正交試驗法優選桃紅四物湯醇提工藝

★　姚亮　李珊珊　于凡　彭代銀　(安徽中醫藥大學　合肥 230031)

正交試驗法優選桃紅四物湯醇提工藝

★姚亮*第一作者：姚亮，男，碩士研究生。Tel：18256979928，E-mail：766816651@qq.com。李珊珊于凡彭代銀*通信作者：彭代銀，男，教授，博士生導師。研究方向：中藥學。Tel：0551-65169189，E-mail：pengdy@ahtcm.edu.cn。(安徽中醫藥大學合肥 230031)

摘要：目的:優選桃紅四物湯的醇提工藝。方法:以總黃酮含量和浸膏得率為考察指標，以乙醇濃度、乙醇用量、提取時間、提取次數為考察因素，采用正交試驗優選桃紅四物湯的最佳醇提工藝。結果:桃紅四物湯的最佳醇提工藝為加6倍量80%乙醇提取三次，每次1.5h。結論:優選出的桃紅四物湯的醇提工藝合理、穩定，可為其工業化生產提供參考。

關鍵詞：桃紅四物湯；醇提工藝；正交試驗；總黃酮；浸膏得率

桃紅四物湯源自于清代吳謙之《醫宗金鑒·婦科心法要訣》，由桃仁、紅花、熟地、當歸、白芍、川芎6味中藥組方而成，具有養血活血、祛瘀生新之效，臨床上用于血瘀兼有血虛證特別是婦科血瘀證的治療[1]。古代醫家將其用于治療婦人瘀血內阻、月經失調等證，現代常用于血瘀引起的多種病癥，對冠心病、糖尿病、痛經、子宮出血等均有較好療效，所治病癥涉及內、外、婦、兒各科[2]。藥理學研究表明，桃紅四物湯還具有抗血栓[3]、改善心功能、抗血小板聚集、改善微循環、抗氧化、降低血脂等作用[4]，應用前景廣闊，具有進一步研究和開發的價值。在臨床用藥形式上桃紅四物湯多以湯劑為主，雖療效確切，但存在穩定性差、易霉變、服用不便、攜帶困難等缺點[5]，使其的應用和推廣受到限制，需要改革劑型。根據此方的臨床實際應用情況及組方藥物的理化性質及成分，可考慮采用顆粒劑、膠囊劑、片劑等口服劑型。但由于本方日服劑量相當于原藥材51克，且藥材提取物得膏率較大，不易制成膠囊、片劑，故考慮制成顆粒劑。為確保顆粒劑的質量及療效，本研究對桃紅四物湯的醇提工藝進行優選。由于組方中桃仁、紅花、當歸、川芎四味藥的脂溶性成分較多[6-8]，故對以上四味藥采用乙醇作為溶劑進行提取，以浸膏得率和總黃酮含量作為指標考察桃紅四物湯的最佳醇提工藝。

1材料

1.1藥物及試劑桃仁(安徽濟人藥業有限公司，批號:130331);紅花(安徽濟人藥業有限公司，批號:130406);當歸(安徽濟人藥業有限公司，批號:130625);川芎(安徽濟人藥業有限公司，批號:130519)；蘆丁對照品(批號：120526-201408)；甲醇為色譜純。

1.2儀器紫外-可見分光光度計(UV757CRT型，上海精科儀器有限公司)；十萬分之一分析天平(AB135-S型，梅特勒公司)；電子天平(PL601-S型，梅特勒公司)；旋轉蒸發儀(SHB-Ⅲ型，上海亞榮生化儀器廠)；水浴鍋(HH-S2型，常州普天儀器制造有限公司)；真空干燥箱(DZF-6050型，上海博訊實業有限公司)。

2方法與結果

2.1總黃酮含量測定[9]

2.1.1對照品溶液的制備取120℃干燥至恒重的蘆丁對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。

2.1.2供試品溶液的制備按處方比例稱取桃仁9g，紅花6g，當歸9g，川芎6g，按醇提L9(34)正交試驗進行乙醇回流提取，濾液濃縮后置真空干燥箱干燥至恒重，計算浸膏得率。取干浸膏粉適量，精密稱定，至50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.1.3最大吸收波長的確定將蘆丁對照品溶液在400～600nm波長范圍內進行掃描，發現在506nm波長處有最大吸收峰，故選擇506nm作為檢測波長。

2.1.4標準曲線的測定分別取上述蘆丁對照品溶液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0mL置于25mL容量瓶中，各加水至6mL，加5%亞硝酸鈉溶液1mL，搖勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1mL，搖勻，放置6min，加4.3%氫氧化鈉溶液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15min，以相應的試劑為空白，按照紫外-可見分光光度法，在506nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為：Y=14.014X-0.019 4(r=0.999 9)，線性范圍為0.008～0.048 mg/mL。

2.1.5精密度考察取一定濃度的對照品溶液4mL，按2.1.4項下操作，連續測定6次吸光度值，其RSD值為0.12%，表明本方法的精密度良好。

2.1.6重復性考察取供試品溶液4mL，按2.1.4項下操作，連續測定6次吸光度值，其RSD值為0.20%，表明本方法的重復性符合要求。

2.1.7穩定性考察吸取供試品溶液4mL，按2.1.4項下操作，分別于顯色后0,5,10,15,20,25,30min測定吸光度，其RSD為1.25%，表明供試品溶液在顯色后30min內吸光度穩定。

