化學(xué)反應(yīng)法檢測細(xì)菌性陰道病的臨床應(yīng)用分析

徐風(fēng)芹　楊有琴　劉　津　海洋石油總醫(yī)院檢驗(yàn)科,天津市　300452

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化學(xué)反應(yīng)法檢測細(xì)菌性陰道病的臨床應(yīng)用分析

徐風(fēng)芹楊有琴劉津海洋石油總醫(yī)院檢驗(yàn)科,天津市300452

摘要目的：采用細(xì)菌性陰道病聯(lián)合測定試劑盒(化學(xué)反應(yīng)法)，結(jié)合傳統(tǒng)濕片常規(guī)檢測婦女陰道分泌物，探討其臨床應(yīng)用價(jià)值，為細(xì)菌性陰道病的診斷提供理論依據(jù)。方法:對2013年6月-2014年6月在婦科門診和住院的725例陰道分泌物標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行濕片檢查和細(xì)菌性陰道病聯(lián)合測定試劑盒檢測，做分析比較。結(jié)果:各種陰道炎中細(xì)菌性陰道炎感染率最高，其次是真菌、滴蟲，各種陰道感染既可單獨(dú)存在，也可合并感染。結(jié)論:細(xì)菌性陰道病聯(lián)合測定試劑盒檢測簡便、快速、敏感，同時(shí)與常規(guī)鏡檢聯(lián)合檢測，大大提高婦科各種陰道炎癥的檢出，值得臨床推廣使用。

關(guān)鍵詞細(xì)菌性陰道病陰道分泌物常規(guī)鏡檢聯(lián)合檢測

生殖道感染是正常育齡婦女常見多發(fā)疾病，主要臨床癥狀為外陰瘙癢、陰道分泌物增多等，給患者的生活和工作帶來了諸多不便，對患者的心理和生理都造成了很大的影響，嚴(yán)重者甚至可引起宮內(nèi)感染、盆腔感染等。主要包括細(xì)菌性陰道病(Bacterial vaginosis,BV)、念珠菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎及其他陰道炎癥。此類疾病多由陰道菌群失調(diào)、病原體侵入引起。檢測生殖道感染的傳統(tǒng)方法為陰道分泌物常規(guī)檢查，即通過陰道pH值、清潔度及微生物檢查來判斷女性陰道分泌物是否異常。此法要求檢測人員要有豐富的經(jīng)驗(yàn)，主觀性強(qiáng)且工作量大。近年來本實(shí)驗(yàn)室引進(jìn)一種BV聯(lián)合測定試劑盒，其操作簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)。現(xiàn)就我院2013年6月-2014年6月在婦科門診和住院的725例婦女BV聯(lián)合測定和常規(guī)檢測進(jìn)行對比分析，結(jié)果報(bào)告如下。

1樣本與方法

1．1檢測樣本725例陰道分泌物樣本均來自于2013年6月-2014年6月在我院婦科門診和住院患者，包括自述有陰道分泌物增多、有異味、外陰部瘙癢等癥狀而做檢查的患者以及放置或取節(jié)育環(huán)、人工流產(chǎn)及引產(chǎn)前檢查的患者，年齡19～58歲，平均年齡36.5歲。樣本由婦科醫(yī)生用消毒的無菌棉拭子自患者陰道后穹隆處取出2份陰道分泌物，一份用于BV聯(lián)合測定技術(shù)檢測，另一份用于陰道分泌物常規(guī)檢測。標(biāo)本采集后15min內(nèi)送檢。所有患者采集標(biāo)本時(shí)，經(jīng)醫(yī)生了解取樣前72h內(nèi)無性生活，無陰道用藥及任何陰道灌注。

1．2檢測方法儀器：奧林巴斯雙目顯微鏡、BV反應(yīng)板加熱器。試劑：生理鹽水，BV聯(lián)合測定試劑盒(化學(xué)反應(yīng)法，珠海麗珠試劑股份有限公司生產(chǎn))。操作：BV聯(lián)合測定試劑盒檢測項(xiàng)目包括唾液酸酶、過氧化氫濃度和白細(xì)胞酯酶的定性檢測及陰道pH值檢測。由檢驗(yàn)技術(shù)人員嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。而另一份標(biāo)本濕片檢查，參照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[1]，檢驗(yàn)技術(shù)人員收到標(biāo)本后用生理鹽水直接涂片，在高倍鏡下查找滴蟲、真菌孢子及菌絲，并判斷清潔度。

