舌鱗狀細(xì)胞癌組織Bmi1表達(dá)及意義

劉碩碩，陸宇

(泰州市第二人民醫(yī)院，江蘇泰州225599)

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舌鱗狀細(xì)胞癌組織Bmi1表達(dá)及意義

劉碩碩，陸宇

(泰州市第二人民醫(yī)院，江蘇泰州225599)

摘要：目的觀察舌鱗狀細(xì)胞癌組織B細(xì)胞特異性莫洛尼白血病毒插入位點(diǎn)1(Bmi1)的表達(dá)情況，探討其與患者臨床病理特征的關(guān)系。方法選擇舌鱗狀細(xì)胞癌組織69份(觀察組)，同體癌旁正常組織20份(對(duì)照組)。采用免疫組化法檢測(cè)兩組Bmi1表達(dá)，并分析其與舌鱗狀細(xì)胞癌患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果觀察組Bmi1陽(yáng)性表達(dá)56例，陽(yáng)性率為81.2%；對(duì)照組Bmi1陽(yáng)性表達(dá)3例，陽(yáng)性率為15.0%；兩組陽(yáng)性率比較，P<0.01。Bmi1陽(yáng)性表達(dá)與舌鱗狀細(xì)胞癌患者的性別、年齡、分化程度無(wú)關(guān)(P均>0.05)，與浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)。結(jié)論舌鱗狀細(xì)胞癌組織中Bmi1蛋白表達(dá)升高，其表達(dá)變化可能參與了腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移，并有助于判斷患者的預(yù)后。

關(guān)鍵詞：舌鱗狀細(xì)胞癌；侵襲；轉(zhuǎn)移；預(yù)后；B細(xì)胞特異性莫洛尼白血病毒插入位點(diǎn)1

舌鱗狀細(xì)胞癌是發(fā)病率最高的口腔惡性腫瘤，容易早期轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，病死率較高，5年生存率只有50%左右[1]。研究發(fā)現(xiàn)，B細(xì)胞特異性莫洛尼白血病毒插入位點(diǎn)1(Bmi1)基因在多種腫瘤組織中表達(dá)異常，如食道癌[2]、肝癌[3]、乳腺癌[4]等。Bmi1在多種人類腫瘤中呈高表達(dá)，并可啟動(dòng)與上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)的干細(xì)胞樣性能，促進(jìn)腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移[5]。目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于Bmi1對(duì)舌鱗狀細(xì)胞癌發(fā)病及預(yù)后影響的報(bào)道較少。本研究采用免疫組化法檢測(cè)Bmi1在舌鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)，并分析其與患者臨床病理特征的關(guān)系。

1資料與方法

1.1臨床資料收集2012年1月～2015年1月本院存檔的舌鱗狀細(xì)胞癌組織蠟塊69份(觀察組)，患者男41例，女28例；年齡39～72歲，平均63歲。均經(jīng)術(shù)后病理確診，術(shù)前未行放化療且病例資料完整。取同體癌旁正常組織(距離癌組織3 cm以上,并經(jīng)病理證實(shí)無(wú)癌細(xì)胞浸潤(rùn))20份(對(duì)照組)，患者中男10例，女10例；年齡42～65歲，平均58歲。本研究均獲得患者及其家屬的知情同意。

1.2Bmi1表達(dá)檢測(cè)采用免疫組化法。取兩組石蠟包埋切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化處理，蒸餾水漂洗5 min。0.01 mol/L枸櫞酸鹽(pH 6.0)抗原修復(fù)液中熱修復(fù)15 min，自然冷卻至室溫，PBS緩沖液沖洗4 min×3次；3%過(guò)氧化氫室溫下孵育15 min，PBS沖洗4 min×3次。滴加鼠抗人Bmi1單克隆抗體(1∶200)，4 ℃冰箱中過(guò)夜后，室溫放置1 h，PBS沖洗4 min×3次。擦干后滴加二抗，置37 ℃恒溫箱30 min后，PBS沖洗4 min×3次。DAB顯色5 min，自來(lái)水終止顯色，甩干后放入蘇木精染色10 min后過(guò)水顯藍(lán)色洗滌；分化液中浸泡4次，再浸水10 min至顯藍(lán)色。梯度乙醇、二甲苯脫水，中性樹(shù)膠封片。Bmi1陽(yáng)性表達(dá)主要定位于細(xì)胞核，表現(xiàn)為細(xì)胞核內(nèi)呈棕黃色或棕褐色顆粒，也有少量細(xì)胞質(zhì)內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色。使用普通光學(xué)顯微鏡，高倍鏡下(×200)隨機(jī)取4個(gè)不同視野，計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)及細(xì)胞核陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞率[6]。陽(yáng)性細(xì)胞率≤10%計(jì)1分，>10%~≤50%計(jì)2分，>50%~≤75%計(jì)3分，>75%計(jì)4分。同時(shí)根據(jù)染色強(qiáng)弱程度計(jì)分：陰性計(jì)1分，弱染色計(jì)2分，中等染色計(jì)3分，強(qiáng)染色計(jì)4分。陽(yáng)性細(xì)胞率與染色強(qiáng)弱程度計(jì)分的乘積≤4為-，>4~≤8 為+，>8~≤12 為++，>12~≤16為+++。其中-和+均視為陰性表達(dá)，++和+++均視為陽(yáng)性表達(dá)。以上結(jié)果由兩位病理科醫(yī)生在雙盲情況下獨(dú)立觀察判斷。檢測(cè)用鼠抗人Bmi1單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)abcam生物技術(shù)公司，免疫組化試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3Bmi1表達(dá)與舌鱗狀細(xì)胞癌患者臨床病理因素的關(guān)系記錄兩組的性別、年齡、分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等臨床病理資料，分析其與Bmi1表達(dá)的關(guān)系。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料用率表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組Bmi1表達(dá)比較觀察組Bmi1陽(yáng)性表達(dá)56例，陽(yáng)性率為81.2%；對(duì)照組Bmi1陽(yáng)性表達(dá)3例，陽(yáng)性率為15.0%；兩組陽(yáng)性率比較，P<0.01。