2.1.8加樣回收率取同一樣品約40.3mg，精密稱定6份，按2.1.4.2溶液的制備方法制備供試品溶液，取4mL供試品溶液，采用加樣回收試驗，分別加入2mL蘆丁對照品溶液(0.2mg/mL)，置于25mL容量瓶中，按2.1.4項下步驟進行操作測定其吸光度，平行操作6份，計算其平均加樣回收率為98.2%，RSD為0.87%，結果表明方法回收率良好。

2.1.9總黃酮測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各4mL，按2.1.4項下方法顯色后置紫外-可見分光光度計中測定即得。

2.2浸膏得率測定分別按醇提和水提正交試驗提取后濾過，得醇提液或水提液，濾液濃縮，置已干燥至恒重的蒸發皿中，水浴蒸干后置真空干燥箱60℃干燥至恒重，計算浸膏得率(浸膏得率=干浸膏質量/藥材質量×100%)。

2.3醇提正交試驗

2.3.1醇提正交試驗設計選用乙醇對桃仁、紅花、當歸、川芎進行回流提取，以總黃酮含量和浸膏得率為評價指標進行綜合評價(浸膏得率和總黃酮含量的權重系數分別為0.4，0.6)，以乙醇濃度(A)、乙醇用量(B)、提取時間(C)、提取次數(D)為因素，選取三個水平，按L9(34)表進行正交試驗，優選最佳的醇提工藝條件，醇提正交試驗因素水平表見表1。

表1　醇提正交試驗因素水平表

表2　醇提正交試驗結果

2.3.2醇提正交試驗結果由直觀分析可得，對乙醇提取效果的因素影響為A>D>C>B,，最佳工藝的組合為A3B3C2D3。以極差最小的B因素為誤差項進行方差分析，結果顯示A因素與D因素對醇提工藝具有顯著性影響，結合生產實際與成本考慮，選擇乙醇提取的最優組合為A3B1C2D3，即乙醇濃度為80%，6倍量提取三次，每次1.5h。

表3　醇提正交方差分析

注：F臨界值：F0.05(2,2)=19。

2.3.3驗證試驗按處方比例稱取桃仁9g、紅花6g、當歸9g、川芎6g，3份，按最優醇提工藝進行試驗，結果見表4，表明優選的工藝合理、穩定、可行。

表4　醇提工藝驗證試驗結果

3討論

桃紅四物湯由四物湯(熟地、當歸、白芍、川芎)加上桃仁、紅花二味中藥組成，臨床用于血瘀兼有血虛證的治療，療效顯著[10]。在桃紅四物湯的提取工藝研究中，根據組方藥物有效成分的理化性質，采用不同的溶劑進行提取，首先對其中含脂溶性成分較多的桃仁、紅花、當歸、川芎四味藥的醇提工藝進行考察。其中，浸膏得率是工藝優選中的傳統指標，總黃酮為方中桃仁、紅花、當歸、川芎四味藥中的有效成分，通過多指標綜合評分來全面地評價提取工藝，優選出桃紅四物湯的最佳醇提工藝，為今后桃紅四物顆粒的研制和開發提供前期必要的基礎和有利的保障。

參考文獻

[1]韓嵐,許釩,章小兵,等.桃紅四物湯活血化瘀作用的實驗研究[J].安徽中醫學院學報,2007,26(1):36-38.

[2]張正升,彭代銀.桃紅四物湯臨床應用研究進展[J].安徽醫藥,2011,15(9):1 162-1 165.

[3]李翊,彭代銀.桃紅四物湯的藥理學研究進展[J].安徽醫藥,2011,15(5):529-531.

[4]韓嵐,彭代銀,許釩,等.桃紅四物湯抗血栓形成作用研究[J].安徽中醫學院學報,2010,29(1):47-49.

[5]王權,吳德玲,黃金玲,等.多指標正交試驗優選苓桂術甘顆粒水提工藝[J].安徽中醫學院學報,2013,32(4):87-90.

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[9]鄭杭生,李計萍,韓煒,等.紫外-可見分光光度法測定總黃酮含量的方法學考查要點[J].中成藥,2008,30(9):1 364-1 365.

[10]丁艷杰,張前德.桃紅四物湯臨床與實驗研究進展[J].江蘇中醫藥,2010,42(1):77-79.

Optimization of Alcohol Extraction Process for Taohong Siwu Decoction by Orthogonal Test

YAO Liang, LI Shan-shan, YU Fan, PENG Dai-yin

AnhuiUniversityofChineseMedicine,Hefei230031,China.

Abstract:Objective: To optimize the ethanol extraction technology for Taohong Siwu Decoction. Methods:With yield of total flavonoids and extract as indexes, orthogonal test was adopted to optimize the ethanol extraction technology by taking the concentration of ethanol,the amount of solvent, extraction time and extraction times as indexes. Results:The optimal process of the ethanol extraction technology was as follows: add 3times with 6 times amount of 80% ethanol, and 1.5h for each time. Conclusion:The optimized ethanol extraction technology was reasonable and feasible, which can be provided as the reference for the industrialized production.

Key words:Taohong Siwu Decoction; Water Extraction Process; Orthogonal Test; Total Flavonoids; Extract

收稿日期：(2014-11-09)編輯：曾文雪

中圖分類號：R284.2

文獻標識碼：A