朱氏盆炎湯對慢性盆腔炎大鼠IL-2、IL-6及TNF-α的影響

朱氏盆炎湯對慢性盆腔炎大鼠IL-2、IL-6及TNF-α的影響

左玲，張靜，胡國華*

(上海中醫藥大學附屬市中醫醫院，上海 200071)

摘要：目的探討朱氏盆炎湯對慢性盆腔炎(SPID)模型大鼠免疫方面的影響。方法采用化學燒傷造模法制備慢性盆腔炎大鼠模型，用酶聯免疫吸附測定法(ELISA)檢測各組大鼠血清的炎癥細胞因子水平，包括白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的濃度變化。結果朱氏盆炎湯中劑量即臨床常用量對于SPID模型大鼠治療作用顯著，能有效降低大鼠血清中炎癥細胞因子IL-2、IL-6、TNF-α含量。結論朱氏盆炎湯治療慢性盆腔炎作用機制與其調節機體免疫功能相關。

關鍵詞：慢性盆腔炎；朱氏盆炎湯; 白介素-2; 白介素-6

DOI:10.13463/j.cnki.cczyy.2015.06.005

中圖分類號：R285.5文獻標志碼：A

文章編號：2095-6258(2015)06-1112-03

基金項目：上海市衛計委科研項目“驗方盆炎湯對慢性盆腔炎大鼠細胞因子及T細胞亞群的影響”(20134Y072 )；上海市衛生三年行動計劃海派基地建設項目“海派朱氏婦科流派傳承研究(痛證)”(ZYSNXD-CC-HPGC-JD-008)。

作者簡介：左玲(1979-)，女，碩士，主治醫師，主要從事海派朱氏婦科傳承研究。

收稿日期:(本欄責任編輯：張海洋2015-05-05)

*通信作者：胡國華，教授，主任醫師，博士研究生導師，電話-13817813957，電子信箱-0083@szy.sh.cn

Zhushi Penyan decoction on IL-2, IL-6 and TNF- a in rats with chronic pelvic inflammatory disease

ZUO Ling, ZHANG Jing, HU Guohua*

(Shanghai Traditional Chinese Medicine Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 200071，China)

Abstract：ObjectiveThe research into the impact of immunization of Zhushi Penyan decoction to chronic pelvic inflammatory disease model of the rats. Methods Model of chronic pelvic inflammatory disease in rats by using chemical burn, Adsorption of inflammatory cytokines were measured in serum by ELISA, including IL-2 IL-6 and TNF-a concentration changes. ResultsZhushi Penyan decoction dose for the treatment of SPID rats significantly, Can effectively reduce the content of serum IL-2, IL-6, and TNF- a. ConclusionThe research results showed that Zhushi Penyan decoction for the treatment of chronic pelvic inflammatory disease mechanisms and its role in regulating the body immune function is related.

Keywords：chronic pelvic inflammatory disease; Zhushi Penyan Decoction; IL-2；IL-6

盆腔炎性疾病后遺癥(sequelae of pelvic inflammatory disease，PID后遺癥)即慢性盆腔炎[1],是婦科常見病、多發病之一，臨床發病率有明顯增高趨勢。其病情復雜、病程較長，嚴重影響婦女的身體健康。朱氏盆炎湯是名老中醫朱南孫教授(系“朱氏婦科”第三代傳人)治療慢性盆腔炎的經驗方。本項目在我科長期應用朱氏盆炎湯治療慢性盆腔炎療效確切的基礎上，觀察朱氏盆炎湯對大鼠慢性盆腔炎模型的治療作用，并從細胞免疫的角度探討朱氏盆炎湯治療慢性盆腔炎的作用機制。報道如下。

1材料

1.1動物清潔級 SD雌性大鼠90只，體質量 180～220 g。由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司提供。將90只大鼠隨機分為模型組、空白組、婦科千金膠囊組、朱氏盆炎湯高、中、低劑量組，共6組，每組15只。1.2藥品與試劑治療組：朱氏盆炎湯，由上海中醫藥大學附屬市中醫醫院制劑室協助監制，配成高、中、低3種劑量，按人鼠體質量比換算后給藥。對照組：婦科千金膠囊，用蒸餾水溶解，按人鼠體質量比換算后，以0.22 g/kg劑量給藥。試劑盒為大鼠白介素-2、白介素-6、TNF- a定量酶聯檢測試劑盒。苯酚膠漿劑的配制：液化苯酚5 mL、甘油4 mL(由江蘇強盛功能化學股份有限公司提供)，西黃著膠1 g(由九鼎化學公司提供)，加蒸餾水至20 mL，配成濃度為25%的苯酚膠漿。