2.2Bmi1表達(dá)與舌鱗狀細(xì)胞癌患者臨床病理特征的關(guān)系Bmi1陽(yáng)性表達(dá)與舌鱗狀細(xì)胞癌患者的性別、年齡、分化程度無(wú)關(guān)(P均>0.05)，而與浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)。見(jiàn)表1。

表1　Bmi1表達(dá)與舌鱗狀細(xì)胞癌患者臨床病理特征的關(guān)系

3討論

舌鱗狀細(xì)胞癌病死率高，臨床治療失敗的原因之一就是腫瘤干細(xì)胞的存在。在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中，腫瘤干細(xì)胞在腫瘤的發(fā)生、演變、轉(zhuǎn)移和治療耐藥性等方面均發(fā)揮重要作用[7～10]。許多分子和細(xì)胞通路與干細(xì)胞的增殖和自我更新密切相關(guān)，如多梳基因(PcG)家族、Notch信號(hào)通路、Wnt信號(hào)通路以及轉(zhuǎn)化因子TGF-β信號(hào)通路等。PcG家族由多個(gè)與細(xì)胞周期和增殖相關(guān)的轉(zhuǎn)錄抑制因子組成，如Bmi1、Mel18、BLG等一系列保守蛋白，Bmi1基因是PcG家族的核心成員之一。人類Bmi1基因定位于10p11.23,其cDNA長(zhǎng)3 202 bp，位于506～1 486 bp的開(kāi)放閱讀框編碼一個(gè)含326個(gè)氨基酸，相對(duì)分子量為45 kD的蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)中位于N末端的環(huán)指結(jié)構(gòu)域和位于中心的DNA結(jié)合模序螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋-轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)域，對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化和腫瘤形成有重要作用。Bmi1作為干細(xì)胞的標(biāo)志，在內(nèi)源性干細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞中均發(fā)揮重要作用[11,12]；其主要功能是通過(guò)抑制P16基因表達(dá)來(lái)維持細(xì)胞干性并增強(qiáng)干細(xì)胞的自我更新能力，抑制衰老[13]；還可直接作用于C-MYC基因，參與腫瘤的發(fā)生[14]。

本研究結(jié)果顯示，Bmi1在舌鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)顯著升高，與其在其他腫瘤中的表達(dá)變化基本一致。Bmi1表達(dá)與舌鱗狀細(xì)胞癌患者的性別、年齡、腫瘤分化程度無(wú)關(guān)，而與腫瘤的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān)，表明Bmi1參與了舌鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展，并可促進(jìn)癌細(xì)胞的侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。目前研究發(fā)現(xiàn)，Bmi1能夠抑制抑癌基因PTEN表達(dá)[15]，誘導(dǎo)端粒酶，激活A(yù)kt/GSK3β/Snail信號(hào)通路[3]，且協(xié)同Twist抑制E-cadherin[16]，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和侵襲能力。據(jù)此推斷，Bmi1可能正是通過(guò)以上作用促進(jìn)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，從而促進(jìn)舌鱗狀細(xì)胞癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致預(yù)后不良。

綜上所述，Bmi1在舌鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)明顯升高，并與腫瘤的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、術(shù)后復(fù)發(fā)情況轉(zhuǎn)移有關(guān)。Bmi1可作為評(píng)價(jià)舌鱗狀細(xì)胞癌患者病情進(jìn)展程度和預(yù)后的指標(biāo)，也可作為靶向治療的新靶點(diǎn)。由于本研究樣本量有限，且僅限于免疫組化法的檢測(cè)結(jié)果，因此本結(jié)論尚需進(jìn)一步證實(shí)。目前，Bmi1參與舌鱗狀細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制尚未明確，仍需深入研究。

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中圖分類號(hào)：R780.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：1002-266X(2015)48-0080-03

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.48.030