禽流感H5亞型二價滅活苗免疫效果的試驗報告

陳培華 梁永曄（江蘇省寶應縣畜牧獸醫站 225800）

禽流感H5亞型二價滅活苗免疫效果的試驗報告

陳培華 梁永曄（江蘇省寶應縣畜牧獸醫站 225800）

為驗證重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）對蛋雞群的安全性和免疫效果，通過注射3家蛋雞場32400只蛋雞，注射疫苗后連續2周觀察雞只的精神狀態、采食量、糞便及雞群死亡率，均未發生異常情況，與注射之前無明顯差異。表明在雞場試驗條件下，重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）安全性高、副反應小，免疫效果相對較好。

禽流感;Re-6株+Re-7株;田間試驗;免疫效果;觀察

高致病性禽流感是嚴重危害蛋雞生產健康發展主要疾病之一。免疫是防治高致病性禽流感最重要、最有效的手段，并且也取得了很好的防治效果。但是由于近年來，禽流感病毒變異的速度不斷加快，防治高致病性禽流感工作面臨著極大的挑戰。要做好高致病性禽流感的免疫工作，就必須及時掌握流行毒株情況，并及時應用針對性的疫苗。為了驗證重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）對蛋雞的安全性和免疫效果，2014年7～10月，筆者在3家蛋雞場開展了重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）的免疫試驗。試驗結果證明，重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）的免疫效果很好。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗雞群

用于試驗觀察疫苗免疫安全性和免疫效果測定的3個雞群為寶應庭余有機農業產銷合作社、寶應縣興旺禽業專業合作社、寶應縣馬莊養雞場的40日齡京紅蛋雞群，第1雞群11200只、第2雞群10200只、第3雞群11000只，雞群健康、生長良好，均為重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）非免疫雞群。

1.1.2 檢測試劑

重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株），由乾元浩生物股份鄭州生物藥廠提供，批準文號：獸藥生字（2014）160132228，批號：2014068；禽流感病毒H5亞型HI抗原，血凝效價≥7log2，批號：2013002，哈爾濱維科生物技術開發公司生產；SPF雞感染禽流感H5亞型高免血清，HI≥7log2，批號：2013001，哈爾濱維科生物技術開發公司生產。

1.1.3 主要試劑

0.01mol/L的PBS液（pH7.2）、生理鹽水、1%紅細胞懸液現用現配。

1.2 方法

1.2.1 疫苗接種

將試驗用疫苗恢復到常溫后，雞頸部皮下注射，每只0.5ml，免疫1次。

1.2.2 采血

第1、2、3群疫苗免疫之前及免疫后15、25、35、45、55、65d各采血1次。翅下靜脈采血，1～2ml/只，分離血清，冷藏或冷凍備用。

1.2.3 抗體效價測定

按照《高致病性禽流感免疫技術規范》（NYT769-2004）[2]血凝抑制（HI）試驗操作進行，HI效價≥4log2判定為陽性，HI效價＜4log2判定為陰性，以陽性數占檢測數的比例計算抗體合格率。

2 試驗結果

2.1 安全性試驗結果

經注射疫苗后，連續觀察2周，雞的精神狀態、采食量、糞便，以及雞群的死亡率，按照說明注射劑量注射的3個雞群均無異常情況發生，疫苗對蛋雞雛雞群免疫都是安全的，而且疫苗引起的副反應較小。

2.2 母源抗體測定結果

經對3群京紅蛋雞在重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）免疫前采血進行抗體檢測，結果顯示禽流感抗體合格率均為0，表明3個雞群為重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）非免疫雞群，而且無母源抗體。

2.3 免疫效果測定結果

通過對3個雞群疫苗注射前后采血進行抗體測定，發現疫苗免疫前禽流感抗體合格率為0，第1群疫苗免疫后第15、25、35、45、55、65d的免疫抗體合格率分別為20.83%、51.67%、87.5%、95.83%、99.16%、88.33%，平均抗體滴度分別為 2.01log2、3.52log2、5.35log2、6.75log2、8.02log2、5.3log2； 第2群疫苗免疫后15、 25、35、45、 55、65d的免疫抗體合格率分別為20%、60%、90.83%、98.33%、100%、90.83%，平均抗體滴度分別為2.22log2、4.64log2、6.45log2、7.05log2、7.92log2、6.24log2；第3群疫苗免疫后15、25、35、45、55、65d的免疫抗體合格率分別為23.33%、58.33%、91.67%、100%、100%、92.5%，平均抗體滴 度 分 別 為 2.41log2、 4.14log2、 6.25log2、 7.33log2、7.58log2、6.11log2。免疫后35d抗體合格率分別為87.5%、90.83%、91.67%，平均為90%，監測到免疫后65d，抗體合格率仍分別為88.33%、90.83%、92.5%，平均為90.55%，從免疫后35d起至65d，兩期試驗的抗體合格率均超過農業部重大動物疫病強制免疫抗體合格率應保持在80%以上的要求。免疫后65d的抗體滴度仍分別為5.30log2、6.24log2、6.11log2，說明疫苗免疫后抗體滴度上升快，維持時間長，并且在蛋雞養殖中，40日齡時使用該疫苗免疫，120日齡再次免疫該疫苗，以后，每4～6個月肌注1次。

3 結論與討論

本次免疫試驗的3個雞群共32400只，均未出現免疫副反應，說明重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）安全性高、副反應小，在寶應縣基層推廣具有可行性。本次試驗由于時間關系，僅對免疫1次的小范圍雞群進行免疫效果測定，要更全面、更準確判定該疫苗的免疫效果，筆者將對這3家雞群在120日齡再次免疫和每4～6個月免疫1次后及時采集血樣進行更多次檢測，同時進行更多批次疫苗和試驗雞重復試驗，得出更全面、更科學、更能指導防疫工作的結論。

江蘇省農業三新工程（SXGC[2014]213）。