蠶沙的薄層鑒別研究史蕾？

李柯　陳丹　等

【摘要】目的：建立蠶沙藥材薄層色譜鑒別方法。方法：以1-脫氧野尻霉素、派可林酸為對照品，通過優化顯色劑、展開劑及檢視等條件，篩選出最佳薄層鑒別條件。結果：所有批次蠶沙藥材均能檢出1-脫氧野尻霉素和派可林酸，且斑點清晰、分離度高、重復性好。結論：該法可行性，專屬性強，可用于蠶沙藥材的質量控制。

【關鍵詞】蠶沙；1-脫氧野尻霉素；派可林酸；薄層鑒別

【中圖分類號】R284.1【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2014）02-0018-02

蠶沙為蠶蛾科昆蟲家蠶Bonbyx mori L.的干燥糞便，具有祛風除濕、活血定痛的功效，用于風濕痹痛、關節不遂、皮膚不仁、腰腿冷痛、風疹瘙癢、頭風頭痛、烘弦風眼[1]。現代藥理和臨床研究表明蠶沙有抗腫瘤、降血糖、改善和治療貧血作用，并且成功地開發了金糖尿膠囊、生血寧片。其中1-脫氧野尻霉素（1-DNJ）和派可林酸為蠶沙降血糖、抗腫瘤、抗病毒的有效成分[2、3]。《中華人民共和國衛生部藥品標準》中藥材（第一冊）采用TLC鑒別了蠶沙藥材中含有的β-谷甾醇成分，為了更好地控制蠶沙藥材質量，我們以1-DNJ和派可林酸為對照品，對蠶沙TLC鑒別條件進行了研究，為其質量標準的制定提供依據。現將結果報道如下。

1材料與儀器

1.1儀器薄層色譜數碼成像系統（瑞士CAMAG公司）；超聲波清洗器（武漢恒信世紀科技有限公司，型號HX-06）；硅膠G薄層板（產自德國Merck默克公司）；電熱恒溫干燥箱（上海躍進醫療器械廠）。

1.2試藥蠶沙藥材分別購自長沙市岳麓區高新大藥房、濟仁堂大藥房、永康堂大藥房、湖南上藥九旺醫藥有限公司，均由湖南省中醫藥研究院李若存研究員鑒定為家蠶Bonbyx mori L.的干燥糞便；1-DNJ對照品（批號：MUST-1305502，純度>98%），購自成都曼思特生物科技有限公司；派可林酸對照品（批號：111751-200601）和蠶沙對照藥材（批號：121419-200501）均購自中國藥品生物制品檢定研究院；其余所用試劑均為分析純。

2方法與結果

2.11-DNJ薄層鑒別取蠶沙藥材約2g，加水20mL，加熱回流20min，濾過，濾液蒸干，殘渣加70%乙醇5ml使溶解，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。取1-DNJ對照品適量，加90%乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述供試品溶液10μl、1-DNJ對照品溶液15μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（16：4：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，于105℃加熱至斑點明顯后，再置碘蒸氣中熏至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。見圖1。

2.2派可林酸的薄層鑒別取派可林酸對照品適量，加乙醇制成每1ml含 0.25mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述供試品溶液10μl、派可林酸對照品溶液5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（5：4.5：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，于105℃加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。見圖2。

3討論

3.11-DNJ和派可林酸為降血糖的藥效物質，同時1-DNJ也是抗腫瘤、艾滋病病毒（HIV）和丙型肝炎病毒（HCV）的藥效物質，故以此2種成分來衡量蠶沙藥材質量的優劣比β-谷甾醇更加合理。

3.2顯色劑的選擇[4、5]由于1-DNJ和派可林酸分子中均無不飽和結構，不能采用紫外光燈進行檢視，且GF254板也未檢測到特征斑點，最后決定選用日光檢視。1-DNJ為生物堿類成分，常用顯色劑為改良碘化鉍鉀試液、吲哚醌試液；派可林酸為氨基酸類成分，常用顯色劑為茚三酮試液。試驗結果表明，上述顯色劑對1-DNJ不靈敏，經過反復試驗，發現樣品與1-DNJ對照品用茚三酮試液顯色，加熱至斑點明顯后，再置碘蒸氣中熏，日光下檢視，可增加顯色的靈敏性。因此，采用茚三酮試液和碘蒸氣作為1-DNJ的顯色劑；茚三酮試液對派可林酸顯紫色斑點，靈敏性好、專屬性強，所以選茚三酮試液作為派可林酸的顯色劑。

3.3展開劑的選擇1-DNJ分子含有多個羥基，具有較強的極性。因此，考慮采用①乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：1）；②乙酸乙酯-無水乙醇（1：2）；③三氯甲烷-甲醇-水（5：4.5：1）；④正丁醇-醋酸-水（6：1：1）作為展開劑進行試驗。以乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：1）的展開系統，分離得到的斑點最多。所以確定用乙酸乙酯-甲酸-水為展開系統，分別采用（16：3：1）、（16：4：1）、（16：5：1）不同比例進行比較，經過多次試驗，確定以（16：4：1）的分離度及Rf值最為合適。派可林酸分子中含有羧基，極性較強。采用乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：1）和三氯甲烷-甲醇-水（5：4.5：1）作為展開劑進行試驗，結果發現，三氯甲烷-甲醇-水（5：4.5：1）的展開系統，分離得到的斑點分離度好，斑點非常清晰。考慮到三氯甲烷的毒性，換用二氯甲烷進行試驗，但是斑點的分離度不夠好。所以，最后確定以三氯甲烷-甲醇-水（5：4.5：1）為展開劑。

3.4耐用性試驗選用不同廠家的硅膠G板進行了比較，結果市售4個批次的蠶沙藥材與蠶沙對照藥材試驗均與1-DNJ和派可林酸對照品相應的位置上顯相同顏色斑點，且分離度好。

參考文獻

[1] 中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準中藥材第一冊[M].1992：69.

[2] 蘇鳳蓮.高效液相色譜法測定金糖寧膠中派可林酸的含量[J].海峽藥學，2001，13（3）：42.

[3] 梁明，王鵬，張會慧，等.1-脫氧野尻霉素的研究進展[J].安徽農業科學，2012，40（17）：9222.

[4] 李曉偉，易智彪，曾寶，等.巴豆生物堿薄層色譜鑒別研究[J].北方藥學，2013，10（2）：3.

[5] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010：3.

（收稿日期：2013.11.28）