宮頸病變患者HPV-DNA、IL-17檢測的臨床意義及其相關性

周 輝，陳小蘭

(衢州市柯城區婦幼保健院檢驗科，浙江 衢州 324000)

宮頸病變患者HPV-DNA、IL-17檢測的臨床意義及其相關性

周 輝，陳小蘭

(衢州市柯城區婦幼保健院檢驗科，浙江 衢州 324000)

目的 探討宮頸病變患者人乳頭狀瘤病毒DNA(HPV-DNA)、白細胞介素17(IL-17)檢測的臨床意義及其相關性。方法 2011年5月至2013年5月從衢州市柯城區婦幼保健院收治的宮頸病變患者中隨機選擇60例檢測其宮頸組織中HPV-DNA和IL-17含量。結果 60例宮頸病變患者中，HPV呈陰性的患者占41.67%(25/60)，陽性占30.00%(18/60)，其余28.33%(17/60)為宮頸癌患者，3組構成比無顯著性差異(χ2=12.21，P>0.05)。HPV陽性組和宮頸癌組的IL-17水平均顯著高于陰性組(t=8.11，11.13，P<0.05)，陽性組和宮頸癌組比較，無顯著性差異(t=2.15，P>0.05)。結論 IL-17和宮頸癌的發生發展有一定相關性，臨床對宮頸癌進行診斷和治療以及預后判斷時，可以積極的對患者進行高危HPV聯合IL-17水平檢測。

宮頸病變；人乳頭狀瘤病毒DNA；白細胞介素17；相關性

宮頸病變是婦科疾病中常見的疾病，其對女性生殖健康危害較大。因此，有效的檢測方法對提高此病診斷、治療和預后效果至關重要[1-2]。本研究通過對60例宮頸病變患者進行檢測人乳頭狀瘤病毒DNA(humna panillmoa virus DNA, HPV-DNA)、白細胞介素17(interleukin 17, IL-17)含量，以探討兩者的臨床意義及其相關性。

1 材料和方法

1.1 材料

從衢州市柯城區婦幼保健院2010年5月至2013年5月收治的宮頸病變患者中隨機選擇60例進行研究，年齡19 ～ 68歲，平均年齡49.12±2.33 歲。研究獲得醫學倫理學相關部門同意，所有患者均了解研究情況，并簽署知情同意書，自愿參與研究。利用一次性宮頸細胞取樣器進行取樣，取樣之前要將患者宮頸口過多的分泌物擦拭干凈，然后將取樣器插入患者子宮頸外口，轉動5圈之后將取樣器緩慢取出。并放入含有保存液的小瓶中，折斷多余刷柄，并旋緊管蓋，標注編號之后立即送檢。

1.2 方法

使用的儀器為全自動流式細胞分析儀(購自美國貝克曼庫爾特有限公司，型號FC 500 MCL/MPL)，DA7600擴增儀，試劑為配套的IL-17PE試劑以及人乳頭瘤病毒(HPV)核酸擴增(PCR)熒光檢測試劑盒(購自深圳康生保生物技術有限公司，S20060039)。

1.2.1 制備標本

將200μL宮頸脫落細胞懸液加入20μL熒光標記抗體IL-17之中，充分振蕩混合均勻之后，置于避光、室溫條件下進行孵育。20min之后 用0.1mol pH 7.0 PBS×2mL，離心、洗滌，棄去上清液之后，加入500μL PBS充分振蕩混合均勻之后，制成懸浮細胞備用。

1.2.2 流式細胞術測定

利用全自動流式細胞儀的CELLQuest功能獲得數據分析，以波長512nm，15mW的氬離子激光作為光源，利用標準熒光微球進行儀器校對之后，保持半峰變異系數小于2%。利用前向角散射光對側向角散射點圖來對淋巴細胞群進行確定，得出IL-17 PE的表達，并以百分比表示。同期，利用同一患者的宮頸細胞標本，不予處理，進行自身陰性對照。

1.2.3 人乳頭狀瘤病毒DNA檢測

利用多重PCR法進行HPV-DNA檢測。取適量宮頸脫落細胞，進行5min的13 000rpm離心，棄去上清液之后，加入DNA提取液50μL，并置于100℃環境下進行10min干浴。然后進行10min的13 000rpm離心。取上清液進行PCR擴增，不同溫度下的反應條件分別為：50℃、2min，95℃、10min，1循環；95℃、15s，52℃、30s，62℃、60s，40循環。 以36為臨界陽性Ct值，利用儀器分析樣本的Ct值，并按照說明書上的方法對結果進行判定。

1.3 統計學方法

采用SPSS 15.0統計軟件對研究所得數據進行統一的錄入和分析，計量資料采用t檢驗，并用 表示，計數資料采用χ2檢驗。以P<0.05定為結果有統計學差異。

2 結果

2.1 人乳頭狀瘤病毒檢測結果分析

在60例宮頸病變患者中，HPV呈陰性的患者占41.67%(25/60)，陽性占30.00%(18/60)，其余28.33%(17/60)為宮頸癌患者，3組構成比無顯著性差異(χ2=12.21，P>0.05)，見表1。

表1 HPV檢測結果

Table 1 Results of HPV detecting

2.2 白細胞介素17水平分析

將患者按照HPV檢測結果分為陽性組和陰性組以及宮頸癌組，檢測其IL-17水平可得，陽性組和宮頸癌組的IL-17水平顯著高于陰性組(t=8.11，11.13，均P<0.05)，陽性組和宮頸癌組比較，無顯著性差異(t=2.15，P>0.05)，見表2。

