新生兒敗血癥實驗診斷方法研究進展

屠 妍綜述，蘆 起審校

（重慶醫科大學附屬兒童醫院新生兒診治中心，重慶400014）

新生兒敗血癥實驗診斷方法研究進展

屠 妍綜述，蘆 起審校

（重慶醫科大學附屬兒童醫院新生兒診治中心，重慶400014）

嬰兒，新生，疾病；實驗室技術和方法；感染；敗血癥；綜述

新生兒敗血癥是指細菌或真菌在新生兒期侵入血液循環，繁殖并產生毒素所造成的伴有全身炎癥反應綜合征的臨床綜合征，是目前造成新生兒死亡的主要原因之一。新生兒敗血癥的臨床表現不典型，且由于新生兒各系統發育不完善，尤其是免疫力低下，若不及時治療，可能并發其他嚴重并發癥，從而延長住院時間和增加醫療費用，甚至可能遺留嚴重后遺癥，從而提高了潛在醫患矛盾的發生率。因此，早期診斷和治療非常重要。本文旨在對國內外常用于新生兒敗血癥的實驗診斷方法進行闡述，探討敗血癥患兒有效的早期診斷方法。

1 微生物培養

微生物培養所需時間長，培養出陽性結果至少需要24～48 h，因此難以在新生兒敗血癥早期診斷中發揮作用，且存在靈敏度不高、假陰性率較高等不足。微生物培養的陽性率低，僅為5%～10%[1]，且常受采血量、感染細菌數量、提前使用抗菌藥物及實驗操作技術等影響[2]。盡管如此，目前尚無取代其地位的其他有效方法，藥敏試驗能有效指導抗菌藥物的使用，因此，微生物培養仍是診斷新生兒敗血癥的“金標準”。

2 外周血象

白細胞計數（WBC）、血小板計數（Plt）、桿狀核細胞/中性粒細胞（I/T）早在2003年已被納入新生兒敗血癥的診斷標準中[3]。但新生兒外周血象在出生的早期階段波動范圍較大，需結合孕周及采血時的日齡具體分析。Murphy等[4]指出，WBC診斷敗血癥的靈敏度低，結合Plt、I/T時靈敏度或特異度也無法達到較高的水平，并認為I/T在排除非感染病例中更為可靠。同時，Puopolo等[5]也指出，WBC、絕對中性粒細胞計數、I/T用來排除非感染病例或許較診斷新生兒敗血癥更為合適。

3 C反應蛋白（CRP）

CRP是一種正性急性時相蛋白，在細菌感染4～6 h開始上升，36 h達高峰。CRP在機體感染24～48 h后才能升至診斷新生兒敗血癥的有效閾值[6]，因此，CRP無法成為新生兒敗血癥早期診斷的理想指標。同時，CRP在新生兒出生3 d內變化較大，因此，在診斷早發型敗血癥中使用受限。CRP≥10 mg/L時，診斷晚發型新生兒敗血癥的靈敏度為68%，特異度為90%[7]。超敏C反應蛋白（hs-CRP）≥13.5 mg/L時，診斷新生兒敗血癥的靈敏度、特異度分別為76%、72%[8]。CRP結合其他指標如外周血象、降鈣素原（PCT）等可提高診斷的準確率。值得指出的是，CRP和hs-CRP的操作方法簡單，價格低廉，采血量少，因此是目前廣泛應用于臨床診斷新生兒敗血癥的實驗室指標之一。動態觀察CRP和hs-CRP變化可反映治療療效，以及判斷抗菌藥物的使用療程，但停用抗菌藥物不能僅靠CRP或hs-CRP決定，同時應結合臨床、血培養結果及其他實驗室指標綜合考慮。

4 PCT

PCT是一種降鈣素前體，健康人血漿中的PCT幾乎檢測不到（＜0.1 ng/mL），細菌感染時可明顯升高。PCT在細菌感染4 h后迅速上升，6～8 h達高峰，24～48 h恢復正常，其半衰期為25～30 h，并且不受孕周影響。這意味著與CRP相比，PCT在新生兒敗血癥早期診斷中能提供有效依據。與CRP一樣，在創傷、病毒感染、胎糞吸入、缺氧的新生兒中，PCT的值正常或輕度升高[9]，因此，PCT和CRP可用來鑒別細菌感染。PCT≥8.92 ng/mL時，靈敏度、特異度分別為77.93%、81.84%[1]。但同時需注意的是，PCT在新生兒出生3 d內變化較大，在診斷早發型敗血癥中需結合采血時的時齡綜合分析。推薦出生時診斷閾值大于或等于0.59 μg/L，其靈敏度、特異度分別為48.7%、68.6%，出生后24 h診斷閾值大于或等于5.38 μg/L，其靈敏度、特異度分別為83.3%、88.6%[10]。Vouloumanou等[11]指出，PCT診斷早發型新生兒敗血癥的準確率較診斷晚發型敗血癥低。PCT在窒息復蘇或孕母患有絨毛膜羊膜炎的非敗血癥感染的新生兒中升高[12]，且受孕母B族鏈球菌（GBS）定植、胎膜早破大于或等于18 h的影響較大[13]。Yu等[14]則通過meta分析發現，PCT診斷晚發型新生兒敗血癥比CRP更可靠。而與CRP一樣，PCT也可用來反映治療療效。