1．3結(jié)果判斷(1)清潔度判斷標(biāo)準(zhǔn)：清潔度判斷分為Ⅰ～Ⅳ度。Ⅰ度：鏡下可見大量上皮細(xì)胞和陰道桿菌；Ⅱ度：有部分陰道桿菌和上皮細(xì)胞，也有少量膿細(xì)胞和雜菌；Ⅲ度：有大量的膿細(xì)胞和雜菌，只見少量陰道桿菌和上皮細(xì)胞；Ⅳ度：鏡下無陰道桿菌和上皮細(xì)胞，幾乎全是膿細(xì)胞和大量雜菌。清潔度Ⅰ～Ⅱ度為正常，Ⅲ～Ⅳ度為異常，大多數(shù)可能為陰道炎。(2)聯(lián)合測定試劑盒結(jié)果判斷：pH值檢測對照比色卡進(jìn)行判讀，正常陰道pH值≤4.4。唾液酸酶：檢測孔顏色變藍(lán)色為BV陽性，不變色為BV陰性。過氧化氫：過氧化氫濃度過低，檢測孔不變色，提示陰道微生態(tài)失衡，為過氧化氫檢測陽性。檢測孔顏色變藍(lán)色，說明過氧化氫濃度處于正常水平，過氧化氫檢測陰性。白細(xì)胞酯酶：檢測孔顏色變藍(lán)色,白細(xì)胞酯酶陽性, 不變色為陰性。

2結(jié)果

2.1聯(lián)合測定試劑盒725例患者標(biāo)本，725例患者陰道分泌物BV結(jié)果,結(jié)合患者臨床癥狀，確診137例，陽性率為18.90%，其中三項(xiàng)均為陽性112例，陽性率15.45%，白細(xì)胞酯酶和唾液酸酶同時(shí)陽性25例，陽性率3.45%；過氧化氫和白細(xì)胞酯酶同時(shí)陽性346例，陽性率47.72%；單項(xiàng)白細(xì)胞酯酶陽性患者217例，陽性率為29.93%。結(jié)果見表1。

表1　聯(lián)合測定試劑盒檢測結(jié)果

2.2725例患者陰道分泌物直接濕片檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn):滴蟲檢出25例，陽性率為3.4%；真菌檢出116例，陽性率為16.0%。其中真菌性陰道炎合并BV 38例，滴蟲性陰道炎患者合并BV 14例。725例患者陰道分泌物直接濕片清潔度檢測。清潔度檢測Ⅰ～Ⅱ度內(nèi)視為正常，Ⅲ～Ⅳ度為異常，多數(shù)為陰道炎。

2.3725例患者陰道分泌物清潔度檢測：Ⅰ度、Ⅱ度患者319例，占44.0%；Ⅲ度、Ⅳ度患者為406例，占56.0%。在唾液酸酶試驗(yàn)陽性患者中有41例陰道分泌物清潔度為Ⅰ～Ⅱ度，占23.4%。

3討論

陰道分泌物俗稱白帶，是由女性生殖系統(tǒng)分泌的一種白色稀糊狀液體。陰道寄生菌群混雜在陰道分泌物中，一般不致病，這是由于正常育齡婦女的內(nèi)分泌激素作用，使得陰道上皮細(xì)胞增生，其表層細(xì)胞中存在豐富的糖原，十分有利于乳酸桿菌生長。此細(xì)菌占陰道菌群的90%以上，抑制了其他致病菌的生長，起到降低陰道pH 值、維持陰道菌群平衡等保護(hù)作用[2，3]。

當(dāng)某些原因引起女性雌激素水平下降，或用堿性清洗液過度沖洗陰道及在大量使用抗生素后，乳酸桿菌的生長會受到抑制；性交頻繁等則可導(dǎo)致致病性厭氧菌和加特納菌大量繁殖，進(jìn)而引起陰道微生物生態(tài)失衡，導(dǎo)致BV。由于厭氧菌產(chǎn)生的脫羧酶，激發(fā)加特納菌產(chǎn)生揮發(fā)性胺類，釋放出魚腥臭味，黏附有致病菌的陰道表皮細(xì)胞脫落，引起陰道分泌物量增加，化學(xué)性質(zhì)也隨之發(fā)生了改變。這種變化主要表現(xiàn)在：pH 增高；致病菌分泌的胞外酶(如唾液酸酶)增高和代謝產(chǎn)物增高，陰道內(nèi)的白細(xì)胞及吞噬細(xì)胞等陰道細(xì)胞被細(xì)菌破壞釋出的白細(xì)胞酯酶增高以及正常菌群的酶與代謝產(chǎn)物過氧化氫減低。由于菌群紊亂，陰道炎癥并不十分明顯，分泌物中的白細(xì)胞減少。在常規(guī)鏡檢中，主要依靠白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、陰道桿菌及雜菌的比例劃分清潔度，操作中會因?yàn)榧尤脒^量生理鹽水而導(dǎo)致視野中細(xì)胞、雜菌數(shù)減少。檢測發(fā)現(xiàn)在唾液酸酶試驗(yàn)陽性患者中有41例其陰道分泌物清潔度為Ⅰ～Ⅱ度，占23．4%，因此，單純的清潔度檢查對婦科炎癥有一定的漏診率。乳酸桿菌的檢測用鹽水濕片鏡檢不能確定，還需要革蘭氏染色，步驟多、檢驗(yàn)時(shí)間長，且僅能從形態(tài)上予以判斷。

