核酸探針在畜禽疾病診斷中的應用

邵云龍，張萬山

(1.黑龍江省龍江縣廣厚鄉畜牧獸醫綜合服務站 161122；2.黑龍江省杜蒙縣大山種羊場 166269)

核酸探針在畜禽疾病診斷中的應用

邵云龍1，張萬山2

(1.黑龍江省龍江縣廣厚鄉畜牧獸醫綜合服務站 161122；2.黑龍江省杜蒙縣大山種羊場 166269)

隨著社會經濟水平的上升，生物科學技術也不斷發展進步，在各個領域當中的應用越來越廣泛。在畜禽的疾病診斷過程中，使用生物技術制備的核酸探針也越來越多，核酸探針具有非常多的優勢，幫助畜禽疾病的診斷工作更加精確、可靠。本文主要分析核酸探針的診斷特點及其實際應用。

核酸探針；畜禽；疾病診斷；實際應用

當前，生物醫學技術不斷發展進步，在畜禽疾病診斷領域當中得到非常廣泛的應用，使畜禽疾病的診斷方式發生巨大轉變。使用生物核酸探針技術對畜禽疾病進行診斷，具有特異性強、敏感度高以及簡單快捷的優點，同時還能夠避免由于培養困難或者是混合污染的現象，能夠快速直接的對畜禽的體液、分泌物等進行檢測，不僅為相關工作人員的工作提供方便，同時對于畜禽疾病早期診斷與控制具有非常重要的意義，幫助獸醫選擇最佳的方式進行治療，杜絕大面積傳染病的發生。

1 核酸探針在畜禽疾病診斷中的特點

1.1 特異性強

使用核酸探針進行檢測是基于病原微生物的核酸堿基配對原理，通過核酸序列與標本中的另外的核酸發生互補以及結合，所以不會發生雜交的現象，更不會出現假陽性或者是假陰性，所以其特異性非常強，不會發生交叉反應和其他干擾現象。

1.2 靈敏性強

相較于傳統的放射免疫等方式，DNA或者是RNA探針具有更強的靈敏度，能夠檢測出10～12g的抗原含量，在很早以前，美國基因探針公司生產的軍團菌探針就已經能夠在0.4mg的肝臟組織中檢測出4000個以上的細菌。有學者使用通過生物素標記的流產布氏桿菌全基因組的DNA探針能夠在質量為1g的大鼠肝混合物當中檢測出105個細菌，同時還能夠檢測出通過試驗接種的小鼠質量為1g的組織中存在的107個布氏桿菌。

1.3 檢測速度快

使用常規的方式需要經過病原分離、培養等方式耗費大量的時間才能夠得出檢測結果，但是使用核酸探針可以在45分鐘之內就能夠得到結果。有學者使用探針進行斑點免疫印跡雜交測試，在感染初期，家禽體內開始血清學應答前能夠檢出體內的敗血霉形體，采樣之后最多4天就能夠得到試驗結果，如果使用培養的方式則需要更長的時間。

1.4 方法簡單

核酸探針檢測能夠對畜禽活體、死體甚至是體液和分泌物等進行檢測，不需要進行體外擴增培養，更不需要使用其他設備輔助觀察，流程非常簡單。

2 核酸探針在畜禽疾病診斷中的實際應用

2.1 雞傳染性法氏囊病毒(IBDV)的檢測

早前有學者使用生物素對合成寡合苷酸探針進行標記，將雞法氏囊組織在硝酸纖維膜上進行印記，然后與被生物素標記的探針進行雜交，隨后對人工方式感染雞的機體進行檢測，取得非常滿意的效果。之后又有學者使用26CI探針進行斑點雜交，對血清1型和2型的不同IBDV實施檢測，結果顯示探針沒有與病毒發生交叉反應。且該探針檢測病毒與核酸的最小量可以達到1mg，同時能夠檢測出注射疫苗2～3天之后雞體內法氏囊病毒以及組織當中存在的IBDV。

2.2 雞馬立克氏病毒的檢測

我國生物研究者使用光敏的生物素對特定基因文庫中的L片斷進行標記，制備出雞馬立克氏病毒的光敏核酸探針，然后對培養物當中的病毒實施檢測，發現探針對病毒中的血清1型馬立克氏病毒中的DNA分子發生雜交，而2型和3型都不發生雜交反應。然后使用血清1型和血清2型對雛雞進行接種，在第14天及30天使用斑點雜交法實施病毒DNA的檢測，結果血清1型的結果呈現陽性，而血清2型的結果呈現陰性，證明制備的核酸探針能夠對雞馬立克氏病毒的強毒株進行診斷。

2.3 雞減蛋綜合癥病毒的檢測

研究在使用制備的光敏性生物素探針對雞減蛋綜合癥病毒感染的鴨胚尿囊液提取物實時監測，結果能夠證實該探針對于雞減蛋綜合癥病毒具有很強的特異性，同時能夠檢測到至少1pg的雞減蛋綜合癥病毒DNA；但是在正常的鴨胚尿囊液的提取物不會與無質粒的受體菌DNA發生雜交反應。

2.4 雞新城疫病毒的檢測

國外的相關研究人員使用人工合成的寡合核苷酸DVA制備的探針進行實驗，對環境及其他條件非常嚴格，然后試試狹縫印跡雜交實驗，結果顯示該探針能夠識別出被檢出的15個NDV。該探針的序列來源于雞新城疫病毒基因組高度保守區域，具有非常強的特異性。