HPLC法測定太平糖克丸中馬錢苷的含量

★　賴杰仁第一作者：賴杰仁，高級工程師，執業藥師。研究方向：中藥新制劑與新技術。Tel：079-88883，E-mail：smz_lai@63.com。　謝二磊　(.九江市中醫醫院　江西 九江 33000；.江西省藥品科技開發部　南昌 33009)

HPLC法測定太平糖克丸中馬錢苷的含量

★賴杰仁1*第一作者：賴杰仁，高級工程師，執業藥師。研究方向：中藥新制劑與新技術。Tel：0792-8188832，E-mail：smz_lai@163.com。謝二磊2(1.九江市中醫醫院江西 九江 332000；2.江西省藥品科技開發部南昌 330029)

摘要：目的：建立太平糖克丸中馬錢苷的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法，Prontosil 120-5-C18柱(250mm×4.6mm,5μm)，流動相為四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87)；流速1.0mL/min；檢測波長236nm；柱溫30℃；進樣量10μL。理論板數按馬錢苷峰計算應不得低于4 000。結果：馬錢苷對照品進樣量在0.030 2 g～3.017 7 g范圍內，進樣量與峰面積呈良好的線性關系(r=0.999 9)，馬錢苷平均加樣回收率為97.24%，RSD值1.55%(n=6)。結論：本方法操作簡便，準確可靠，專屬性強，重現性好。適宜用于測定太平糖克丸中馬錢苷的含量。

關鍵詞：太平糖克丸；馬錢苷；含量測定；高效液相色譜法

太平糖克丸系九江市中醫醫院自主研發的省重點專科糖尿病科特色醫院制劑，已取得醫療機構制劑批準文號。本品由山茱萸、生地、黃芪、女貞子等十余味中藥組成，具有益氣養陰，化濁降糖的功效，臨床應用于2型糖尿病癥屬氣陰兩虛或無癥狀糖耐量減損者，安全可靠，療效顯著。中國藥典從2005版起將馬錢苷作為中藥材山茱萸的質量控制指標之一，基于馬錢苷在復方制劑中作為主要的指標性成分，本文采用高效液相色譜法測定馬錢苷的含量，將馬錢苷的含量作為太平糖克丸的質量評價指標，旨在為本醫院制劑建立內控標準。

1儀器與藥品

Waters系列高效液相色譜儀，包括：Waters 600 controller, PDA2996型二極管陣列檢測器，Empower化學工作站；SHIMADZULC-2010AHT高效液相色譜儀，紫外可變波長檢測器，LC-solution色譜工作站；KQ5200B型超聲波清洗機(昆山市超聲儀器有限公司)。

馬錢苷對照品(含量測定用，99.2%，111640-201005，中國藥品生物制品檢定所)，甲醇、四氫呋喃、乙腈均為色譜純，其他試劑為分析純。

太平糖克丸(批號：20120601、20120602、20120603、20120701、20120702、20120703、20120901、20120902、20120903、20120904，九江市中醫醫院研制)。

2.1色譜條件色譜柱：Prontosil 120-5-C18柱(250mm×4.6mm,5μm)。流動相：四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87)；流速：1.0mL/min；檢測波長：236nm；柱溫：30℃；進樣量：10μL。理論板數按馬錢苷峰計算應不得低于4000。

2.2檢測波長的確定用PDA檢測器對馬錢苷對照品與樣品溶液中與馬錢苷對照品相應位置上的色譜峰在400～210 nm波長范圍內進行光譜掃描，結果均在236nm波長附近處有最大吸收，故確定檢測波長為236nm。

2.3樣品溶液的制備

2.3.1對照品溶液的制備精密稱取于五氧化二磷減壓干燥12h的馬錢苷對照品15.21mg，置50mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得對照品儲備液。精密移取對照品儲備液5mL，用50%甲醇定容至50mL容量瓶中，即得馬錢苷對照品溶液。

2.3.2供試品溶液的制備重量差異項下本品適量，研碎，取約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25.00mL，密塞，稱定重量，加熱回流60min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3.3陰性對照樣品溶液的制備除山茱萸以外，其余各藥材按太平糖克丸處方量制備陰性對照樣品，同供試品溶液制備方法，制得缺山茱萸的陰性對照樣品溶液。

2.4方法的專屬性試驗分別精密吸取供試品溶液、陰性對照樣品溶液與對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件測定。結果顯示馬錢苷峰形良好，基線平穩，對照品、供試品在相同時間有一色譜峰，且陰性對照樣品無干擾，見圖1。

2.5線性關系考察分別吸取上述對照品溶液1,5，10，20μL，對照品母液10μL，注入液相色譜儀中，按“2.1”項下色譜條件測定對照品峰面積，以進樣量與峰面積進行回歸處理，回歸方程為：Y=1.58×106X+6.21×103(n=5)，馬錢苷對照品進樣量在0.030 2～3.017 7 μg范圍內樣品進樣量與峰面積呈良好的線性關系(r=0.999 9)。

