瑤藥大腸風(fēng)與小腸風(fēng)揮發(fā)油成分氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用分析

蘇玲等

[摘要] 目的 采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）技術(shù)對大腸風(fēng)與小腸風(fēng)揮發(fā)油進(jìn)行對比分析，為二者合理利用提供參考依據(jù)。 方法 水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油。色譜柱為HP-5MS石英毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.25 mm， 0.25 μm）；程序升溫；載氣為氦氣（He），體積流量為1.0 mL/min；檢測器溫度為280℃；溶劑延遲為3 min；進(jìn)樣量為0.2 μL；分流比為100∶1；空氣流速為300 mL/min；尾吹氣N2流速為30 mL/min。 結(jié)果 用水蒸氣蒸餾法提取所得揮發(fā)油成分較復(fù)雜，大腸風(fēng)與小腸風(fēng)揮發(fā)油共有成分為石竹烯、α-石竹烯、斯巴醇、反式-橙花叔醇、α-蓽澄茄油烯等14個(gè)，主要為烯烴類及醇類；大腸風(fēng)特有成分為（-）-β-欖香烯、（+）-β-蛇床烯、1，5，5-三甲基-6-亞甲基-環(huán)己烯，含量都高達(dá)14%以上；小腸風(fēng)中（-）-斯巴醇、反式-橙花叔醇，含量都高達(dá)15%以上。 結(jié)論 大腸風(fēng)與小腸風(fēng)揮發(fā)性成分具有差異性，可作為鑒別二者的基本依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] 大腸風(fēng)；小腸風(fēng)；揮發(fā)油；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

[中圖分類號] R917 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號] 1673-7210（2014）12（c）-0083-05

Analysis on chemical components of Yao medicine Piper boehmeriifolium （Miq.） Wall. ex C. DC. and Piper hancei Maxim. by GC-MS

SU Ling1 XIE Fengfeng2 TANG Yurong2 ZHU Hua2

1.Department of Pharmacy， the 303rd Hospital of PLA， Guangxi Zhuang Autonomous Region， Nanning 530021， China； 2.Guangxi University of Chinese Medicine， Guangxi Zhuang Autonomous Region， Nanning 530001， China

[Abstract] Objective To analyze volatile oil from the plants of Piper boehmeriifolium （Miq.） Wall. ex C. DC. and Piper hancei Maxim. Methods Volatile oils were exacted by the steam distillation （SD） method. HP-5 capillary column （30 m×0.25 mm， 0.25 μm）； temperature programming； Nitrogen as the carrier gas； Volume flow was 1.0 mL/min； detecror tempertature was 280℃； solvent delay time was 3 min； injection volume was 0.2 μL； split ratio was 100∶1； the velocity of air was 300 mL/min； the velocity of N2 was 30 mL/min. Results The yield of volatile oil was high. Their ingredients were complicated， which were including 14 main cornmon chemical compositions， such as Caryophyllene， α-Caryophyllene， Spathulenol， （E）-Nerolidol， α-Cubebene and so on. The specific components of Piper boehmeriifolium （Miq.） Wall. ex C. DC. were （-）-β-Elemen， （+）-β-Selinene， 1， 5， 5-Trimethyl-6-methylene-cyclohexene. The contents were more then 14%； the specific components of Piper hancei Maxim. were （-）-Spathulenol and （E）-Nerolidol， the contents were more than 15%. Conclusion Main components are differences between Piper boehmeriifolium （Miq.） Wall. ex C. DC. and Piper hancei Maxim.， it might be the basis for variety identification.

[Key words] Piper boehmeriifolium （Miq.） Wall. ex C. DC.； Piper hancei Maxim.； Volatile oil； GC-MS

