液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥復(fù)方研究中的應(yīng)用

王瑩杜靜

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液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥復(fù)方研究中的應(yīng)用

王瑩杜靜

液質(zhì)聯(lián)用；中藥復(fù)方；應(yīng)用進(jìn)展

中藥復(fù)方包含中醫(yī)藥醫(yī)理、思辨和配伍規(guī)律，是中醫(yī)臨床用藥的精髓。中藥復(fù)方臨床療效來源于其內(nèi)在物質(zhì)基礎(chǔ)，研究中藥復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，可以進(jìn)一步闡釋中醫(yī)藥理論，明確中藥復(fù)方的配伍規(guī)律和作用機(jī)制。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)不僅擁有液相色譜的優(yōu)越分離能力和檢測靈敏度，還擁有質(zhì)譜的高選擇性和強(qiáng)大的定性專屬性，被廣泛應(yīng)用于中藥復(fù)方成分的結(jié)構(gòu)鑒定、含量測定及體內(nèi)代謝等諸多方面。本文對(duì)液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥復(fù)方研究中的應(yīng)用進(jìn)行綜述。

1 液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥復(fù)方結(jié)構(gòu)鑒定中的應(yīng)用

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)具有強(qiáng)大的分離能力和結(jié)構(gòu)鑒定特點(diǎn)，通過對(duì)已知同類化合物的質(zhì)譜裂解規(guī)律以及未知化合物質(zhì)譜信息的分析，再參考未知成分的保留時(shí)間、紫外光譜等信息，可實(shí)現(xiàn)對(duì)未知化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行合理推測[1-2]。汪祺等[3]采用LC-MS聯(lián)用儀通過比較五味子中間體及8家企業(yè)生產(chǎn)的生脈注射液樣品發(fā)現(xiàn)，五味子中間體的主要成分為木脂素類，并建立生脈注射液中木脂素類成分的分析方法。Wang等[4]運(yùn)用LC-ESI-MSn根據(jù)相對(duì)分子量信息和多級(jí)質(zhì)譜碎片信息從復(fù)方龍膽瀉肝湯中分離鑒定了51個(gè)黃酮類化合物，并對(duì)主要成分的質(zhì)譜裂解行為進(jìn)行了研究。Zheng等[5]運(yùn)用UPLC-ESI-QTOF-MS從中藥復(fù)方溫脾湯中鑒定出59個(gè)化合物，這些化合物主要為酚類、三萜皂苷、生物堿和黃酮苷四大類化合物。張靖等[6]采用UPLC-LTQ-MS定性分析方法比較了復(fù)方三芪口服液與黃芪及三七單味藥質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫，對(duì)組方質(zhì)譜圖中39個(gè)主要成分峰進(jìn)行了快速鑒別，為該組方活性成分的體內(nèi)外快速分析研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

2 液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥復(fù)方含量測定分析中的應(yīng)用

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)高靈敏度、高選擇性的優(yōu)點(diǎn)非常適合對(duì)中藥復(fù)方中化學(xué)成分進(jìn)行定量分析。中藥復(fù)方的定量分析多采用液相與單重四級(jí)桿（LC/MS）或液相與三重四級(jí)桿（LC/MS/MS）聯(lián)用技術(shù)，通過選擇離子檢測（SIM）、選擇反應(yīng)監(jiān)測（SRM）或多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）等模式同時(shí)定量測定多種化學(xué)成分[1-2]。Chang等[7]建立了一種能快速準(zhǔn)確同時(shí)定量測定中藥復(fù)方生脈散中包括人參中的皂苷及五味子中的木脂素成分的8個(gè)活性成分的HPLC-MS分析方法，該法簡單、靈敏、準(zhǔn)確、快速，有利于進(jìn)一步完善復(fù)方生脈散質(zhì)量控制研究。Wang等[8]對(duì)葛根芩連片中的葛根素、鹽酸小檗堿和黃芩苷三種化學(xué)成分進(jìn)行了含量測定，建立了一種簡單快速、重復(fù)性好的UPLC-ESIMS（SIM）方法。張藝竹等[9]采用液相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)中藥復(fù)方制劑參甘冠心合劑中異甘草苷、毛蕊花糖苷、芍藥苷、阿魏酸等11種有效成分同時(shí)定量測定，為該方劑療效物質(zhì)基礎(chǔ)的確定提供了科學(xué)依據(jù)。