2.6精密度試驗按“2.1”項下色譜條件，精密吸取對照品溶液10μL，重復進樣6次，測定馬錢苷峰面積值，計算得對照品峰面積值相對標準差為0.2%，測定方法的精密度良好。

A.馬錢苷對照品溶液；B.供試品溶液；C.陰性對照

2.7穩定性試驗按“2.1”項下色譜條件，分別在0,1,3,5,7,9,12,24h，精密吸取照“2.3.2”項下制備的供試品(批號：20120701)溶液10L，測定供試品溶液中馬錢苷峰面積值，計算供試品馬錢苷峰面積值的相對標準差為1.85%，表明供試品溶液在24h內基本穩定。

2.8重復性試驗重量差異項下本品(批號：20120701)適量，研碎，取約1g，共6份，精密稱定，照“2.3.2”項下制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，處理結果數據，平均含量為0.8786mg/g，RSD為1.62%，方法重現性良好。

2.9加樣回收率試驗重量差異項下本品(批號：20120701，馬錢苷含量為0.8786mg/g)，研細，取6份，每份約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入含馬錢苷(濃度30.177μg/mL)對照品的50%甲醇混合溶液25.00mL，稱定重量，照“2.3.2”項下制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，計算加樣回收率(見表1)。樣品中馬錢苷平均回收率為97.24%，RSD值為1.55%(n=6)，馬錢苷回收率良好。

2.10耐用性試驗重量差異項下本品(批號：20120701、20120702)，研細，取約1.0g，精密稱定，照“2.3.2”項下制備供試品溶液，分別用A：Prontosil 120-5-C18(250mm×4.6mm，5μm)、B：Agilent Eclipse XDB-C18(250mm×4.6mm,5μm)、C：Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm)三種品牌的色譜柱，按“2.1”項下色譜條件測定馬錢苷含量，馬錢苷含量的RSD值低于1.0%，見表1。

表1　不同色譜柱測定結果馬錢苷含量

表2　太平糖克丸中馬錢苷含量(n=4)

2.11樣品測定重量差異下本品10批次，研細，各取約1g，精密稱定，照“2.3.2”項下制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，計算馬錢苷含量(見表3),馬錢苷含量在0.6221～0.9136mg/g。根據表2測定結果，考慮藥材來源、配制操作等因素的差異影響，設以平均含量的80%為太平糖克丸馬錢苷含量的限度，即規定：本品每1g含山茱萸以馬錢苷(C17H26O10)計，不得少于0.60mg。

3討論

3.1流動相的選擇方法學研究實驗中，分別比較了以甲醇-0.1%磷酸、乙腈-0.1%磷酸和四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液為流動相，考察馬錢苷的分離情況及峰形，結果以四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87)為流動相的分離情況及峰形為佳；故確定流動相為：四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87)。

3.2供試品溶液制備的方法考察在供試品溶液的制備方法實驗中，分別考察了加熱回流60min，超聲提取(功率300W，頻率25kHz)60min兩種提取方式，結果顯示，加熱回流提取較為充分，故采用加熱回流方式制備供試品溶液。分別選擇了30%甲醇、50%甲醇和甲醇為提取溶劑，考察提取溶劑的影響，結果以50%甲醇提取效果最好。分別加熱回流30,60,90min，考察結果顯示，加熱回流60min即可得滿意結果。

參考文獻

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征稿啟事

《江西中醫藥》所設的重點欄目有《明醫心鑒》、《滕王閣醫話》等。《明醫心鑒》以介紹名老中醫經驗和中醫臨證心得為主，重點刊載中醫關于疑難病的診療經驗，要求觀點、方法新，經驗獨到。《滕王閣醫話》主要反映中醫教學、科研、臨床的一得之見，要求以小見大，有感而文，語言生動流暢，可讀性強，富于知識性、趣味性。

Determination of Loganinin in Taiping Tangke Pills by HPLC

LAI Jie-ren1, XIE Er-lei2

1.JiujiangHospitalofTCM,Jiujiang332000,China；

2.JiangxiProvincialEngineeringResearchCenterforDrugandMedicalDeviceQuality,Nanchang330029,China.

Abstract:Objective: To establish a HPLC method for the content determination of Loganin in Taiping Tangke pills. Methods: Samples were determined by HPLC on the C18column(250mm×4.6mm,5μm). The column temperature was 30℃. The mobile phase was consisted of tetrahydrofuran - acetonitrile - methanol - 0.05% phosphoric acid (1∶8∶4∶87). The flow rate was 1.0 mL/min at UV detection wavelength of 236 nm. Results: The lincear range of Loganin was 0.030 2 g～3.017 7 g，r=0.999 9. The average recovery of Loganin is 97.24%，RSD=1.55% (n= 6). Conclusion: The method is convenient，accurate，specificity and reproducibility for quality control of Taiping Tangke Pills.

Key words:Taiping Tangke Pills；Loganin；Determination；HPLC

收稿日期：(2014-11-10)編輯：曾文雪

中圖分類號：R286.0

文獻標識碼：B