四君子煮散飲片與傳統飲片的煎出效果對比研究

趙嘉祺，劉婷婷，蔣燕萍，秦凡非，曹麗梅

·炮制制劑·

四君子煮散飲片與傳統飲片的煎出效果對比研究

趙嘉祺，劉婷婷，蔣燕萍，秦凡非*，曹麗梅

目的：比較四君子煮散飲片與四君子傳統飲片在不同時間點煎出液中有效成分含量和干膏收率的變化。方法：在不同時間點測定人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、甘草苷、甘草酸的含量和干膏收率，比較四君子煮散飲片與四君子傳統飲片的煎出效果。結果：相同煎煮條件下四君子煮散飲片煎液中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、甘草苷、甘草酸含量及干膏收率均顯著高于傳統飲片。結論：相同煎煮條件下四君子煮散飲片的煎出效果優于傳統飲片，四君子煮散飲片的臨床配方應用具有一定的合理性。

四君子湯；煎出率；煮散飲片；對比研究

中藥煮散系指將中藥材粉碎成適宜粒度，與水共煎后取汁服用的一種傳統用藥形式。它在保留傳統湯劑辨證施治，隨癥加減的優勢外，又具有散劑服用量小的特點[1～2]。中藥材制成煮散飲片后，隨著比表面積增大，藥物有效成分的煎出率也相應提高，減少了藥材用量，節省煎煮時間，避免了藥材資源和能源的浪費[3～4]。

四君子湯出自宋代的《太平惠民和劑局方》，最初用于治療脾胃氣虛等慢性癥疾，并衍生出后世諸多的補氣健脾方劑，故有“天下補氣第一名方”之美譽。本試驗在傳統中藥煮散理論的指導下，以四君子湯為研究對象，將其制成煮散飲片，通過與傳統復方飲片的煎出率進行對比研究，結果表明煮散飲片煎出率優于等劑量傳統飲片，體現了四君子湯作為煮散運用的合理性。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200型高效液相色譜儀（G1315D DAD檢測器，ChemStation for LC 3D sysytms工作站，美國安捷倫公司）；Kromasil C18色譜柱（250×4.6mm，5μm，Scienhome公司）；高速多功能粉碎機（上海冰都電器有限公司）；Sartorius-BS110S分析天平（德國賽多利斯公司）；DGG-9240電熱恒溫鼓風干燥箱（上海森信實驗儀器有限公司）。

1.2 材料

人參飲片（批號：140601b）、炙白術飲片（批號：140710a）購于四川科倫天然藥業有限公司，取部分人參飲片制成煮散飲片（批號：140601b-1，實驗室自制），取部分炙白術飲片制成煮散飲片（批號：140710a-1，實驗室自制）。茯苓飲片（批號：1403066）、炙甘草飲片（批號：1401029）均購于四川新荷花中藥飲片股份有限公司，取部分茯苓飲片制成煮散飲片（批號：1403066-1，實驗室自制），取部分炙甘草飲片制成煮散飲片（批號：1401029-1，實驗室自制）。人參皂苷Rg1（批號：140219）、人參皂苷Re（批號：130410），甘草苷（批號：131127）、甘草酸（批號：130225），均購于四川省維克奇生物科技有限公司；色譜乙腈（美國天地公司）；超純水（實驗室自制）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 水煎液的制備

傳統飲片水煎液的制備：分別稱取人參飲片20g、白術飲片18 g、茯苓飲片18 g、炙甘草飲片12 g，共6份，加入10倍量水，取3份樣品分別煎煮10 min、20 min、30 min，濾過，備用。另取3份樣品，煎煮30 min，濾過，收集濾液備用，再將濾渣加入10倍量水，分別煎煮10 min、20 min、30 min，濾過，合并兩次濾液，濃縮至250 mL，即得四君子傳統飲片不同時間點的水煎液。

煮散飲片水煎液的制備稱取與傳統飲片量相當的四君子煮散飲片，同法制備四君子煮散飲片水煎液。

2.2 干膏收率測定

取“2.1”項下各樣品溶液100 mL，搖勻，置已恒重的蒸發皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3h至恒重，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。結果見表1。

