高效液相色譜法測定辣椒油中的蘇丹紅染料

王 坤,趙浩軍,張 燕(云南大理州質量技術監督綜合檢測中心，云南 大理 671000)

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·分析檢測·

高效液相色譜法測定辣椒油中的蘇丹紅染料

王 坤,趙浩軍,張 燕
(云南大理州質量技術監督綜合檢測中心，云南 大理 671000)

建立了高效液相色譜法測定辣椒油中蘇丹紅染料的方法。用自制中性氧化鋁固相萃取小柱吸附辣椒油中的蘇丹紅染料，丙酮洗脫，高效液相色譜-紫外檢測器測定。在0.5 ～8 mg/L范圍內，蘇丹紅溶液的濃度與峰面積呈良好的線性關系，相關系數為 0.999 8～0.999 9，蘇丹紅的回收率為97.28%～101.38%，相對標準偏差為0.74%～1.01%，方法檢出限為0.13 mg/kg。用所建立方法對市售10個辣椒油樣品進行了檢測。

蘇丹紅；辣椒油；高效液相色譜；中性氧化鋁

蘇丹紅是一類人工合成的偶氮染料，主要包括蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ4種類型。一般用于紡織品、化妝品的著色。研究表明，蘇丹紅具有潛在的致癌性、遺傳毒性及致敏性,這與其代謝產物為胺類及萘酚類物質有關。[1-2]

目前，蘇丹紅的檢測以HPLC[3-4]、HPLC-MS/MS[5]和GC-MS/MS[6]為主。質譜法儀器設備較昂貴，并且對操作人員的技術水平要求較高，難以普及。高效液相色譜儀器價格相對便宜，操作簡單，對一般的檢測機構來說都可以承擔。國家標準GB/T 19681-2005[7]中規定了食品中蘇丹紅染料的高效液相色譜測定方法，但是通過大量的實驗證明，該方法的回收率較低，并且洗脫效率較低。本實驗通過對國標的部分改進，旨在提高方法的洗脫效率和回收率。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

超高效液相色譜儀(Waters ACQUITY UPLC H-class ，帶PDA檢測器，Waters科技有限公司)；超聲波清洗器(AS20500BDT，中國天津Autoscience儀器有限公司)；Millipore超純水設備(Direct-Q5，美國Millipore公司)；氮吹儀(MTN-2800DW，中國天津Autoscience儀器有限公司)；渦旋振蕩器(美國熱電公司)；電熱鼓風干燥箱(北京永光明醫療儀器有限公司)；電子天平(梅特勒-托利多公司)；0.22 μm有機濾膜

乙腈(色譜純，德國Merck公司)；丙酮(色譜純，美國TEDIA公司)；正己烷(分析純，利安隆博華(天津)醫藥化學有限公司)；丙酮(分析純，上海申博化工有限公司)；甲酸(美國BE公司)蘇丹紅標準溶液(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，100 mg/L，北京海岸鴻蒙標準物質技術有限責任公司)；無水硫酸鈉(上海試四赫維化工有限公司)；中性氧化鋁(100-200目，上海五四化學試劑有限公司)。

1.2 蘇丹紅標準溶液的配制(混合標準溶液)

分別取100 μL蘇丹紅標準溶液Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ于2 mL液相用樣品瓶中，加入900 μL丙酮，渦旋混勻30 s。

1.3 氧化鋁的活化

取0.150～0.075 mm(100～200目)的中性氧化鋁適量于電熱鼓風干燥箱中130℃活化2 h，取出置于干燥器中冷至室溫，待用。

1.4 中性氧化鋁層析小柱的裝填

在5 mL注射器的底部墊上一層脫脂棉，干法裝入活化過的中性氧化鋁3 cm，輕輕敲實，上部再裝入3 mm的無水硫酸鈉，敲實，備用。

1.5 樣品的前處理

1.5.1 提取

辣椒油：準確稱取辣椒油0.5 g(精確到 0.000 1 g)于三角瓶中，加入5 mL正己烷，超聲10 min，待凈化。

1.5.2 凈化

先用10 mL正己烷淋洗中性氧化鋁層析柱，待柱中正己烷剩余2 mm時，加入提取液，再用20 mL正己烷淋洗。然后在層析柱中加入50 μL超純水，用丙酮洗脫至洗出液無色。洗脫液經氮吹儀吹干，用2 mL丙酮定容，過0.22 μm有機濾膜，上機測定。

1.6 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX RX-C8(4.6×150 mm,3.5 μm)；流動相A：0.1%甲酸的水溶液：乙腈=85∶15；流動相B：0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80∶20；梯度洗脫，洗脫條件見表1；柱溫：30℃；檢測波長：478 nm和520 nm，波長梯度條件見表2；進樣量：10 μL。梯度洗脫條件及波長梯度條件見表1、表2。