2方法

2．1慢性盆腔炎大鼠模型的建立采用化學燒傷造模法[2-4]制備慢性盆腔炎大鼠模型。用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠(0.3 mL/100g)，待麻醉生效后，用橡皮筋牽拉四肢固定大鼠于操作臺上，剃去腹毛，用絡合碘消毒皮膚。無菌條件下取大鼠下腹正中切口約 0.8～1 cm，開腹后暴露并固定子宮，用4號針頭在子宮分叉處小心進針，向卵巢方向緩慢注入25%苯酚膠漿0.08 mL，兩側子宮均注射，注射完畢后分層關閉腹腔，消毒術區。術后正常清潔飼養。于造模后第 7、14、30 天，每次各隨機抽取3 只大鼠解剖，觀察子宮腫脹、充血程度，有無宮腔積液，有無與周圍組織黏連。術后 30 d肉眼觀察大鼠子宮腫脹迂曲、充血，宮腔部分黏連、狹窄，內有積液，盆腔充血，內見廣泛黏連，且不易分離，顯微鏡下見子宮內膜上皮及腺上皮細胞增生，淋巴細胞、漿細胞浸潤，見少量中性粒細胞，符合盆腔炎性疾病后遺癥病理改變，提示大鼠慢性盆腔炎模型成功[5-9]。2．2給藥方法慢性盆腔炎造模成功后， 各治療組大鼠按人和動物間體表面積折算給藥計量，其中盆炎湯煎成濃縮劑,按成人等效劑量的1/2、1、2倍分別給藥，盆炎湯低劑量組按照8.9 g/kg體質量劑量灌胃，盆炎湯中劑量組按照17.8 g/kg體質量劑量灌胃，盆炎湯高劑量組按照35.6 g/kg體質量劑量灌胃。婦科千金膠囊組按照0. 22 g/kg體質量劑量灌胃。模型組、空白組給予灌服等量蒸餾水,每日灌胃量為10 mL/kg，連續給藥14 d。2．3采血于給藥后第15天清晨處死大鼠，打開腹腔，于大鼠主動脈處采血，用酶聯免疫吸附測定法(ELISA)檢測大鼠血清IL-2、IL-6、TNF-α水平。2．4肉眼觀察及病理改變肉眼觀察輸卵管形狀、色澤、粗細、彈性、有無積水、化膿及與周圍組織有無黏連。分離子宮周圍多余脂脈組織，肉眼觀察子宮的形態改變。肉眼觀察完畢，精確切取輸卵管、子宮組織，置于10%的福爾馬林中固定，常規切片，HE染色，光鏡下觀察病理改變。2．5統計學方法數據統計采用 SPSS 19.0 統計軟件統計。計量資料用均數±標準差(±s)形式表示，統計方法采用單因素方差分析檢驗，組間比較在方差齊時采用 LSD 法，方差不齊時采用 Dennett’s T3 法。

3結果

3．1肉眼觀察及病理變化肉眼觀察正常組:宮腔正常，無炎性滲出，子宮內膜上皮細胞規整，腺體結構清晰，子宮壁各層分界清楚，各層血管無充血水腫，無炎細胞浸潤。模型組:子宮壁組織結構紊亂，各層分界不清，腺體明顯減少，子宮內膜缺失，上皮細胞變性、壞死、脫落，可見炎性細胞浸潤，輕微纖維組織增生，間質充血、水腫。盆炎湯高劑量組:宮腔無炎性滲出，子宮內膜結構基本接近正常組，內膜上皮細胞形態基本恢復正常，固有層腺腔清晰可見，各層分界清楚，有少許炎性細胞浸潤，無明顯充血、水腫。盆炎湯中劑量組:宮腔無炎性滲出，子宮內膜結構趨向于正常，內膜上皮細胞形態部分欠清晰，腺體結構欠清晰，各層分界清楚，可見少量炎癥細胞浸潤，充血、水腫明顯減輕。盆炎湯低劑量組:宮腔無炎性滲出，子宮內膜結構欠清晰，腺體增粗，結構模糊，子宮壁各層分界尚清楚，可見少量漿細胞、淋巴細胞浸潤，充血、水腫減輕。婦科千金膠囊組:宮腔無炎性滲出，子宮內膜少許缺失，上皮細胞排列尚規整，腺體減少，子宮壁各層分界欠清楚，可見少量炎癥細胞浸潤，充血、水腫減輕。3．2各組大鼠血清中IL-2 、IL-6、TNF-α濃度檢測結果見表1。