5 血清淀粉樣蛋白A（SAA）

SAA類似于CRP，也是一種急性時相蛋白，在細菌感染時可升高至正常水平的1 000倍。與CRP相比，SAA上升更早、更迅速，Arnon等[15]報道，SAA預測早發型敗血癥的準確率高于CRP。Yuan等[16]通過meta分析發現，SAA診斷新生兒敗血癥的靈敏度、特異度分別為84%、 89%。但SAA能否用來診斷新生兒敗血癥還存在一定爭議。汪盈等[17]報道，SAA的增高不僅僅出現在細菌感染，同時在炎癥、組織損傷中也明顯升高，因此，SAA無法用來區分敗血癥和非敗血癥感染。

6 細胞因子

細胞因子是一類細胞信號傳導蛋白質，在細菌感染后可迅速釋放。目前對白介素-6（IL-6）、IL-8、腫瘤壞死因子α（TNF-α）診斷新生兒敗血癥的研究較為廣泛。IL-6≥60.00 pg/mL時，診斷新生兒敗血癥的靈敏度、特異度分別為92%、81%[18]；IL-8≥220.53 pg/mL時，其靈敏度、特異度則分別為72.48%、80.57%[1]。而TNF-α診斷早發型新生兒敗血癥的靈敏度為66%，特異度為76%，診斷晚發型新生兒敗血癥的靈敏度為68%，特異度為89%[19]。但Prashant等[20]發現，TNF-α用來診斷機體炎性反應的靈敏度高，但無法鑒別細菌感染與其他炎性反應，也無法用來判斷預后，而檢測新生兒敗血癥血清中IL-6、IL-8的水平可在抗菌藥物使用48 h時為評估預后提供有效的依據。與CRP、PCT相比，在感染的早期階段，IL-6、IL-8升高非常迅速，且有較高的靈敏度[21]，因此在早期診斷新生兒敗血癥中有重要意義，但其半衰期短、檢測困難造成了臨床應用的困難。

7 細胞表面抗原

中性粒細胞黏附分子 CD11b是Ⅲ型補體受體CD11b/CD18的一部分。正常情況下，CD11b在未活化的中性粒細胞表面呈低水平表達，而在受到內毒素或細菌刺激后數分鐘內，CD11b的表達大大增加。郝麗紅等[22]測定了33例敗血癥新生兒、30例非敗血癥感染新生兒和15例對照組新生兒外周血CD11b，結果發現，CD11b表達在敗血癥組明顯高于非敗血癥感染組和對照組，其診斷新生兒敗血癥的靈敏度、特異度分別為72.73%、94.74%。也有研究發現，CD11b在新生兒敗血癥表達增加的程度與感染嚴重程度呈正相關[23]。CD64主要分布于抗原呈遞細胞表面，在未活化的中性粒細胞表面呈低水平表達。在細菌侵襲1～6 h后，CD64的表達明顯升高。CD64診斷早發型新生兒敗血癥的靈敏度、特異度分別為67%、67%，診斷晚發型敗血癥的靈敏度、特異度則分別為78%、59%[24]，但無法用來鑒別革蘭陽性菌與革蘭陰性菌感染[25]。同時，CD64表達持續升高被認為是晚發型新生兒敗血癥的獨立危險因素之一[26]。細胞表面抗原在新生兒敗血癥的診斷中有較大的潛在應用價值，因其操作方法簡單，且所需采血量非常少，僅需0.05 mL。

8 PCR

PCR技術可用來快速、敏感地檢測細菌DNA，但通常只能鑒定單株菌。近年來，16S rRNA基因檢測已在新生兒敗血癥診斷中廣泛研究，并取得了一定成果。Liu等[27]將706例疑為敗血癥新生兒的血標本進行16SrRNA基因檢測和培養，結果顯示，血培養、16S rRNA基因檢測陽性率分別為13.5%、17.4%，而與血培養相比，16S rRNA基因檢測診斷新生兒敗血癥的靈敏度為100.0%，特異度為95.4%，陽性預測值為77.2%，陰性預測值為100.0%。與血培養相比，16S rRNA基因檢測靈敏度高，在臨床上可應用于提前使用抗菌藥物、對氧氣極端敏感細菌感染的血標本檢測；其所需時間短，只需5 h就能得出檢測結果，大大縮短了鑒別菌株所需的時間，能在一定程度上指導抗菌藥物的使用。但16S rRNA基因檢測常常受到污染，還有待進一步解決。

9 小結與展望

目前臨床上以血培養、外周血象、CRP檢測、PCT的應用最為廣泛，但均存在各種不足，其他實驗室方法還有待進一步開展。對于新生兒敗血癥的早期診斷，可選擇IL-6、IL-8、TNF-α、CD64、CD11b，但僅憑單一指標難以作出正確判斷。16S rRNA基因檢測聯合血培養可提高菌株檢出，而結合外周血象可排除非感染患兒。動態觀察CRP和PCT變化可反映治療療效，以及判斷抗菌藥物的使用療程。綜上所述，對于新生兒敗血癥，應結合患兒病程、臨床表現，根據各項實驗室指標的靈敏度和特異度作出正確選擇，為新生兒敗血癥的早期診斷、合理使用抗菌藥物提供依據。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.15.013

A

1009-5519（2015）15-2284-03

2015-03-13）

屠妍（1990-），女，浙江寧波人，碩士研究生，主要從事新生兒感染方面研究；E-mail：tina19902222008@163.com。