家畜人工授精精液的稀釋準(zhǔn)備

（黑龍江省青年農(nóng)場 150050）

在對(duì)動(dòng)物的大多數(shù)人工授精程序中，精液品質(zhì)評(píng)定僅限于檢查精子數(shù)量、精子活力和精子形態(tài)。要確定某頭種公畜的精液質(zhì)量是否符合輸精要求，就需要進(jìn)行更加精確的分析，但日常采集精液時(shí)，很少進(jìn)行這樣仔細(xì)的檢查。采出的精液除了直接輸入單個(gè)母畜外，一般都要先將其稀釋，再進(jìn)行冷藏或冷凍保存。直接輸精通常見于不能進(jìn)行正常交配的種公犬及患有慢性子宮內(nèi)膜炎的母畜。

1 精液稀釋的意義

1.1 擴(kuò)大精液容量

輸精劑量的確定需要考慮易于操作和輸精位點(diǎn)這兩個(gè)因素。羊一般采用子宮頸內(nèi)輸精，減少輸入量可以減少精子從子宮頸返流。豬采用子宮內(nèi)輸精，要想使精子順利通過母豬大容積的子宮，至少需要50mL的輸精量才能使精液分散在很大的子宮中。精液稀釋并不是一個(gè)簡單的濃度降低的過程。哺乳動(dòng)物的精子稀釋后，初期精子活力會(huì)增加，隨即精子活力迅速降低，并且出現(xiàn)染色增強(qiáng)的現(xiàn)象。人們稱這種現(xiàn)象為稀釋效應(yīng)，表明細(xì)胞的活性降低，這可能是細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)成分滲出到細(xì)胞外的結(jié)果。雖然在早期的人工授精工作中人們對(duì)此頗為關(guān)注，但后來用含有大分子物質(zhì)（如蛋白質(zhì)、聚乙烯醇）的稀釋液，在一定程度上消除了稀釋效應(yīng)。

1.2 緩沖能力

精子所能耐受的pH值變化范圍比較狹窄，因此稀釋過程中必須給精液提供一定的緩沖能力。尤其是當(dāng)精液只進(jìn)行冷藏保存而非冷凍保存時(shí)，由于低溫下精子仍具有較強(qiáng)的代謝活性，所以考慮稀釋后精液的緩沖能力就顯得非常重要。雖然在大多數(shù)稀釋液中，主要容積成分也是主要的緩沖劑，但在某些稀釋液，緩沖劑卻只占其中一小部分。簡單緩沖液緩沖效果良好，其中廣泛采用的為檸檬酸鹽。磷酸鹽緩沖液容易使精子發(fā)生頭部聚集，不宜采用。近來人們廣泛采用有機(jī)鹽緩沖劑（如三羥甲基氨基甲烷），也有人采用其他類似物質(zhì)（如三甲基氨基乙磺酸、羥乙基哌嗪乙磺酸等）。脫脂乳制品中所含的蛋白質(zhì)也能提供較強(qiáng)的緩沖能力。

1.3 維持滲透壓

雖然精清的滲透壓為285毫滲量，但精子能夠承受一定范圍的滲透壓變化。與等滲稀釋液比較，精子似乎能更好地耐受輕微高滲的稀釋液。稀釋液中除了離子成分的滲透作用外，其中的蛋白質(zhì)與糖類組分也起著非常重要的作用。糖類不僅能為精子提供營養(yǎng)，還能增強(qiáng)稀釋后精子的抗凍能力。

1.4 提供能量物質(zhì)

大多數(shù)稀釋液都能提供精子代謝所需的一些能量物質(zhì)。一般單糖如葡萄糖、果糖、甘露糖都是比較合適的能量物質(zhì)，但這些糖類的代謝速度在動(dòng)物間有明顯的差別。以奶類為主的稀釋液中的乳糖幾乎很難代謝，但卵黃是許多稀釋液的重要組分，可為精子代謝提供許多底物。用于冷凍保存的精液只是在冷凍之前數(shù)小時(shí)精子保持活力，冷凍后精子代謝活動(dòng)中止，因此能量物質(zhì)的供給相對(duì)來說并不那么重要。相反，如果精液在低溫下保存數(shù)天，精子持續(xù)保持代謝活性，能量物質(zhì)的供給就顯得比較重要。

1.5 抗菌活性

大多數(shù)精液稀釋液中都會(huì)添加抗生素，以此來防止病原菌的傳播，降低非病原微生物污染精液的可能性。例如，在牛的人工授精中，由于芐青霉素和鏈霉素能有效對(duì)抗胎兒彎桿菌，因此是使用最為廣泛的抗生素。由于人們擔(dān)心支原體和脲原體隨牛精液傳播，為了消除其危害，可在精液稀釋液中添加林可霉素和大觀霉素。有研究表明，稀釋液中的某些成分，特別是卵黃，有可能會(huì)降低抗生素的效能，因此在一些牛的人工授精過程中，先用混合抗生素對(duì)原精液進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，之后再進(jìn)行稀釋。

2 精液稀釋的倍數(shù)

將精液稀釋可以更有效地用于多次人工授精。比如將犬和馬精液中富含精子的部分稀釋冷藏后，可用于發(fā)情期延長的同一母畜多次輸精，或在同一母畜的多個(gè)可受配期進(jìn)行多次輸精。精液的最大稀釋倍數(shù)取決于實(shí)現(xiàn)較高的妊娠率所需的最低精子數(shù)與輸精量，而這兩個(gè)因素又取決于輸精位置、稀釋精子的活力及動(dòng)物的個(gè)體特異性。一般采用子宮內(nèi)輸精時(shí)，所需最小精子量要比子宮頸內(nèi)輸精低1～2個(gè)數(shù)量級(jí)，而子宮頸內(nèi)輸精所需的最小精子量又要比陰道內(nèi)輸精低1～2個(gè)數(shù)量級(jí)。因此如果要廣泛利用種公畜的精液，子宮內(nèi)輸精具有巨大的優(yōu)勢。