瑤藥是瑤族人民在長期用藥過程中積累的豐富經(jīng)驗(yàn)，歸納為“五虎”、“九?！?、“十八鉆”、“七十二風(fēng)”，共104種傳統(tǒng)常用瑤藥，對于藥的分類有其獨(dú)特的民族特點(diǎn)?，庒t(yī)根據(jù)藥物性能結(jié)合長期的臨床實(shí)踐，對具體某一種藥，除了按其性分為溫、熱、寒、涼、平性外，還按藥物功效分為風(fēng)藥及打藥[1]。大腸風(fēng)、小腸風(fēng)屬于老班藥中的風(fēng)打相兼藥[2]，瑤醫(yī)認(rèn)為二者具有祛風(fēng)散寒，散瘀止痛功效，內(nèi)服用于感冒、胃脘痛、跌打損傷等，外用治蛇毒等[1-2]。且兩者均來源于胡椒科植物[3]，其內(nèi)多含生物堿、揮發(fā)油、黃酮、甾體類化合物、酚類和鞣質(zhì)等[4-8]，均具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛及抗炎作用[9-11]，但在臨床上的應(yīng)用還是各有偏重，不可互用[1]。本課題組在研究二者形態(tài)學(xué)區(qū)別的同時(shí)也采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）法，進(jìn)行揮發(fā)油成分分析，比較兩者的異同，為進(jìn)一步開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent HP6890plus/5973N氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國安捷倫公司）；G1701DAMSD化學(xué)工作站；HDM2000型調(diào)溫恒溫電熱套（國華牌）；CG-16W高速微量離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠）。

1.2 試藥

大腸風(fēng)、小腸風(fēng)藥材分別產(chǎn)于廣西荔浦和貴港，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)蔡毅教授分別鑒定為胡椒科植物苧葉蒟（光軸苧葉蒟）Piper boehmeriifolium（Miq.） Wall. ex C. DC.全草及胡椒科植物山蒟Piper hancei Maxim.全草。無水硫酸鈉（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法

2.1 揮發(fā)油的提取

2.1.1 大腸風(fēng)揮發(fā)油的提取 取大腸風(fēng)藥材約150 g，剪成約1 cm小段。照揮發(fā)油測定法（《中國藥典》2010年版附錄ⅩD），提取5 h，停止加熱，將水緩緩放出，至油層上端到達(dá)刻度“0”線上面5 mm處為止。放置30 min，再開啟活塞使油層下降至恰與刻度“0”線齊平，讀取揮發(fā)油量并計(jì)算得油率。揮發(fā)油經(jīng)無水硫酸鈉干燥，備用。

2.1.2 小腸風(fēng)揮發(fā)油的提取 取小腸風(fēng)藥材約50 g，剪成約1 cm小段。照揮發(fā)油測定法（《中國藥典》2010年版附錄ⅩD），提取5 h，停止加熱，將水緩緩放出，至油層上端到達(dá)刻度“0”線上面5 mm處為止。放置30 min，再開啟活塞使油層下降至恰與刻度“0”線齊平，讀取揮發(fā)油量并計(jì)算得油率。揮發(fā)油經(jīng)無水硫酸鈉干燥，備用。

2.2 色譜條件

2.2.1 大腸風(fēng)色譜條件 色譜柱為HP-5MS石英毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；程序升溫，初始溫度60℃，保持2 min，然后以7℃/min的速度升至125℃并保持5 min，再以2℃/min的速度升至150℃并保持2 min；載氣為氦氣（He），體積流量為1.0 mL/min；進(jìn)樣口溫度為250℃；檢測器溫度為280℃；溶劑延遲為3 min；進(jìn)樣量為0.1 μL；分流比為100∶1；空氣流速為300 mL/min；尾吹氣N2流速為30 mL/min。

2.2.2 小腸風(fēng)色譜條件 色譜柱為HP-5MS石英毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；程序升溫，初始溫度60℃，保持2 min，然后以10℃/min的速度升至130℃并保持8 min，再以2℃/min的速度升至135℃并保持10 min，最后以10℃/min的速度升至200℃并保持3 min；載氣為He，體積流量為1.0 mL/min；進(jìn)樣口溫度為250℃；檢測器溫度為280℃；溶劑延遲為3 min；進(jìn)樣量為0.2 μL；分流比為100∶1；空氣流速為300 mL/min；尾吹氣N2流速為30 mL/min。

2.3 大腸風(fēng)與小腸風(fēng)揮發(fā)油質(zhì)譜條件

電離方式EI，電子能量70 eV，四極桿溫度150℃，倍增電壓1247 eV，接口溫度280℃，掃描范圍m/z 45～550。

3 結(jié)果

采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)，在上述條件下對藥材揮發(fā)油進(jìn)行分析，得到大腸風(fēng)與小腸風(fēng)揮發(fā)油的總離子流圖，見圖1、2，經(jīng)計(jì)算機(jī)NIST08和Wiley 275譜庫檢索，并與標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照，結(jié)合人工譜圖解析，確認(rèn)揮發(fā)油中的主要化學(xué)成分，并采用峰面積歸一化法計(jì)算各成分在揮發(fā)油中的相對含量，結(jié)果見表1、2。