表1 不同時間點干膏收率測定結果（n=3）

結果表明，在第一次加水煎煮中和在第二次加水煎煮中，四君子煮散飲片的干膏收率均高于四君子傳統飲片。

2.3 不同時間點煎出液中人參皂苷的含量測定

2.3.1 色譜條件及系統適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.05%磷酸-水為流動相A（81%），乙腈為流動相B（19%），流速1.5 mL．min-1，柱溫35 ℃，檢測波長203 nm，洗脫時間0～60 min，等度洗脫。

2.3.2 標準曲線 稱取人參皂苷Rg1、Re對照品各10 mg，加甲醇制成每1 mL各含0.2 mg的混合對照品溶液。精密吸取5μL、8μL、10μL、12μL、16μL、20 μL混合對照品溶液，分別進樣，以峰面積Y為縱坐標，進樣量X為橫坐標繪制標準曲線（見圖1、圖2），分別得回歸方程為：YRg1= 150.25X+11.042（R2=0.9989）；YRe=118.46X+32.965（R2=0.9991），表明人參皂苷Rg1、Re在1 μg～4 μg范圍內，峰面積與進樣量線性關系良好。

2.3.3 精密度試驗 吸取人參皂苷對照品溶液10 μL，重復進樣6次，按上述色譜條件測定, 記錄人參皂苷峰面積值，計算RSD值。結果表明人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的RSD值分別為1.04%、1.03%。

2.3.4 穩定性試驗 取“2.1”項下煮散飲片水煎液，于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h，分別進樣10 μL，記錄峰面積值，結果顯示人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的RSD值分別為2.05%、0.63%，表明24 h內供試品溶液基本穩定。

2.3.5 重復性試驗 取四君子湯煮散飲片6份，按“2.1”項下方法制備供試品溶液，分別進樣10 μL，記錄人參皂苷Rg1、Re色譜峰峰面積，其RSD分別為1.23%、0.84%，表明該方法重復性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗 精密量取已知含量的樣品溶液（人參皂苷Rg10.173 mg．mL-1、人參皂苷Re 0.138 mg．mL-1）10 mL，共6份，分別各加入人參皂苷對照品溶液（人參皂苷Rg10.203 mg．mL-1、人參皂苷Re 0.151 mg．mL-1）1 mL，按供試品制備方法及色譜條件，測定含量，計算回收率，結果見表2、表3。

表2 人參皂苷Rg1加樣回收率試驗結果

3 10 0.173 0.203 0.392 97.97 99.04 2.23 4 10 0.173 0.203 0.372 98.01 5 10 0.173 0.203 0.378 101.15 6 10 0.173 0.203 0.368 95.87

表3 人參皂苷Re加樣回收率試驗結果

以上試驗結果表明，人參皂苷Rg1、Re加樣回收率在95～105%之間，平均回收率分別為99.04%、98.99%，RSD值分別為2.23%、2.18%，表明該方法可靠，符合含量測定的要求。

2.3.7 含量測定 按“2.1”項下方法制備供試品溶液，各精密吸取10 μL，按含量測定方法測定，代入回歸方程，結果見圖1、圖2、表4、表5。

圖1 人參皂苷標準品色譜圖

圖2 四君子煮散飲片人參皂苷色譜圖

表4 不同時間點人參皂苷Rg1含量測定結果（n=3）

表5 不同時間點人參皂苷Re含量測定結果（n=3）

結果表明，不同時間四君子煮散飲片水煎液中的人參皂苷Rg1和Re含量均高于傳統飲片水煎液，且煎出速率較傳統飲片快，最大煎出總量大于傳統飲片中人參皂苷Rg1和Re的最大煎出總量。

2.4 不同時間點煎出液中甘草苷、甘草酸含量測定

2.4.1 色譜條件及系統適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相乙腈-0.05%磷酸水溶液，梯度洗脫：0～8 min：19%乙腈，8～35 min：19→50%乙腈，35～36 min：50→100%乙腈，36～40 min：100→19%乙腈，流速1.0 mL．min-1；檢測波長237 nm。檢溫35℃。

