血清藥物化學在中藥質量控制領域中的研究進展*

李駿飛 李清林

中醫是我國最具代表性的傳統醫學，起源于中國古代樸素唯物主義，理論體系獨特完整，治療手段豐富多樣，且數千年間積累了大量臨床案例，為人類的健康生存作出了極大的貢獻，是我國一直大力推廣和發展的特色醫學。然而進入21世紀以來，療效穩定問題持續困擾著現代中醫學的進步與發展，降低了它的影響力，阻礙國際社會對它更廣泛的認可。

中醫的療效穩定問題與中藥質量息息相關，而反映中藥質量的關鍵是藥效物質基礎。目前，由于多數單味及復方中藥的藥效物質基礎尚未被闡明，相關研究大多還停留在化學方法分步提取、體外實驗逐個驗證的狀態[1]。因此，現行中藥質量控制指標采用的“有效成分”，或稱為“指標成分”，更多是指中藥中含量較大或具有一定藥理作用的成分，但多數學者認為這些“指標成分”并不能與真正意義上的中藥“有效成分”或藥效物質基礎劃等號。地理環境、品種、加工方法等因素的變化均會導致中藥中各“指標成分”的含量存在較大差異，部分中藥的指標成分甚至與藥效完全無關[2]。這使得現行的中藥質量控制指標及方法并不能準確反映其質量，從而影響了治療效果的穩定性。

1 中藥血清藥物化學與中藥質量控制

“血清藥物化學”最早是由日本科學家田代真一[3-4]提出的，原理為口服給藥后藥物成分無論直接吸收還是經代謝分解成活性或次級代謝物，其藥效物質最終均會進入血液，并以血液為介質輸送到靶點，因此只有進入血液的成分才可能是藥效物質。此后，我國學者王喜軍[5]將該理論完善并成功應用于中藥研究，如王喜軍[6]通過“血清藥物化學”研究發現越桔入血成分為熊果苷和秦皮苷，并進一步提出了“中藥血清藥物化學”的概念，即中藥血清藥物化學是以藥物化學方法為基礎，以人或動物口服給藥后的血清為樣品，應用現代分離技術及多位聯用技術，分離、鑒定血清中的移行成分，研究血清中移行成分與傳統療效的相關性，闡明體內藥效物質基礎及體內動態的應用科學[7]。我國學者們已利用“中藥血清藥物化學”技術對多種中藥進行研究，包括單味藥：金銀花、葒草、羅漢果、梔子、雷公藤、纈草、補骨脂等；復方藥：酸棗仁湯、巴桑母酥油丸、銀翹散、地黃飲子及生脈散等[8-19]。經過大量研究，學者們對“中藥血清藥物化學”的應用有了更全面的認識，王喜軍[6]學者及其他教授均提出“中藥血清藥物化學”對準確控制中藥質量有重要意義。

“中藥血清藥物化學”跳過了中藥在體內復雜的代謝過程，將研究目標直接定為入血成分。由于只有進入血液的物質才可能成為藥效物質，該方法不僅排除了對象中藥中大量無用成分的干擾，降低了研究難度，而且也鎖定了可能構成該中藥藥效物質基礎的絕大部分成分，包括直接吸收入血的原型成分及經各種酶或肝臟代謝后產生活性的次級代謝產物，它們是反映中藥質量的關鍵因素。而據此發現并確定的“指標成分”是確實被人體吸收并發揮藥效作用的，能更準確地反映該中藥質量。如霍世霞等[20]利用“中藥血清藥物化學”建立了高良姜的含藥血清HPLC指紋圖譜，并確定了高良姜的入血成分為高良姜素。孫健等[21]測定了苦參中12個移行入血的生物堿成分，其中7個為原型成分，并發現由于結構相似存在競爭作用，具有相似藥理活性同類型成分間吸收入血速度及程度存在差異，為苦參質量控制指標的建立縮小了研究范圍，提供實驗基礎。

2 應用舉例

2.1 當歸 王亞麗等[22]學者建立了用HPLC-DADMS方法分析當歸乙醇提取物及其在灌胃兔子后血液中成分的分析方法，證實共有31種成分自藥物移行入血液，且共鑒定出其中的10種成分及其結構，包括：阿魏酸、藁本內酯二聚物及藁本內酯等。隨后，通過比較進入血液前后各組分的相對含量變化，對血液中各移行成分的生物活性進行判斷，發現藁本內酯及藁本內酯二聚物具有較高的生物活性。因此，王亞麗等[22]認為目前只以阿魏酸一種“指標成分”并不足以控制當歸質量。

2.2 地黃 王慧森等[23]研究地黃原型移行入血成分，建立了用HPLC法測定鮮地黃中梓醇、地黃苷D、益母草苷等3種成分含量的方法，并對12批次河南焦作產懷藥鮮地黃中此3種成分的含量進行了檢測。結果表明12批次鮮地黃中3種成分，梓醇含量最高15.87%，最低6.15%，地黃苷D含量最高3.30%，最低1.50%，益母草苷含量最高6.08%，最低2.38%，總含量最高20.28%，最低11.32%。根據結果，王慧森等[23]認為質量合格的鮮地黃其提取物含梓醇不得<8%，地黃苷D不得<1.7%，益母草苷不得<2.8%，3者總含量不得<15%。

