高壓氧對兔耳增生性瘢痕后期的影響*

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高壓氧對兔耳增生性瘢痕后期的影響*

張秀云張維娜任紀(jì)禎萬金娥

青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)美容中心，山東省青島市266000

病理性瘢痕的形成機制眾多，其中低氧在病理性瘢痕形成的過程中起關(guān)鍵作用[1]。目前瘢痕的修復(fù)方法主要有皮瓣修復(fù)術(shù)和移植術(shù)等[2，3]。有研究報道，高壓氧對瘢痕增生具有促修復(fù)作用[4]，但其作用機制鮮有報道。在之前的研究中，筆者發(fā)現(xiàn)高壓氧可以顯著減少兔耳增生性瘢痕中成纖維細(xì)胞的數(shù)量，抑制組織中TGFβ1和VEGF水平，提示高壓氧的作用機制可能與TGFβ1和VEGF的調(diào)控有關(guān)[5]。目前的研究多數(shù)為瘢痕早期的治療，本研究旨在考察高壓氧對病理性瘢痕后期的治療效果。

1材料與方法

1.1實驗動物健康新西蘭大耳白兔20只，體重2.5~3.0kg，兔耳健全，雌雄不拘，由青島市實驗動物中心提供，許可證號SCXK(魯)2014-0001。

1.2兔耳增生性瘢痕模型的建立[6]20只新西蘭大耳白兔適應(yīng)性喂養(yǎng)48h，水合氯醛(3ml/kg)腹腔注射麻醉，固定于手術(shù)臺上，兔耳腹側(cè)剪毛，2.5%碘伏消毒兔耳腹側(cè)皮膚，于兔耳腹側(cè)制造直徑1cm的圓形缺損，去除皮膚全層及軟骨膜，每耳6個創(chuàng)面，創(chuàng)面間距不小于1cm。術(shù)后創(chuàng)面暴露，外用紅霉素眼膏，避免感染。造模成功后隨機分為四組，實驗組(A~C組)和對照組(D組)，每組5只。

1.3治療方法造模4周后，實驗組置于DS-Ⅱ型實驗動物加壓艙，純氧洗艙5min，升壓10min至0.1MPa后穩(wěn)壓，吸純氧60min，減壓10min。實驗組A、B和C組高壓氧療程分別為4周、8周和12周，1次/d，每4周間歇1周。對照組置于常壓空氣環(huán)境。

1.4瘢痕指數(shù)測定治療前用游標(biāo)卡尺測定瘢痕周圍正常皮膚的高度(a)及全層瘢痕皮膚的厚度(b)，計算出瘢痕增生指數(shù)(Hypertrophic index，HI=b/a)。

1.5HE染色治療結(jié)束后，在同樣麻醉條件下統(tǒng)一切取兩組瘢痕組織及周圍1mm正常組織標(biāo)本，每組隨機選取10個組織標(biāo)本。10%福爾馬林固定標(biāo)本，常規(guī)石蠟包埋，行蘇木精-伊紅染色，光鏡下觀察HE染色切片。

1.6統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示計量資料，采用單因素方差分析對各組HI值進(jìn)行檢驗；對各組均數(shù)采用Bonferroni檢驗進(jìn)行兩兩比較，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1瘢痕組織形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果造模1周后創(chuàng)面外觀比較干燥，造模4周后創(chuàng)面愈合(上皮化)，瘢痕增生明顯。愈合區(qū)表現(xiàn)為明顯高于周圍正常皮膚，瘢痕組織不超出原有創(chuàng)傷范圍，呈暗紅色，觸之硬。

實驗組經(jīng)高壓氧治療4周后，瘢痕外觀色澤變淡，部分瘢痕較對照組變平，同期對照組較實驗組瘢痕色澤淡；治療8周后，B和C組瘢痕外觀色澤明顯變淡，質(zhì)地較軟，瘢痕較平坦；同期D組、A組瘢痕色澤較深，質(zhì)地較硬；治療12周后，C組外觀色澤接近正常皮膚色澤，質(zhì)軟，瘢痕平坦，同期對照組顏色接近實驗組，但質(zhì)地仍較硬，仍比較肥厚。實驗組A、B、C相比較，接受高壓氧治療療程越長，瘢痕退化越明顯，B、C兩組較A組瘢痕退化明顯，C組較B組退化差異性較明顯。

2.2HE染色結(jié)果HE染色結(jié)果，見圖1。其中，D組真皮層內(nèi)瘢痕組織，散在纖維母細(xì)胞增生，伴少量炎細(xì)胞浸潤，毛細(xì)血管增生不明顯。A組間質(zhì)內(nèi)膠原纖維較對照組減少，有毛細(xì)血管增生。B組纖維母細(xì)胞較對照組減少，間質(zhì)血管內(nèi)皮增生。C組皮膚組織基本正常，間質(zhì)內(nèi)散在輕度增生的纖維母細(xì)胞，毛細(xì)血管增生明顯。

圖1　HE染色結(jié)果

注：A:D組HE染色結(jié)果(×100)；B:A組HE染色結(jié)果(×100)；C:B組HE染色結(jié)果(×100)；D:C組HE染色結(jié)果(×100)。