注：▲為與陰性組比較，P<0.05。

3 討論

3.1 人乳頭狀瘤病毒DNA與宮頸癌

宮頸的人乳頭瘤病毒(humna panillmoa virus，HPV)感染是誘發宮頸癌的重要因素之一，大多數宮頸癌患者均可檢測到HPV。因此，HPV檢測是臨床篩查宮頸癌有效方法。多數女性一生中可感染HPV，但并非所有的HPV感染都會導致宮頸癌的出現。HPV按照其致病力可分為高危和低危兩種類型。其中，高危HPV大多會導致宮頸癌，而低危HPV導致的一些感染大多屬于“一過性”，會導致扁平濕疣等[3]。

3.2 人乳頭狀瘤病毒DNA和白細胞介素17應用于宮頸病變的檢測

IL-17是一種前炎癥細胞因子，它是由Th17細胞高水平分泌，和其他一些細胞亞群，例如Th1、Th2還有Treg存在較大的差異[4]。研究發現，IL-17會誘發涉于炎癥相關的多種趨化因子和細胞因子的產生，因此具有較強的促炎作用，和人體很多炎癥性疾病以及自身免疫疾病之間存在較為密切的關系。

本研究中選擇了60例宮頸病變患者進行研究，檢測其HPV-DNA、IL-17含量，研究結果顯示，IL-17在HPV陽性患者以及宮頸癌患者中的表達顯著高于HPV陰性組(P<0.05)，提示IL-17的高表達可能參與了宮頸癌的發生和發展。分析原因，一方面是因為IL-17 可以促腫瘤血管的生成；另一方面，IL-17并不直接促進血管內皮細胞的生長，但會對血管內皮細胞的遷移產生促進作用，從而使得由成纖維細胞或腫瘤細胞生成的前血管生成因子表達明顯上調。另外，IL-17還可以對腫瘤細胞表達IL-6產生較強的刺激，從而誘導巨噬細胞募集，并對腫瘤細胞表型進行調節，促使其生長快速一致[5]。有學者報道IL-17具有促腫瘤血管生成的作用有關，也與IL-17雖然不直接促進血管內皮細胞生長，但可促進血管內皮細胞的遷移，明顯上調由成纖維細胞或腫瘤細胞生成的前血管生成因子表達和IL-17通過刺激腫瘤細胞表達IL-6，誘導巨噬細胞募集及調節腫瘤細胞表型，使其生長快速[6]，這與與本研究結果IL-17在宮頸癌組和HPV陽性組表達增高一致，提示IL-17的高表達參與了宮頸癌的發生發展過程，其在宮頸癌的診斷、治療及預后判斷方面具有一定的價值。

綜上所述，IL-17和宮頸癌的發生發展有一定的相關性，對宮頸病變患者應進行高危HPV聯合IL-17水平檢測，以提供宮頸癌在早診斷率。

[1]張哲雄,徐承來,曹永濤,等.高危型人乳頭狀病毒和IL-17在宮頸病變患者宮頸脫落細胞中表達的相關性和臨床意義[J].中國實驗診斷學,2012,16(2):252-254.

[2]Salih M M,Sail M E,Hart K,elal.Genotypes of human papilloma virus in Sudanese women with cervical pathology[J].Infect Agent Cancer,2010,5:26.

[3]康慧杰,王金桃,高晨菲,等.DNA甲基轉移酶1與甲基-CpG-結合蛋白2異常表達在宮頸病變中的作用及相互關系[J].中華流行病學雜志,2013,34(12):1223-1227.

[4]蘇艷霞.北京密云地區婦女宮頸病變與人乳頭瘤病毒感染相關性研究[J].中國婦幼健康研究,2012,23(2):232-234.

[5]唐艷,張靜,房春玉,等.豐臺區已婚婦女宮頸病變與HPV感染的分析[J].中國婦幼健康研究,2011,22(4):418-419,422.

[6]Dogan N U, Salman M C, Yuce K.The role of HPV DNA testing in the follow-up of cervical intraepithelial neoplasia after loop electrosurgical excision procedure[J].Arch Gynecol Obstet,2011,283(4):871-877.

[專業責任編輯：安瑞芳]

Clinical significance of detecting HPV-DNA and IL-17 in patients with cervical lesion and their correlation

ZHOU Hui, CHEN Xiao-lan

(DepartmentofLaboratory,MaternalandChildHealthHospitalofKechengDistrictinQuzhouCity,ZhejiangQuzhou324000,China)

Objective To explore the clinical significance of human papilloma virus DNA (HPV-DNA) and interleukin 17 (IL-17) detecting among patients with cervical lesions and their correlation. Methods Sixty cases of cervical lesions were selected from the patients admitted in Maternal and Child Health Hospital of Kecheng District in Quzhou City from May 2011 to May 2013, and HPV-DNA and IL-17 contents of them were detected. Results HPV was negative in 41.67% of patients (25/60), HPV was positive in 30.00% (18/60), and the rest were cases of cervical cancer. There was no significant difference in percentage (χ2=12.21,P>0.05). IL-17 level of HPV positive group and that of cervical cancer group was significantly lower than that of HPV negative group (tvalue was 8.11 and 11.13, respectively, bothP<0.05), but there was no significant difference in the level of IL-17 between HPV positive group and cervical cancer group (t=2.15,P>0.05).Conclusion There is certain correlation between IL-17 level and the development of cervical cancer. Detecting of high risk HPV combined with IL-17 level could be done actively at diagnosis, treatment and prognosis judgment of cervical cancer.

cervical lesions; humna panillmoa virus DNA (HPV-DNA); interleukin 17 (IL-17); correlation

2014-03-18

周輝(1982-)，女，檢驗師，主要從事臨床檢驗研究。

陳小蘭，副主任醫師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.04.073

R711.7

A

1673-5293(2015)04-0861-02