2.4.2 標準曲線繪制 取甘草苷、甘草酸對照品適量，精密稱定，加甲醇分別配制成含甘草酸1.92 mg．mL-1、甘草苷1.02 mg．mL-1的對照品溶液（甘草酸重量=甘草酸銨重量/1.0207）。進樣體積分別為5μL、8μL、10μL、12μL、16μL、20μL，以峰面積(Y)為縱坐標，對照品含量(X)為橫坐標繪制標準曲線，回歸方程為：甘草酸Y1= 112.2X1+17.7，R2=0.9996；甘草苷Y2= 690.7X2+335.7，R2=0.9993。結果表明，甘草苷在5.1μg～20.4μg范圍內，甘草酸在9.6 μg～38.4 μg范圍內，對照品峰面積與進樣量呈良好線性關系。

2.4.3 精密度試驗 精密吸取混合對照品溶液5 μL，連續進樣6次，測定甘草苷、甘草酸色譜峰峰面積，結果RSD值為0.99%、2.07%，表明儀器精密度良好。

2.4.4 穩定性試驗 取“2.1”項下煮散飲片水煎液，于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h，分別進樣10 μL，記錄甘草苷、甘草酸峰面積值， RSD值為0.57%、1.94%，表明24 h內樣品中甘草苷、甘草酸含量穩定。

2.4.5 重復性試驗 取四君子湯煮散飲片6份，按“2.1”項下方法制備供試品溶液，分別進樣10 μL，記錄甘草苷、甘草酸色譜峰峰面積，其RSD分別為0.75%、2.09%，表明該方法重復性良好。

2.4.6 加樣回收率試驗 精密量取已知含量的樣品溶液4 mL（甘草酸0.281 mg．mL-1、甘草苷0.174 mg．mL-1），共6份，分別精密加入混合對照品溶液（甘草酸1.055 mg．mL-1、甘草苷0.634 mg．mL-1）1 mL，按供試品制備方法及色譜條件測定含量，計算回收率，結果見表6、表7。

表6 甘草苷加樣回收率試驗結果

表7 甘草酸加樣回收率試驗結果

試驗結果表明，甘草苷和甘草酸的加樣回收率在95～105%之間，平均回收率為99.65%、99.26%，RSD為2.15%、1.41%，表明該方法可靠，符合含量測定要求。

2.4.7 含量測定 按“2.1”項下方法制備供試品溶液，各精密吸取10 μL，按含量測定方法測定，代入回歸方程，結果見圖3、圖4、圖5、表8、表9。

圖3 甘草苷色譜圖

圖4 甘草酸色譜圖

圖5 四君子煮散飲片色譜圖

表8 不同時間點甘草苷含量測定結果（n=3）

表9 不同時間點甘草酸含量測定結果（n=3）

結果表明，不同時間點四君子煮散飲片煎液中的甘草苷與甘草酸含量均高于四君子傳統飲片煎

液，且煎出速率較傳統飲片快，最大煎出總量大于傳統飲片中甘草苷與甘草酸的最大煎出總量。

2.5 綜合加權評分結果

根據四君子煮散飲片的性質和臨床療效，選擇四君子煎液中人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、甘草苷、甘草酸煎出率和干膏收率為評價指標，進行綜合加權評分。人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、甘草苷、甘草酸作為指標性成分，權重系數相應較高，各為0.2，共計0.8為宜；干膏收率從側面反映了四君子煮散飲片的固體成分煎出率，但與功能主治的強度不成量效關系，綜合評價時權重系數相應較小，以0.2為宜。結果見表10、圖7。