3 液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥復(fù)方藥物代謝研究中的應(yīng)用

中藥復(fù)方有效成分復(fù)雜，真正產(chǎn)生藥理作用的可能是單個(gè)組分，也可能是多個(gè)組分，或者是各組分相互作用產(chǎn)生的新物質(zhì)，利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，不僅可以避免復(fù)雜、煩瑣、耗時(shí)的分離純化樣品工作，而且能分離鑒定過去難以檢測到的痕量藥物代謝產(chǎn)物。由于藥物的代謝產(chǎn)物往往保持著原藥的母核結(jié)構(gòu)，因此原藥與其代謝產(chǎn)物具有相似的質(zhì)譜碎裂過程和特征碎片離子，可以據(jù)此來推斷代謝物的結(jié)構(gòu)[10]。因此，液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥復(fù)方藥物代謝研究方面具有廣闊的前景。Deng等[11]研究大鼠灌服清火通竅片后血漿中的化學(xué)成分，并建立同時(shí)定量測定血漿中三七皂苷R1、人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1及淫羊藿苷五種成分的分析方法；Wang等[12]建立了一種UPLC/Q-TOF-MS/MS方法，大鼠在灌服茵陳蒿湯后，血漿中檢測到21個(gè)色譜峰，經(jīng)過鑒定推測其中2個(gè)為代謝產(chǎn)物；左冉等[13]采用LC-ICR-MS法深入研究黃連解毒湯體內(nèi)發(fā)揮藥效的作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，通過與黃連解毒湯提取物和混合對(duì)照品的保留時(shí)間和高分辨質(zhì)譜信號(hào)比較分析，在血漿樣品中共發(fā)現(xiàn)38個(gè)入血成分，包括22個(gè)原形成分和16個(gè)代謝產(chǎn)物，結(jié)果表明，黃連解毒湯主要成分的代謝產(chǎn)物在大鼠體內(nèi)多以硫酸化和葡糖醛酸等二相代謝產(chǎn)物形式存在。Xu等[14]通過LC-ESI-MS方法，驗(yàn)證該法能應(yīng)用于大鼠灌服大承氣湯后大鼠血漿中5種化學(xué)成分的藥代動(dòng)力學(xué)研究；辛楊等[15]利用超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)法，定性分析大鼠灌服“甘草附子湯”和“術(shù)附湯”后血漿中的次烏頭堿，結(jié)果表明，“甘草附子湯”和“術(shù)附湯”中次烏頭堿體內(nèi)吸收程度不同，兩復(fù)方功效差異可能來源于次烏頭堿在體內(nèi)吸收程度的不同。王佩瑤等[16]利用LCTOF-MS測定雙龍方（人參、丹參）中10種原形成分和一種代謝物在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，結(jié)果表明丹酚酸與人參皂苷有協(xié)同作用，臨床上使用雙龍方時(shí)，每隔8h服用1次即可維持所需藥效濃度。

4 小結(jié)

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)將高效液相超強(qiáng)的分離能力和質(zhì)譜的高靈敏度和專屬特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)融合在一起，有效解決了中藥及復(fù)方成分復(fù)雜、內(nèi)源性雜質(zhì)較多、且活性成分及代謝物在生物樣品中濃度較低等問題，已成為中藥各類成分分析的重要手段，為中藥及中藥復(fù)方的體內(nèi)過程研究和代謝產(chǎn)物的分析奠定了基礎(chǔ)。

［1］鐘敬華.基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的腦得生片和胃復(fù)春片物質(zhì)基礎(chǔ)辨識(shí)方法研究［D］.浙江大學(xué)學(xué)位論文，2010.

［2］張玉峰.基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的中藥化學(xué)成分鑒定方法學(xué)研究［D］.浙江大學(xué)學(xué)位論文，2008.

［3］汪祺，劉燕，鄭笑為，等.生脈注射液中木脂素類化學(xué)成分的分析研究［J］.中國藥學(xué)雜志，2013，48（2）：132-135.

［4］Wang Y，Yang L，He YQ，et al.Characterization of fifty-one flavonoids in a Chinese herbal prescription Longdan Xiegan Decoction by high-performance liquid chromatography coupled to electro spray ionization tandem mass spectrum try and photodiode array detection［J］.Common Mass Spectrum，2008，22（12）：1767-1778.

［5］Zheng X，Shi P，Cheng Y，et al.Rapid analysis of a Chinese herbal prescription by liquid chromatography-time-of-flight tandem mass spectrometry［J］.Journal of Chromatography A，2008，1206（2）：140-146.

［6］張靖，丘小惠，徐文，等.基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的復(fù)方三芪口服液化學(xué)成分特征圖譜研究［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2013，28（5）：1572-1573.

［7］Chang YW，Yao HT，Chien DS，et al.High-Performance liquid chromatography-electro spray mass spectrometry for the simultaneous determination of multiple active components in Shen-Mai San，a prescription of traditional Chinese medicine［J］.Phyto chem Anal，2008，19（3）：258-265.

［8］Wang Y，An R，You LS，et al.UPLC-MS analysis for simultaneous determination of eight components in the Ge-Gen-Qin-Lian’tablets［J］.Chromatographic，2009，69（9-10）：969-975.

［9］張藝竹，顧青青，安叡，等.高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用快速測定參甘冠心合劑中毛蕊花糖苷、黨參炔苷等11種有效成分［J］.中國藥學(xué)雜志，2013，48（17）：1288-1291.

［10］鄭運(yùn)亮.烏藥、錦燈籠藥效物質(zhì)及質(zhì)量評(píng)價(jià)和相關(guān)藥代動(dòng)力學(xué)研究［D］.浙江大學(xué)學(xué)位論文，2012.

［11］Deng GF，Wang DL，Meng MX，etal.Simultaneous de termination of notoginsenoside R1，ginsenoside Rg1，Re，Rb1 and icariin in rat plasma by ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry［J］.Journalof Chromatography B，2009，877（22）：2113-2122.

［12］Wang XJ，Sun WJ，Sun H，etal.Analysis of the constituents in the rat plasma after oral administration of Yin Chen Hao Tang by UPLC/Q-TOF-MS/MS［J］.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2008，46（3）：477-490.

［13］左冉，王宏潔，司南，等.LC-IRC-MS方法鑒定黃連解毒湯在大鼠血漿中的原形及代謝產(chǎn)物研究［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2014，49（2）：237-243.

［14］Xu F，Liu Y，Zhang Z，et al.Rapid simultaneous quantification of five active constituents in rat plasma by high performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry after oral administration of Da-Cheng-Qi decoction［J］. Pharm Biomed Anal，2008，47（3）：586-595.

［15］辛楊，皮子鳳，宋鳳瑞，等.超高效液相色譜-質(zhì)譜法比較黑順片單煎液及其復(fù)方煎煮液中次烏頭堿在大鼠體內(nèi)的吸收［J］.色譜，2011，29（5）：389-393.

［16］王佩瑤，陳曦，孟憲生，等.基于UPLC-TOF-MS的雙龍方大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究［J］.中成藥，2011，33（11）：1889-1895.

（收稿：2015-01-23 修回：2015-03-10）

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