4 討論

近年來對民族藥的研究日益增多，尤其是壯、瑤、蒙藥等。關(guān)于瑤藥的研究文獻(xiàn)屢見不鮮，如生藥學(xué)鑒別研究、GC-MS和高效液相色譜法（HPLC）成分分析研究、藥理作用研究、毒性研究及藥效學(xué)研究等[12-18]。文獻(xiàn)中記載瑤藥揮發(fā)油中含α-雪松烯、β-雪松烯、長（松）葉烯-（V4）、棕櫚酸甲酯、油酸甲酯、角鯊烯、十六烷酸、α-蓽澄茄烯、欖香醇、愈創(chuàng)木醇、α-古蕓烯、喇叭茶烯、1，2-鄰苯二甲酸-雙[2-甲基丙基]酯、1，2-鄰苯二甲酸二丁酯、檀香醇、α-石竹烯醇、反式-石竹烯、α-法呢烯、β-橄欖烯、β-桉葉醇、二十烷、6，10，14-三甲基-α-十五烷酮、3，7，11，15-四甲基-2-十六烯醇[19-24]等，主要為烯醇類及酯類，但這些主要成分是否是瑤藥中起作用的有效成分，有待于進(jìn)一步研究與探討。而關(guān)于瑤藥大腸風(fēng)與小腸風(fēng)的揮發(fā)性成分分析未見報(bào)道，故本研究采用GC-MS分析瑤藥大腸風(fēng)與小腸風(fēng)揮發(fā)油性成分，可為其資源開發(fā)利用提供依據(jù)。

揮發(fā)油又稱精油是一類由萜類（單萜、倍半萜）、芳香族化合物、脂肪族等組成復(fù)雜化合物，主要通過水蒸氣蒸餾法和壓榨法制取，常存在于具有明顯氣味的藥材，具有發(fā)散解表、芳香開竅、理氣止痛、祛風(fēng)除濕等作用，在心腦血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、胃腸道系統(tǒng)、抗菌、抗炎、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化及促進(jìn)藥物吸收等多方面都具有作用[25-27]，這與大腸風(fēng)與小腸風(fēng)的鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛及抗炎作用主治相呼應(yīng)，二者揮發(fā)油成分的分析具有一定意義，可為臨床使用提供理論基礎(chǔ)。

大腸風(fēng)揮發(fā)油總成分為39個(gè)，鑒別出32個(gè)成分，鑒別率為82%；小腸風(fēng)揮發(fā)油總成分有55個(gè)，鑒別出40個(gè)，鑒別率為73%。大腸風(fēng)中含量超過5%有6個(gè)，即α-蓽澄茄油烯、（-）-β-欖香烯、石竹烯、（+）-β-蛇床烯、1，5，5-三甲基-6-亞甲基-環(huán)己烯、斯巴醇，主要為烯類及醇類，占總成分66.65%。小腸風(fēng)中含量超過3%有4個(gè)，即（1S-cis）-1，2，3，5，6，8a-六氫-4，7-二甲基-1-（1-甲基乙基）-萘、（-）-斯巴醇、愈創(chuàng)醇、反式-橙花叔醇，主要醇類，占總成分43.84%。

大腸風(fēng)與小腸風(fēng)揮發(fā)油存在差異，其中二者共有成分為石竹烯、α-石竹烯、斯巴醇、反式-橙花叔醇、α-蓽澄茄油烯等14個(gè)主要為烯烴類及醇類；就二者而言，大腸風(fēng)特有成分為（-）-β-欖香烯、（+）-β-蛇床烯、1，5，5-三甲基-6-亞甲基-環(huán)己烯，含量都高達(dá)14%以上；小腸風(fēng)中（-）-斯巴醇、反式-橙花叔醇，含量都高達(dá)15%以上。兩者化學(xué)組分的差異或許是臨床療效差異的物質(zhì)基礎(chǔ)，這些特有成分或許可作為鑒別二者的基本依據(jù)。

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（收稿日期：2014-10-11 本文編輯：衛(wèi) 軻）