2.3 白術及其復方 王喜軍等[5，24]研究發現，作為白術質量評價指標的蒼術酮及蒼術內酯在白術口服后并未被吸收，而只有TEDYA水解成TEDY后移行入血，進一步研究表明TEDY具有與白術相關的藥理活性，表明TEDY是白術作用于體內的有效成分，因此，蒼術酮及蒼術內酯含量的多寡與白術質量的優劣無關，而TEDY的前提TEDYA的含量應成為評價白術質量的重要指標。王喜軍等[5，24]還發現，TEDYA還可以作為含白術復方甘草附子湯的質量控制指標。

曹藝等[25]對歸苓片進行檢測，鑒定出血液中移行成分包括白術內酯Ⅰ、白術內酯Ⅱ、白術內酯Ⅲ等白術原型成分而沒有檢測到當歸、茯苓中的成分，且白術內酯Ⅱ及白術內酯Ⅲ在單味白術血清中基本檢測不到，而白術內酯Ⅰ含量亦大幅降低。因此三種內酯類成分含量可能成為控制該復方藥質量的重要評價指標。

2.4 延胡索 程星燁等[26]利用LC-MS/MS對口服延胡索活性部位后的大鼠血中移行成分進行研究，鑒定出其中九種成分，其中3-Methyl-dehydrocorydalmine移行入血含量比原藥中明顯提高，具有較高的生物活性。已被鑒定的九種成分均可作為控制延胡索質量的潛在“指標成分”而被進一步研究，尤其體內活性較高的3-Methyl-dehydrocorydalmine。

2.5 枳術丸 王喜軍等[27]通過HPLC法測定了枳術丸口服后大鼠血液中的化學成分，發現枳術丸移行入血的原型成分6個，代謝成分7個，認定柚皮苷、橙皮苷及新陳皮苷為枳術丸在體內的有效成分。并根據研究結果，建立了測定血液中柚皮苷、橙皮苷含量的方法用于控制枳術丸質量。

2.6 茵陳蒿及茵陳蒿湯 王喜軍等[28]利用HPLC及UPLC-UV-Q-TOF/MS技術對茵陳蒿及其復方制劑茵陳蒿湯進行了系統性的血清藥物化學研究。研究表明，盡管茵陳蒿中含有的Caparisine及6，7-DME兩種成分均具有極顯著的促膽汁分泌作用，且前者效果更顯著，但是在口服茵陳蒿后只有6，7-DME移行入血，Caparisine卻未被吸收。之后，對于茵陳蒿湯的研究發現全方移行入血的成分有21個，但只有8個成分在全方配伍時才出現，這8個成分與茵陳蒿湯的作用均具有相關性，其中的主要成分仍是6，7-DME。因此提出應將6，7-DME作為控制茵陳蒿及茵陳蒿湯質量的“指標成分”。

2.7 當歸芍藥散 Chen等[29]對當歸芍藥散給藥后的大鼠血液成分進行研究，共鑒定出7個復方原型成分及1個代謝后成分移行入血，并認為當歸芍藥散在體內發揮藥效作用的成分包括：芍藥苷磺酸鹽、芍藥內酯苷、芍藥苷、阿魏酸、川芎內酯Ⅰ、藳本內酯和丁烯酜內酯等，這些成分可能成為評價當歸芍藥散質量的“指標成分”。

此外，還有復方安替威膠囊及養血清腦顆粒等復方中藥[30-31]，亦有學者應用“中藥血清藥物化學”進行了質量控制研究。

3 展望

3.1 血液微透析 血液微透析是一種微透析技術與“血清藥物化學”聯用的檢測技術。微透析技術是將透析與灌流取樣技術結合的一種可對體內物質進行動態微量取樣分析的新技術，具有活體連續取樣、實時監測、定量分析、采樣量小及微創等特點，將微透析技術用于血樣的采集分析能順利解決傳統“血清藥物化學”研究時所產生的諸多問題，如個體化差異、取血時間及方法的合理確定等。現階段，已有部分學者將血液微透析技術應用于藥物研究，如Hou等[32]。血液微透析技術必將成為未來“中藥血清藥物化學”研究的核心技術之一。

3.2 中藥質量評價的“模糊化”和“整體化” 越來越多的研究者提出中藥的質量控制研究不應僅限于某一或某幾個“指標成分”的研究，而忽略了中藥的整體性，“模糊化”和“整體化”的質量評價指標能更準確地反映中藥質量[33]。如Tilton等[34]學者利用HPLC-MS和基因芯片技術，繪制指紋圖譜，標定與藥效作用相關的基因，通過對多批次藥材樣品測量數據的模糊聚類分析，建立了一種以黃芩湯“整體”成分和藥效為指標的質量評價方法。“中藥血清藥物化學”不僅能排除中藥中大量無用成分的干擾，闡明藥效物質基礎，還能反映藥物成分在體內的生物活性程度，為中藥“整體”成分及藥效作為指標的質量控制研究提供切實可行的依據及方法，尤其適用于復方中藥，如劉學偉等[35]使用UPLC-TOF-MS技術建立開心散血清指紋圖譜，并鑒定了41個入血成分，其中13個為代謝成分，28個為原型成分，為采用模糊聚類分析法建立“整體化”的質量控制方法提供實驗基礎。

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