表1 梯度洗脫條件Tab.1 Gradient elution conditions

表2 波長梯度條件Tab.2 Wavelength gradient conditions

2 結果與討論

2.1 標準曲線及檢出限

用10 mg/L的混合標準溶液配制成質量濃度為0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mg/L的標準系列， 在1.6所示條件下進行測定，以標準系列的質量濃度對應峰面積制作標準曲線，在配制的質量濃度范圍內，蘇丹紅標準溶液的質量濃度(x)與峰面積(y)呈現良好的線性關系。線性關系及檢出限見表3 ， 色譜圖見圖1。

圖1 蘇丹紅混合標準溶液色譜圖Fig.1 Sudan mixed standard solution chromatogram

2.2 精密度實驗

精密度實驗結果見表4。

表3 蘇丹紅樣品的線性關系及檢出限Tab.3 Linear relationship between the sample and the detection limit of Sudan

表4 精密度實驗結果Tab.4 Precision results

2.3 回收率

稱取0.5 g(精確到 0.000 1 g)辣椒油樣品150 mL三角瓶中，加入100 μL的蘇丹紅混合標準溶液(10 mg/L)，超聲10 min，按1.5所述步驟進行凈化濃縮，并上機檢測。加標回收實驗結果見表5。

表5 加標回收實驗結果Tab.5 Spike recovery experiments

2.4 對比檢測

用國標方法和本方法對加標樣品各進行5次平行測定，檢驗可疑值后，用SPSS進行數據分析，并進行F檢驗和T檢驗,結果表明，兩種測定方法之間無顯著性差異，結論的置信度為95%。結果見表6。

表6 對照測定結果Tab.6 Control assay results

2.5 樣品測定

用該方法和國標方法對市售的8個辣椒油樣品進行分析測定，均未檢出蘇丹紅Ⅰ，蘇丹紅Ⅱ，蘇丹紅Ⅲ和蘇丹紅Ⅳ。

3 結論

國家標準GB/T 19681-2005規定的檢測過程中，中性氧化鋁活化后，要加水使活度控制在一定的范圍內，這個范圍很難控制。本方法將中性氧化鋁活化后，直接填充色譜柱，加水滅活洗脫定容測定。在保證中性氧化鋁活性的條件下將蘇丹紅完全吸附，加水滅活后用丙酮將蘇丹紅完全洗脫，檢測結果與國標方法沒有顯著性差異。該方法回收率高，穩定性好，適用于辣椒油中蘇丹紅的測定。

[1] 宋雁,李寧.食品中蘇丹紅的危險性評估[J].國外醫學衛生冊,2005,32(3):129-132.

[2] XU Hai -yan,HEINZEM,CHE N Si-wei,et al.An aerobic metabolism of l-am i no-2-n aphth ol -based azodyes(Sudan dyes) by human intestinal microf lora[J].Applied and Environmental Microb iolog y,2007,73(23):7759-7762.

[3] 喻凌寒,牟德海,李光憲,等.HPLC -DAD 法測定紅辣椒及其制品中蘇丹 紅Ⅰ的含量[J].光譜實驗室,2004,21(6):1131～1133.

[4] 張玉黔,欒燕,王新麗,等.反相高效液相色譜法測定食品中蘇丹紅1、 2、 3、 4 的方法研究[J].中國衛生檢驗雜志,2005,15(7):807～808.

[5] Calbiani F,Car eri M,Elvir i L,et al.Developmentand In-H ouse Validat ion o f a Liquid Chr omato gr aphyElect rospary Tandem Mass Spect rometr y Method forthe Simultaneous Determination of Sudan Ⅰ,SudanⅡ,Sudan Ⅲ and Sudan Ⅳ in H ot Chilli Products[J].J chromat og r A,2004,1042(1/2):123～128.

[6] 蘇小川,黃梅,甘賓賓,等.調味品辣椒粉和腌料中蘇丹紅I染料的GC-MS分析[J].中國衛生檢驗雜志,2005,15(9):1073～1074.

[7] GB/T 19681-2005食品中蘇丹紅染料的檢測方法高效液相色譜法[S].

Determination of Sudan Dyes in Capsicol by High Performance Liquid Chromatograph

WANG kun,ZHAO Hao-jun,ZHANG Yan
(Dali Quality and Technical Supervision Comprehensive Inspection Center,Dali 671000,China)

A method is established to determine Sudan dyes in capsicol.Self made neutral alumina has been used to adsorb Sudan dyes in capsicol.Acetone has been used to delute Sudan dyes,and HPLC with UV detector has been used to determine Sudan dyes.In the range of 0.5 mg/L to 8 mg/L,it shows a good linear relationship,correlation coefficient is in the range of 0.999 8 to 0.999 9,the recovery is from 97.28% to 101.38%,the relative standard deviation is from 0.74% to 1.01%,the detection limit is 0.13 mg/kg.The method has been used to detect ten samples,the results show that the method is suitable for detection of Sudan dyes in capsicol with high selectivity and sensitivity.

Sudan dyes;capsicol;HPLC;neutral alumina

王坤 (1983-)，河南南陽人，碩士，工程師,研究方向：重金屬及非法添加物檢測。

12.3969/j.issn.1004-275X.2015.01.010

O657

A

1004-275X(2015)01-0038-04

收稿：2014-10-23