BV聯(lián)合測定試劑盒是用酶學(xué)方法檢測陰道分泌物。唾液酸酶是由引起B(yǎng)V的致病菌分泌的一種特異性胞外酶，此酶可排至陰道分泌物中，在正常婦女陰道中一般無此酶，因此具有較高的特異性和敏感性。其濃度與BV發(fā)病程度成正比。過氧化氫由陰道乳酸桿菌分泌，其濃度與乳酸桿菌數(shù)量呈正相關(guān)，不受藥物、宮頸黏液等因素的影響，因此可用過氧化氫來表示分泌物中乳酸桿菌量的多少。白細(xì)胞酯酶主要存在于粒細(xì)胞的胞漿中，當(dāng)陰道發(fā)生炎癥時(shí)，病原菌的趨化作用在病灶部位聚集，釋放大量白細(xì)胞酯酶，可直接反映陰道內(nèi)炎癥和黏膜損傷程度。

研究發(fā)現(xiàn)，隨著人們衛(wèi)生意識的增強(qiáng)，生活水平的提高，滴蟲性陰道炎的感染率明顯下降，而機(jī)會菌感染性陰道炎，如真菌陰道炎和BV有所上升。這些感染多無癥狀，其危害很大，有文獻(xiàn)報(bào)道稱BV與婦女盆腔炎、剖腹產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎、羊水感染、絨毛膜羊膜炎以及早產(chǎn)等有關(guān)[4，5]。因此，建議將BV檢查作為陰道分泌物常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目。另外研究還發(fā)現(xiàn)，BV可合并真菌、滴蟲感染。滴蟲是有氧生成體，它消耗陰道內(nèi)的氧從而刺激厭氧菌繁殖，因此，50%以上的滴蟲感染者同時(shí)伴有BV的感染[6]。

在操作中，檢驗(yàn)人員需要注意，聯(lián)合測定試劑盒法雖然操作省時(shí)省力，但是由于應(yīng)用的是化學(xué)反應(yīng)法，酶試劑欠穩(wěn)定，為確保檢測準(zhǔn)確性，試劑盒要在2～8℃避光、干燥條件下保存。另外，本方法對標(biāo)本要求嚴(yán)格，有顏色的陰道分泌物可能會影響結(jié)果的判讀，如帶血的樣本、陰道用藥后、帶有精液等都可誤導(dǎo)結(jié)果。因此，顯微鏡濕片鏡檢與BV聯(lián)合測定試劑盒聯(lián)合使用，可以提高婦科陰道感染的診斷率，避免誤漏診，對陰道微生態(tài)學(xué)研究以及臨床用藥指征提供更為快速有效的分析和可靠的依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜，主編.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程〔M〕.第2版.南京：東南大學(xué)出版社，2006：324.

[2]李崇劍，許凱聲.6 803例陰道分泌物常規(guī)檢查結(jié)果分析〔J〕.上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2000,15(1)：56.

[3]石麗琳，李志琴．688例陰道分泌物檢查結(jié)果分析〔J〕 ．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8(9):1099.

[4]Linda M，Barbara R，etal．BV blue test for diagnosis of bacterial vaginosis〔J〕．J Clin Microbiol，2003，41(5)：1925-1928．

[5]田豐蓮，楊冬梓，張小莊，等．廣東地區(qū)圍絕經(jīng)期婦女健康狀況和需求調(diào)查〔J〕．第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，19(8)：928-932．

[6]楊林．陰道分泌物常規(guī)檢測與BV 實(shí)驗(yàn)聯(lián)合運(yùn)用的分析〔J〕 ．臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012,11(17)：1420-1421.

(編輯羽飛)

收稿日期2015-02-04

中圖分類號：R711．31

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

文章編號：1001-7585(2015)11-1517-02