2.3瘢痕增生指數(shù)結(jié)果顯示，四組間瘢痕增生指數(shù)相比，差異統(tǒng)計學(xué)意義(F=59.94,P<0.05)；A、B、C三組瘢痕增生指數(shù)均比D組小，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，實驗組A與C，實驗組B與C瘢痕指數(shù)相比，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且C組瘢痕增生指數(shù)最小，詳見表1。

表1　四組兔耳瘢痕的HI值變化結(jié)果

注：與D組比較，aP<0.05；與A組比較，bP<0.05；與B組比較，cP<0.05。

3討論

瘢痕是創(chuàng)傷后組織修復(fù)自然產(chǎn)物，病理性瘢痕的主要病理性特征就是膠原的大量存在，它的合成和降解直接影響瘢痕的形成及轉(zhuǎn)歸。有研究報道，低氧能夠促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖[7，8]。在之前的研究中，筆者發(fā)現(xiàn)給予兔耳增生性瘢痕高壓氧治療后，可以促進(jìn)瘢痕組織的修復(fù)，減少成纖維細(xì)胞的數(shù)量[5]。同時筆者發(fā)現(xiàn)造模后4周瘢痕組織不再發(fā)生明顯的變化，因此筆者將造模后4周作為后期治療的起始時間。筆者根據(jù)臨床高壓氧治療方案，治療4周后間歇1周，在實驗中沒有觀察到研究動物出現(xiàn)氧中毒等不良反應(yīng)。高壓氧能夠改善瘢痕組織中的低氧環(huán)境，不僅提高了組織內(nèi)氧分壓，而且增加局部組織血供。病理切片結(jié)果顯示，各實驗組毛細(xì)血管增生明顯，且接近正常組織。

本研究通過構(gòu)建兔耳瘢痕模型，探討高壓氧在病理性瘢痕形成后期促進(jìn)病理性瘢痕消退的可行性。結(jié)果顯示，瘢痕增生指數(shù)對照組明顯高于各實驗組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，隨著療程的增加瘢痕指數(shù)遞減(P<0.05)，提示高壓氧治療病理性瘢痕后期的修復(fù)效果與治療周期相關(guān)。HE染色結(jié)果顯示實驗組較對照組膠原纖維明顯減少，排列疏松；新生毛細(xì)血管增生較對照組明顯，血供增加。

綜上所述，高壓氧能夠促進(jìn)瘢痕形成后期的消退，為高壓氧的臨床應(yīng)用提供了一定的實驗基礎(chǔ)。高壓氧促進(jìn)瘢痕消退與成纖維細(xì)胞的凋亡等因素的相關(guān)性有待進(jìn)一步研究。

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(編輯羽飛)

摘要目的：探討高壓氧對兔耳增生性瘢痕后期轉(zhuǎn)歸的影響。方法:選取20只新西蘭大耳白兔建立兔耳瘢痕模型，隨機分成四組(A組、B組、C組和D組)，每組5只。實驗組(A~C)造模4周后接受高壓氧治療，對照組(D)處于常壓環(huán)境。檢測瘢痕形態(tài)學(xué)變化和瘢痕增生指數(shù)。結(jié)果:HE染色結(jié)果顯示，與對照組相比，實驗組膠原纖維增生減輕，毛細(xì)血管內(nèi)皮增生明顯；實驗組瘢痕增生指數(shù)明顯低于對照組(P<0.05)，瘢痕增生指數(shù)隨高壓氧療程的增加而減小(P<0.05)。結(jié)論:高壓氧能夠促進(jìn)增生性瘢痕后期的消退。

關(guān)鍵詞高壓氧增生性瘢痕瘢痕增生指數(shù)HE染色

Effect of Hyperbaric Oxygen on the Late Stage of Rabbit Ears Hyperplastic Scar

ZHANG Xiuyun,ZHANG Weina,REN Jizhen,etal.DepartmentofPlasticSurgery,AffiliatedHospitalofQingdaoUniversityMedicalCollege,QingdaoCity,ShandongProvince266000

ABSTRACTObjective:To investigate the role of hyperbaric oxygen on the late hyperplastic scar of rabbit ears.Methods:20 New Zealand rabbits were used for hypertrophic scar model on the ears.The rabbits were randomly divided into 4 groups(A,B,C and D groups),5 in each group.The experiment groups (A,B and C) were treated with hyperbaric oxygen for 4 weeks after modeling, while the control group (D) was kept in atmospheric environment.The morphological changes and hyperplastic of scars were assessed.Results:Compared with the control group,collagen fiber hyperplasia was reduced, while capillary endothelial hyperplasia was increased in the experiment groups by HE staining.Scar hyperplastic index in the experimental groups was significantly lower than that in the control group(P<0.05).Scar hyperplastic index was decreased with the increase of treatment significantly (P<0.05).Conclusion:Hyperbaric oxygen can repair hyperplastic scar at the late stage.

KEY WORDSHyperbaric oxygenation,Hypertrophic scar,Scar hyperplastic index,HE staining

收稿日期2015-03-24

中圖分類號：R-33

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1001-7585(2015)11-1401-02

基金項目：山東省科技發(fā)展計劃項目(2011YD18036)。通訊作者：張維娜