無花果葉中補(bǔ)骨脂素含量測定

鄭巖　王紅霞　陳隨清

【摘要】目的：建立無花果葉中補(bǔ)骨脂素含量的HPLC測定方法，為無花果葉的開發(fā)利用及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)。方法：色譜柱為hypersil ODS（250mm×4.0mm、5μm）；流動相為乙腈-水（55：45）；流速為1.0mL/min；檢測波長290nm；柱溫32℃。結(jié)果：補(bǔ)骨脂素在2～10μg范圍與峰面積線性關(guān)系良好（R2=0.9996），平均回收率為102.2%，RSD=1.80%。

【關(guān)鍵詞】補(bǔ)骨脂素；無花果葉；HPLC；含量測定

【中圖分類號】R284.2【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2014）02-0013-02

無花果為桑科榕屬植物無花果（Ficus carica L.），為藥食兼優(yōu)的植物。原產(chǎn)地中海及西南亞，現(xiàn)我國各地均有栽培[1]，主要分布于新疆、江蘇、浙江、福建、山東、上海、四川、陜西、甘肅、江西、廣東、河南等省，有悠久的栽培歷史，是開發(fā)應(yīng)用較廣的經(jīng)濟(jì)植物。其果實(shí)營養(yǎng)價值高，富含糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素和礦物元素，除食果外，其葉、根又俱含藥用成份，為藥食同源果品樹種[2]。我國應(yīng)用其葉、根入藥，治療腸炎，腹瀉；外用治癰腫。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，無花果葉中含有多種化學(xué)成分，包括香豆素、黃酮、揮發(fā)油、多糖、微量元素、氨基酸、維生素等[3]，其藥理作用包括抗菌、抗病毒、抗腫瘤、降血脂、降血糖、治療白癜風(fēng)、痔瘡等，藥效顯著[4]。無花果葉中所含的補(bǔ)骨脂素經(jīng)體外抑瘤率活性測試，表明對表皮癌、膀朧癌、肝癌均有顯著療效，并有較好的抗菌活性和降低血糖、血脂的作用。

為進(jìn)一步開發(fā)利用無花果葉，采用高效液相色譜法對無花果葉中補(bǔ)骨脂素的含量進(jìn)行測定，并對不同提取方法進(jìn)行了初步探索，為建立無花果葉中有效成分的含量測定方法提供了科學(xué)依據(jù)。

1儀器與試劑

1.1實(shí)驗(yàn)儀器高效液相色譜儀（LC-20AT，日本島津公司），紫外檢測器（SPD-20A，日本島津公司），色譜工作站（CBM-102，日本島津公司）；無油真空泵（HP-01，天津市恒奧科技發(fā)展有限公司）；溶劑過濾器（HL，天津市恒奧科技發(fā)展有限公司）；數(shù)控超聲波清洗器（KQ-500DV，昆山市超聲儀器有限公司）；十萬分之一天平（梅特勒，Mettler Toledo AB 135-S）；分析天平（BS2242S，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；自動雙重純水蒸餾器（SZ-93，上海亞榮生化儀器廠）；電子天平（JJ5000，常熟市雙杰測試儀器廠）；粉碎機(jī)（FW200，北京中興偉業(yè)儀器有限公司）；循環(huán)水式多用真空泵（SHZ-95B，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）。

1.2試劑乙腈（色譜純，天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司）；甲醇（分析純，北京化工廠）；雙蒸水為自制。

1.3對照品補(bǔ)骨脂素為中國生物制品檢定所提供，批號110739-200814，經(jīng)HPLC檢測含量>99%。

1.4樣品樣品均采于河南中醫(yī)學(xué)院，由河南中醫(yī)學(xué)院陳隨清教授鑒定為桑科榕屬植物無花果（Ficus carica L.）的干燥葉。

2方法與結(jié)果

2.1對照品溶液的制備精密稱取補(bǔ)骨脂素5.0mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（0.5mg/ml）。

2.2供試品溶液的制備取無花果葉適量研細(xì)。精密稱取0.5g置50ml量瓶中，加50%甲醇約50ml超聲提取30min。放置至室溫，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品。