表1　各組炎性細胞因子比較( ± s)　ng/L

組 別nIL-2IL-6TNF-α千金膠囊組 988.65±13.50#92.56±8.22# 45.44±13.25# 盆炎湯高劑量組994.09±25.50#161.83±24.52#△115.26±16.65#△盆炎湯中劑量組1081.57±13.00#69.82±13.02#△35.83±7.84# 盆炎湯低劑量組9148.72±27.58 205.42±23.68#△139.63±38.42#△模型組 10157.71±41.86 225.17±28.82 166.20±21.56 空白組 1164.75±15.60 51.67±11.97 20.73±2.93

注：與模型組比較，#P<0.05；與千金膠囊組比較，△P<0.05

4討論

我國古代醫籍中無慢性盆腔炎病名， 歷代醫家對本病的論述散在于“少腹痛”“帶下病”“癥瘕”“不孕”等疾病的論述中[10]。結合現代醫學病理學變化的知識， 總結出本病的病因病機為“熱”“毒”“濕”“瘀”“寒”， 病理性質屬本虛標實。本虛以腎虛， 奇經八脈虧損為主[11-12]。正是由于慢性盆腔炎性疾病后遺癥發病率高及遷延難愈的特點，使中醫藥治療慢性盆腔炎臨床優勢凸現，內治和外治相結合，體現了中醫學扶正祛邪、整體觀的特色。朱氏盆炎湯是全國名老中醫朱南孫教授(系“朱氏婦科”第三代傳人)治療慢性盆腔炎的經驗方。朱南孫教授認為，慢性盆腔炎多與濕熱和血瘀有關。二者導致沖任受損，氣滯血瘀，損傷肝腎，故以益腎清肝同治[13]。我科長期應用盆炎湯治療慢性盆腔炎療效確切。朱氏盆炎湯具有清熱化瘀、疏理沖任的功效。君藥紅藤、紫花地丁、蒲公英清熱解毒、消腫、化瘀、散結。臣藥延胡索舒肝、理氣、止痛、解瘀，劉寄奴破血、通經、止痛。佐使藥續斷、桑寄生補肝腎，強筋骨[14]。現代藥理研究報道，蒲公英對葡萄球菌、鏈球菌有很強滅殺和抑制作用；延胡索可促使巨噬細胞數量增加及吞噬功能增加，增加細胞免疫和體液免疫；桑寄生具有提高淋巴細胞轉化率和抗炎作用。全方攻補兼施，用藥精簡，藥物性味平和。

白介素-2(IL-2)具有調節機體免疫、增加機體抗感染作用，其高低從一個側面反映了宿主淋巴細胞活化程度，以及宿主免疫系統清除自身衰老變性細胞、自體變性和損傷細胞方面的能力。IL-6在組織炎性反應中起著炎癥的誘導和傳遞，以及隨后的組織修復和愈合期的重建[15]。TNF-α在炎癥反應、免疫調節中起重要作用，過度反應產生過量時，導致劇烈的免疫反應，呈現毒性作用，對機體造成損害[16-17]。本實驗結果表明，朱氏盆炎湯高劑量組、中劑量組與千金膠囊組對血清IL-2改善相近，其中盆炎湯中劑量組降低血清IL-2含量最大。血清IL-6變化比較，各組與模型組比較均有意義，組間比較均有統計學意義，說明朱氏盆炎湯與婦科千金膠囊均能降低SPID模型大鼠血清IL-6水平，其中朱氏盆炎湯中劑量組降低血清IL-6含量最大。朱氏盆炎湯及婦科千金膠囊均可減輕血清炎癥細胞因子IL-2、IL-6、TNF-α含量。朱氏盆炎湯中劑量即臨床常用量對于SPID模型大鼠治療作用顯著，其治療后血清IL-2、TNF-α水平和空白組結果相近，說明該劑量對SPID模型大鼠血清IL-2、TNF-α改善顯著。為朱氏盆炎湯治療慢性盆腔炎提供了確切的實驗依據，同時也證實了朱氏盆炎湯治療慢性盆腔炎作用機制與其調節機體免疫功能相關。

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