腦脊液神經元性烯醇化酶生物參考區間的建立＊

曹艷菲，陳 剛，張麗娜，董秀鵬，寇筱囡，崔 穎，曹秀華

（大慶油田總醫院：1.檢驗科；2.神經外科，黑龍江大慶163001）

生物參考區間是解釋檢驗結果信息的基本尺度和依據之一，可靠的生物參考區間有助于為患者和健康體檢者提供明確的指引［1－2］。因此，建立可靠的檢驗項目生物參考區間十分必要。《ISO15189：2012醫學實驗室－質量和能力的專用要求》指出，生物參考區間是取自生物參考人群的值分布的規定區間，一般定義為95%區間，特定情況下，可采用其他寬度或非對稱定位的參考區間［3］。某些情況下，只有生物參考限才是重要的，如確定參考上限后，相應參考區間即為小于或等于參考上限。美國臨床實驗室標準化委員會（NCCLS）文件《C28－A2臨床實驗室如何確定和建立生物參考區間核準指南（第2版）》指出，確定參考值或參考區間應保證所選擇的樣品組來源于健康人群［4］。然而，出于不同的目的，確定參考值或參考區間的樣品組，可來源于健康人群，也可來源于處于其他生理狀態下或病情情況下的人群［5］。神經元特異性烯醇化酶（NSE）是神經元損傷的敏感標志［6］。腦神經元和神經膠質細胞受損時，腦脊液和外周血NSE水平明顯升高［7］。腦脊液NSE可作為腫瘤標志物，也可用于輔助診斷腦部腫瘤和轉移瘤，以及判斷腦損傷程度［8－9］。由于缺乏國內外公認的腦脊液NSE生物參考區間，影響了該指標的臨床應用。本研究依據NCCLS C28－A2文件，建立了適用于本實驗室的腦脊液NSE生物參考區間。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2007年10月至2014年5月因懷疑顱內感染、顱腦損傷及缺氧缺血性腦病于本院住院治療，但最終均經血常規、生化檢驗、腦脊液常規檢查及腦電圖、CT等檢查排除神經系統疾病的患者120例，男66例、女54例，年齡1～78歲。

1.2 方法

1.2.1 標本采集及檢測 所有受試者均于入院24～48h內、未接受任何救治措施之前，在無菌條件下腰椎穿刺采集腦脊液3mL，3 000r／min離心10min，分離上清液，采用羅氏公司E170全自動免疫分析儀及配套試劑檢測NSE水平。每位受試者在標本采集前均簽署知情同意書，并經醫院倫理委員會審查通過。

1.2.2 質量保證 E170全自動免疫分析儀NSE檢測項目參加衛生部臨床檢驗中心室間質評、羅氏公司全球室間比對，結果均為滿意。臨床標本檢測前均進行室內質控品檢測，且檢測結果在控制范圍內。所有檢測操作步驟均參照《全國臨床檢驗操作規程》［5］。

1.2.3 生物參考區間的建立和評審 （1）離群值檢驗：當采用非參數方法建立參考區間時，應以1／3規則對數據進行離群值判斷。極端觀測值（最大值或最小值）和與其相鄰的極端觀測值（第二大值或第二小值）之間的絕對差值作為D值，所有觀測值的全距（最大極值和最小極值的差值）作為R值，D／R值的1／3即為判斷離群值的臨界值［4］。（2）性別因素檢驗：對所得數據進行單因素方差分析，如性別因素對結果有影響，則需按不同性別分別建立生物參考區間。（3）年齡因素檢驗：對所得數據進行單因素方差分析，如年齡因素對結果有影響，則需按不同年齡段分別建立生物參考區間。（4）建立生物參考區間：依據NCCLS C28－A2文件的要求建立生物參考區間。（5）生物參考區間評審：依據中國合格評定國家認可委員會（CNAS）CL38：2012文件的要求對建立的生物參考區間進行評審。

2 結 果

2.1 數據一般觀察 120例患者腦脊液NSE濃度頻數分布見圖1。患者腦脊液NSE濃度分布呈偏態分布，所以采用計算第2.5個百分位數、第97.5個百分位數的方法確定參考區間。但因NSE低值無特殊的臨床意義，故統計的生物參考區間采用單側限，即低于高限（第97.5個百分位數）。

圖1 120例患者腦脊液NSE濃度頻數分布圖

2.2 離群值檢驗 120例數據經D／R值的1／3規則判斷，未發現離群值。

2.3 性別因素檢驗 將全部數據按性別分為2組，采用單因素方差分析進行性別因素檢驗，P值大于0.05，說明腦脊液NSE濃度在不同性別間的差異無統計學意義，見表1。

表1 腦脊液NSE濃度性別因素方差分析

表2 腦脊液NSE濃度年齡因素方差分析

2.4 年齡因素檢驗 將全部數據按年齡分為2組，采用單因素方差分析進行年齡因素檢驗，P值大于0.05，說明腦脊液NSE濃度在不同年齡間的差異無統計學意義，見表2。

2.5 建立生物參考區間 腦脊液NSE濃度呈偏態分布，采用單側限建立生物參考區間，即0至第97.5個百分位數，建立的生物參考區間為0～3.14ng／mL。

2.6 生物參考區間評審 根據CNAS CL38：2012文件的要求，選擇20份健康者腦脊液標本進行生物參考區間評審，結果顯示，20份標本檢測結果均在建立的生物參考區間范圍內。

3 討 論

生物參考區間是解釋檢驗結果臨床意義的重要依據，臨床實驗室建立正確的、具有適用性的生物參考區間十分重要。在建立生物參考區間時，應考慮生物學因素（如年齡、性別、民族等）導致的參考區間的差異，以及不同檢驗系統間的差異等［10］。簡單地引用文獻或直接采用廠商給定的參考區間是不可取的，在條件允許的情況下，臨床實驗室應盡可能建立自己的參考區間［11］。本研究建立參考區間所采用的方法參照NCCLS C28－A2文件，其制定的方法是目前具有極高標準化程度的方法之一，且可操作性較強，適合臨床實驗室的推廣使用［12－14］。在制定檢驗項目參考區間前，應充分了解項目的臨床意義，并定期邀請臨床醫師參加生物參考區間的評審工作，從而彌補檢驗科臨床信息不足的缺陷，保證生物參考區間的科學性和適用性。

本研究參考NCCLS C28－A2文件建立生物參考區間，再參照CNAS CL38：2012文件的要求進行參考區間評審，從而能夠為臨床提供可靠的生物參考區間。上述方法科學、實用，能夠從多途徑保證生物參考區間的可靠性、準確性，受到臨床的認可。

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