結核分枝桿菌Rv1009結構域多肽的免疫學特性研究

薛士鵬

·實驗研究·

結核分枝桿菌Rv1009結構域多肽的免疫學特性研究

薛士鵬

目的 探討結核分枝桿菌Rv1009結構域多肽的免疫學特性。方法 選取33只小白鼠按照融合蛋白免疫情況的不同分為Rv1009組、BCG組和生理鹽水組, 采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測方式對三組小白鼠中的血清特異性抗體滴速情況進行觀察。分離小白鼠的脾淋巴細胞后采用體外抗原刺激的方式和MTT比色法對小白鼠脾淋巴細胞增殖指數進行觀察。采用ELISA方法檢測淋巴細胞懸液中鼠源性γ干擾素(IFN-γ)、白細胞介素-10(IL-10)、白細胞介素-12(IL-12)的產生水平。結果 經過研究后發現, 結核分枝桿菌Rv1009結構域多肽免疫小白鼠血清特異性抗體的滴速為1:13800, 淋巴細胞增殖的指數為(2.42±0.17), 明顯高于生理鹽水組小白鼠的淋巴細胞增值指數(P<0.05)。在ELISA檢測方面, 結核分枝桿菌Rv1009結構域多肽免疫組小白鼠的IFN-γ、IL-10、IL-12產生水平分別為(1422±31)、(502±10)、(310±12)ng/L, 明顯高于生理鹽水組小白鼠的IFN-γ、IL-10、IL-12產生水平(P<0.05)。結論 結核分枝桿菌Rv1009結構域多肽在體外實驗研究的過程中效果更好, 具有極強的臨床研究價值。

結核分枝桿菌；Rv1009；結構域多肽；免疫學特性

為了探討慢性胃炎的有效治療方式, 本院特進行了一次研究, 取得了較為良好的效果, 現將具體情況報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 7H9液體培養液引進于美國Difco公司；IFN-γ、IL-10和IL-12所使用的ELISA檢測試劑盒主要由深圳晶美公司提供。MTBH37RV是由陜西省結核病防治中心提供, BCG疫苗株主要由蘭州生物制藥研究所提供, 國藥準字為SF20020034, 批號為20011201。RPMI1640主要購自于華美生物有限公司［1］。本次研究的主要對象為小白鼠, 所有選用的小白鼠均為雄性, 由湖南省第四軍醫大學試驗動物中心資助。33只小白鼠作為本次研究的主要對象, 將其隨機按照融合蛋白免疫情況的不同分為Rv1009組、BCG組和生理鹽水組。

1.2 研究方法

1.2.1 脾淋巴細胞增殖指數檢測試驗 分離三組小白鼠的脾淋巴細胞, 并將細胞數量調整到5×105/L, 200 μl/孔, 在孔板中用小牛血清對RPMI-1640進行培養, 并且加入PPD2 μg/孔,但是在對照孔中不加入PPD, 調零孔不加細胞。將其放置在孵箱中進行培養, 再加入20 μl MTT繼續培養4 h后終止培養,棄上清后再在孔板中加入DMSO震蕩10 min后測算相關的刺激指數。

1.2.2 小白鼠血清中特異性抗體檢測方式 用純化的方式將融合蛋白作為抗原, 包被ELISA板, 在4℃環境下過夜之后將37℃的環境下封閉, 30 min之后洗滌, 并且加入不同稀釋度的免疫小白鼠的血清, 洗滌后加HRP標記的羊抗鼠。待OPD顯色之后測定490 nm處的吸光度值。

1.3 觀察指標 三組小白鼠中的血清特異性抗體滴速、脾淋巴細胞增殖指數情況、淋巴細胞懸液中IFN-γ、IL-10、IL-12的產生水平進行觀察。

1.4 統計學方法 采用SPSS19.0統計學軟件對數據進行統計分析。計量資料以均數 ± 標準差( x-±s)表示, 采用t檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

結核分枝桿菌Rv1009結構域多肽免疫小白鼠血清特異性抗體的滴速為1:13800, 淋巴細胞增殖的指數為(2.42± 0.17), 生理鹽水組小白鼠的淋巴細胞增殖指數為(0.91±0.13)。比較差異具有統計學意義(P＜0.05)。結核分枝桿菌Rv1009結構域多肽免疫組小白鼠的IFN-γ、IL-10、IL-12產生水平分別為(1422±31)、(502±10)、(310±12)ng/L, 生理鹽水組小白鼠的IFN-γ、IL-10、IL-12產生水平分別為(255±20)、(75±5)、(55±7)ng/L, 比較差異具有統計學意義(P＜0.05)。

3 討論

結核疾病英文名稱為tuberculosis, 簡稱為TB, 是目前世界范圍內最為重要的致病因素, 患者很容易產生死亡的情況［2］。據相關統計顯示, 在全世界范圍內, 約有33%的人群感染結核分枝桿菌的情況, 發生結核分枝桿菌感染的情況的新增人數每年約有1500萬, 大約250萬患者發生死亡的情況［3］。從目前結核分枝桿菌的存在形式上來看主要是潛伏感染, 從這一方面可以證明, 結核分枝桿菌耐藥性能較強, 可以在體內長期生存, 這一特點也是造成近幾年來結核疾病在臨床中呈現出上升趨勢的重要原因, 因此對隱藏性結核分枝桿菌進行控制是臨床中最為重要的方面［4］。從目前臨床情況上來看卡介苗是預防結核分枝桿菌主要的預防疫苗, 但是這種疫苗在臨床中所表現出的保護期較短, 免疫應答能力較弱。另外還需要注意的是, 卡介苗對結核隱性感染者并沒有效果。因此找到一種能夠替代卡介苗的疫苗成為國內外研究的重點問題。通過本次研究發現, 結核分枝桿菌Rv1009在生長的過程中發揮出重要的作用, 具有多種淋巴細胞抗原表位的特點, 是治療結核疾病新的切入點。從本次研究的結果上來看,在小白鼠血清中能夠檢測到較強的結核分枝桿菌Rv1009結構域多肽抗體, 因此證明此種免疫方式的可行性［5］。

綜上所述, 結核分枝桿菌Rv1009結構域多肽在體外實驗研究的過程中能夠取得良好的效果, 很有可能成為未來新型的結核疫苗之一, 具有極強的臨床研究價值, 本次研究中的結果值得在臨床中大力推廣應用。

［1］ 樊愛琳, 師長宏, 蘇明權, 等.結核分枝桿菌Rv1009結構域多肽的免疫學特性研究 .中華檢驗醫學雜志, 2008, 31(11):1282-1286.

［2］ 樊愛琳, 馬越云.抗結核分枝桿菌RpfB結構域單克隆抗體的制備及鑒定.生物技術通訊, 2014, 25(6):804-808.

［3］ 蒯守剛, 崔振玲.結核分枝桿菌Rv3671c基因的克隆表達及免疫印跡檢測.臨床檢驗雜志, 2012, 30(11):906-908.

［4］ 霍如松.結核分枝桿菌Rv1738、TB31.7及RPFE的表達純化及免疫特性分析.揚州大學, 2012.

［5］ 曹廷明, 賈紅彥, 杜鳳嬌, 等.結核分枝桿菌Rv1512基因的特異性和克隆表達.臨床肺科雜志, 2011, 16(12):1887-1890.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.17.191

2015-01-30］

473061 南陽醫學高等專科學校