表10 不同時間點甘草酸含量測定結果（n=3）

圖7 四君子傳統飲片與煮散飲片煎出效率加權評分比較

3 結果與討論

上述試驗結果表明，四君子煮散飲片1g大約相當于傳統飲片1.24g，四君子煮散飲片的煎出效果優于傳統飲片。

煮散的應用源遠流長，在東漢名醫張仲景所著《傷寒論》和《金匱要略》中便有相應記載，至宋代《太平惠民和劑局方》，采用煮散的方劑已達237個[4]，其應用已達到了頂峰，甚至一度取代了傳統湯劑（“近世用湯者殊少，應湯皆用煮散。”[5]）。中藥煮散在中醫藥基本理論的指導下，保留了傳統湯劑的長處，縮短了煎煮時間，同時節約能源和藥材，降低了用藥成本[6]，體現了社會效益和經濟效益。中藥材資源日益缺乏成為了限制中藥可持續利用發展的重要因素之一[7～8]，煮散無疑是一種更加優良的飲片形式，值得推廣應用。

目前對于煮散的基礎研究相對較少，且多集中在工藝研究方向，對其藥效及量效關系的研究較為缺乏，局限了煮散的臨床推廣。要確定臨床上使用多少劑量的煮散飲片可與傳統飲片作用功效相似，單對二者的煎出效果進行分析尚顯不足，為了更準確、全面地反映煮散飲片與傳統飲片的量效關系，還需進行藥效學等多方面的考察，才能更加科學合理地應用于臨床。

[1] 楊琳,傅延齡.《外臺秘要》煮散方初探[J].中醫雜志,2012,53 (3):241.

[2] 仝小林,張家成,穆蘭澄,等.恢復煮散,節省藥材[J].中國新藥雜志,2012,21(5):470.

[3] 賀穎,王志萍,王力寧,等.不同粉碎度對麻杏石甘湯煮散中鹽酸麻黃堿和苦杏仁苷的影響[J].中成藥,2013,35(3):631.

[4] 邢丹,賀瑩,鄭虎占.從《太平惠民和劑局方》論中藥煮散技術規范[J].中國臨床醫生,2012,40(11):73.

[5] 沈括.夢溪筆談[M].沈陽:遼寧教育出版社,1997:151.

[6] 文謹,劉起華,彭智平,等.黃芩煮散與傳統飲片有效成分的煎出效果比較[J].中國實驗方劑學雜志,2014,20(11):34.

[7] 肖小河,肖培根.關于中藥資源的基本形勢、科學保護與再調查的幾點看法[J].中國中藥雜志,2005,30(2):85.

[8] 周然,王永輝.中藥資源的保護與可持續開發利用[J].世界中西醫結合雜志,2008,3(1):6.

（責任編輯：何瑤）

Comparative study of decoction effect between decocting powders and traditional decoction pieces of Sijunzi/

QIN Fanfei, CAO Li-mei, ZHAO Jia-qi, FU Chao-mei//(Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; Key laboratory of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources in Sichuan Province—Key Laboratory Breeding Base of Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:To compare changes of active constituents and yield of dry extract between decoction pieces and powder of Sijunzi in different boiling time.Method:Ginsenoside Rg1and Re, liquiritin, glycyrrhizic acid and dry extract yield were determined in different boiling time to compare the extraction effciency.Result:Sijunzi decocting powders showed higher performance in contents of ginsenoside Rg1and Re, liquiritin, glycyrrhizic acid and yield of dry extract under same boiling condition compared with traditional slices.Conclusion:The extraction efficiency of Sijunzi decocting powder is higher than traditional decoction pieces under the same circumstances, which confrms the rationality of Sijunzi decocting powder in clinical application.

Sijunzi decoction; decocting rate; decocting powder; comparative study

R 283.6

A

1674-926X(2015)02-006-05

成都中醫藥大學藥學院 中藥材標準化教育部重點實驗室 中藥資源系統研究與開發利用省部共建國家重點實驗室培育基地，成都 611137

趙嘉祺，成都中醫藥大學中藥學專業本科在讀，

Tel:18215516008 Email:513142926@qq.com

秦凡非，在讀碩士研究生，從事中藥藥劑學研究。Email: ohmightcat@163.com

2014-11-23