation of cardiac fibroblasts into myofibroblasts［J］．Circ Res，2005，97 （9）：900－7．

［23］Byrne J A，Grieve D J，Bendall J K，et al．Contrasting roles of NADPH oxidase isoforms in pressure-overload versus angiotensin II-induced cardiac hypertrophy［J］．Circ Res，2003，93（9）：802 －5．

［24］Fukui T，Yoshiyama M，Hanatani A，et al．Expression of p22phoxand gp91phox，essential components of NADPH oxidase，increases after myocardial infarction［J］．Biochem Biophys Res Commun，2001，281（5）：1200－6．

［25］Cai H，Griendling K K，Harrison D G．The vascular NADPH oxi-dases as therapeutic targets in cardiovascular diseases［J］．Trends Pharmacol Sci，2003，24（9）：471－8．

［26］Jacobson G M，Dourron H M，Liu J，et al．Novel NAD（P）H oxi-dase inhibitor suppresses angioplasty-induced superoxide and neointimal hyperplasia of rat carotid artery［J］．Circ Res，2003，92（6）：637－43．

［27］Ni W，Zhan Y，He H，et al．Ets-1 is a critical transcriptional reg-ulator of reactive oxygen species and p47phoxgene expression in re-sponse to angiotensin II［J］．Circ Res，2007，101（10）：985－94．

［28］Khaidakov M，Szwedo J，Mitra S，et al．Anti-angiogenic and anti-mitotic effects of aspirin in hypoxia-reoxygenation modulation of LOX-1-NADPH oxidase axis as potential mechanism［J］．J Card-iovasc Pharmacol，2010，56（6）：635－41．

Procyanidin B2protects LPS-induced myocardial cell apoptosis

ZHANG Xiao-hui1，ZENG Fan-dian2，SUN Zhi-da3，YANG Zhuo-xin1，XIONG Yi-qun1，XU Chao-ying1，LIU Xin-liang1，LIN Jian1，MU Gui-ping1，XU Shao-gang1，LIU Wen-he1
（1．Chinese Medicine Institute of Shenzhen TCM Hospital，Shenzhen Guangdong 518033，China；2．Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430030，China；3．College of Food Science and Technology of Huazhong Agricultural University，Wuhan 430070，China）

Abstract：Aim To study the mechanisms of the pro-tective effect of procyanidin B2（PCB2）on the myocar-dial cell apoptosis induced by lipopolysaccharide （LPS）．Methods Using the primary culture rat myo-cardial cells，myocardial cell injury model was induced by LPS．PCB2low，medium and high dose groups，were cultured with 6.25，12.5，25.0 μmol·L－1PCB2respectively in DMEM medium for 24 h continu-ously．Myocardial cell survival rate was determined by MTT colorimetric method．Cardiacmyocyte NOX activi-ty was determined by lucigen chemiluminescence meth-od．Western blot analysis was used to detect myocardi-al NADPH oxidase p47phoxexpression．TUNEL method was used to detect apoptosis and flow cytometry was used to determine the content of myocardial cells ROS．Results Compared with control group，the cell dam- age induced by LPS group myocardial cell survival rate significantly decreased（P＜0.01），and myocardial cell NOX activity，p47phoxexpression，apoptotic cell number and ROS content were significantly increased （P＜0.01）．PCB2low，medium and high dose groups cell survival rates were significantly elevated，myocar-dial cell NOX activity and p47phoxexpression，apoptotic cell number and the ROS content decreased significant-ly in a dose-dependent manner（P＜0.01）．Conclu-sion PCB2protects myocardial cell apoptosis induced by LPS via inhibiting the expression of NADPH oxidase activation，p47phoxexpression and reactive oxygen spe-cies generation．

Key words：procyanidin B2；lipopolysacchride；car-diomyocyte；apoptosis；NADPH oxidase；reactive oxy-gen species

通訊作者

作者簡介：張曉暉（1975－），女，博士，副主任藥師，研究方向：心血管藥理學、中藥藥理學，，Tel：0755-88359666，E-mail：767682665＠qq．com

基金項目：國家自然科學基金資助項目（No 81101450）；深圳市科技研發資金知識創新計劃資助項目（No JCYJ20130329 155553734）

收稿日期：2015－07－31，修回日期：2015－08－23

文獻標志碼：A

文章編號：1001－1978（2015）11－1510－06

doi：10．3969／j．issn．1001－1978．2015．11．008