2.3色譜條件色譜柱：phenomenex hydro ODS C18（250mm×4.6mm，4μm）色譜柱，流動相：乙腈-水（55：45），流速：1.0ml/min，檢測波長：290 nm，進(jìn)樣量：10μl，柱溫：32℃。在上述色譜條件下，補(bǔ)骨脂素與其他成分分離良好，見圖1。

2.4方法學(xué)考察

2.4.1線性關(guān)系考察取補(bǔ)骨脂素對照品溶液，分別進(jìn)樣4、6、8、10、15、20μl，以補(bǔ)骨脂素的進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積（×106）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：y=0.9297x+0.0671，R2=0.9996，表明補(bǔ)骨脂素的進(jìn)樣量2～10μg時與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.4.2穩(wěn)定性試驗(yàn)取無花果葉粉末0.5g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備，按同樣的色譜條件進(jìn)行HPLC分析，進(jìn)樣6次，時間間隔為0、2、4、8、12、24小時，分別測定補(bǔ)骨脂素峰面積，計(jì)算RSD=1.00%。表明補(bǔ)骨脂素在本實(shí)驗(yàn)條件下至少48小時內(nèi)較穩(wěn)定。

2.4.3精密度試驗(yàn)取補(bǔ)骨脂素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按同樣的色譜條件進(jìn)行HPLC分析，連續(xù)進(jìn)樣6次，分別測定補(bǔ)骨脂素峰面積，計(jì)算RSD=0.76%。表明此方法精密度良好。2.4.4 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取無花果葉粉末6份，各0.5g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備，按同樣的色譜條件進(jìn)行HPLC分析，分別測定補(bǔ)骨脂素峰面積，計(jì)算RSD=0.34%，表明此方法重現(xiàn)性良好。

2.4.5加樣回收率試驗(yàn)取無花果葉粉末6份，各0.5g，精密稱定，于每份樣品中加入適量補(bǔ)骨脂素對照品溶液，按供試品溶液制備方法制備供試液，進(jìn)樣分析，計(jì)算回收率，平均回收率為102.2%，RSD=1.80%，表明本試驗(yàn)方法回收良好。

2.4.6樣品含量測定取六份無花果葉粉末各0.5g，分別精密稱定后，按上述制備方法制備，精密吸取供試品溶液，注入液相色譜儀進(jìn)行測定，計(jì)算補(bǔ)骨脂素的含量，結(jié)果見表1。

3結(jié)果與討論

3.1提取溶劑的考察分別用50%甲醇、75%甲醇、及甲醇超聲提取無花果葉，結(jié)果表明，用50%的甲醇提取補(bǔ)骨脂素效率最高。

3.2提取時間的考察用50%的甲醇作為溶劑提取無花果葉，分別超聲提取10、20、30min，結(jié)果表明，超聲提取30min的補(bǔ)骨脂素峰面積最大。

3.3流動相的考察考察甲醇-水及乙腈-水作為流動相，結(jié)果表明用乙腈-水=55：45做流動相時，補(bǔ)骨脂素吸收峰能與其他成分有效分離，且基線較平穩(wěn)，雜質(zhì)峰較少，峰形好，因此選用乙腈-水=55：45作為流動相進(jìn)行含量測定。

3.4測定結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)建立的高效液相色譜法測定無花果葉中補(bǔ)骨脂素的含量方法，方法準(zhǔn)確、靈敏、簡便、快速、重現(xiàn)性好，可作為其補(bǔ)骨脂素的含量測定的主要方法，并為今后無花果葉的質(zhì)量控制研究提供一定科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]中國藥材公司.中國中藥資源志要[M].北京：科學(xué)出版社，1994：186.

[2]車久玲.無花果的栽培歷史生態(tài)特性及藥用價值[J].山東林業(yè)科技，1995，26（5）：19.

[3]劉弘，趙麗婭.無花果葉的化學(xué)及藥理研究進(jìn)展[J].華夏醫(yī)學(xué)，2006，19（5）：1049-1051.

[4]葉華，謝紹詩，張文清.無花果葉、根的藥用研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué)，2006，18（6）：3-7.

（收稿日期：2013.11.27）