九龍蟲對老年大鼠心肝自由基的影響

楊家林+潘朝旺

【摘 要】 目的：觀察九龍蟲對自然衰老大鼠心臟和肝臟自由基的影響。方法：18月齡Wistar大鼠隨機(jī)分為老年對照組、九龍蟲高、中、低劑量組，4月齡大鼠為青年對照組。給藥42天后，生化方法檢測各組大鼠心臟和肝臟組織SOD、GSH-PX活力及MDA含量。結(jié)果：與青年組比較，老年對照組大鼠心臟和肝臟MDA含量顯著升高，SOD、GSH-PX活力明顯下降，九龍蟲各劑量組均能提高大鼠心臟和肝臟SOD、GSH-PX活力，降低MDA含量。結(jié)論：九龍蟲抗衰老作用可能與提高心臟和肝臟抗氧化能力有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 九龍蟲；衰老；心臟；肝臟；自由基

【中圖分類號】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2014）06-0023-02

衰老作為一種自然現(xiàn)象，與體內(nèi)氧自由基的含量密切相關(guān)。九龍蟲，別名“洋蟲”，在《本草綱目拾遺》和《中藥大辭典》均有記載，對多種疾病有良效。在民間，九龍蟲被廣泛用著抗衰老保健食品，本實(shí)驗(yàn)旨在研究九龍蟲對自然衰老大鼠心臟和肝臟中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）和丙二醛（MDA）的影響，為九龍蟲應(yīng)用于抗衰老提供理論依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 動物 Wistar大鼠，清潔級，18月齡40只，體重500±50g，3月齡10只，體重280±20g，雌雄各半，由三峽大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號：SCXK（鄂）2011-0012。

1.2 藥品與試劑 九龍蟲散（自制），用前配成混懸液；丙二醛（MDA）試劑盒（20130328）；超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒（20130617）；考馬斯亮藍(lán)試劑盒（20130408）；谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）試劑盒（20130524），南京建成生物工程研究所。

1.3 儀器 高速離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器公司；UV754紫外可見分光光度計(jì)，上海佑科儀器儀表有限公司。

2 方法

2.1 動物分組及給藥 將18月齡大鼠隨機(jī)分為4組，每組10只，即老年對照組、九龍蟲高劑量組、九龍蟲中劑量、九龍蟲低劑量；3月齡大鼠為青年對照組。給藥，九龍蟲高、中、低劑量組灌胃給予九龍蟲混懸液0.028、0.014、0.007g/kg·d，老年對照組和青年對照組給予生理鹽水15ml/kg·d，連續(xù)42天。末次給藥24h后，各組動物均給予10%水合氯醛（0.35ml/100g）腹腔注射麻醉，迅速打開胸腔取出心臟、打開腹腔取出肝臟，進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)檢測。

2.2 大鼠心臟SOD、GSH-PX活力及MDA含量 取心臟左心室，稱重，加9倍重量生理鹽水制備勻漿，按試劑盒說明進(jìn)行SOD、GSH-PX活力和MDA含量的測定。

2.3 大鼠肝臟SOD、GSH-PX活力及MDA含量 取肝臟右側(cè)葉，稱重，加9倍重量生理鹽水制備勻漿，檢測方法同心臟。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)用spss17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，各實(shí)驗(yàn)組數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，用t檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 對衰老大鼠心臟SOD、GSH-PX活力和MDA含量的影響 與青年對照組比較，老年對照組心臟SOD、GSH-PX活力降低，而MDA含量升高，差異顯著；與老年對照組比較，九龍蟲各劑量組SOD、GSH-PX活力升高，MDA含量降低，差異顯著。見表1。

3.1 對衰老大鼠肝臟SOD、GSH-PX活力和MDA含量的影響 與青年對照組比較，老年對照組肝臟SOD、GSH-PX活力降低，而MDA含量升高，差異顯著；與老年對照組比較，九龍蟲各劑量組SOD、GSH-PX活力升高，MDA含量降低，差異有顯著性意義。見表2。

4 討論

自由基學(xué)說是目前公認(rèn)的衰老機(jī)制之一，而機(jī)體自由基產(chǎn)生的途徑有內(nèi)內(nèi)源性和外源性兩個(gè)方面，另一方面，機(jī)體內(nèi)又具有清除自由基的系統(tǒng)，使自由基在體內(nèi)維持正常水平。研究表明，隨年齡的增長，機(jī)體清除自由基的能力下降，導(dǎo)致自由基蓄積[1]。過量自由基不但可以氧化細(xì)胞膜，還可以氧化酶類、蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子，使細(xì)胞膜上脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)，生物酶活力下降，蛋白質(zhì)和核酸分子交聯(lián)，導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)改變、功能發(fā)生障礙，最終導(dǎo)致機(jī)體衰老、死亡[2]。

抗氧化劑和抗氧化酶類組成機(jī)體抗氧化系統(tǒng)。體內(nèi)抗氧化酶類的主要成分是SOD和GSH-PX。SOD是目前發(fā)現(xiàn)唯一以自由基為底物的酶，在各種生物體內(nèi)廣泛分布，是機(jī)體內(nèi)對抗自由基的第一道防線[3]，它與GSH-PX協(xié)同作用減少脂質(zhì)過氧化，減輕其代謝產(chǎn)物對機(jī)體的損害；。研究表明，衰老動物體內(nèi)SOD活力明顯低于青年動物[4-5]。GSH-PX是一種含硒的水溶性四聚體蛋白酶，對由羥自由基和活性氧誘發(fā)的過氧化脂質(zhì)及過氧化氫有極強(qiáng)的清除能力，從而減輕自由基對機(jī)體細(xì)胞的損害。研究表明，隨年齡的增加，體內(nèi)自由基也會隨之增多，而GSH-PX的活性逐漸降低，因此可作為機(jī)體衰老的又一個(gè)重要評價(jià)指標(biāo)[6]。MDA是自由基損傷生物膜過氧化分解產(chǎn)物，間接地反映了自由基攻擊機(jī)體細(xì)胞的嚴(yán)重程度，因此是老化的重要指標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，九龍蟲可以提高自然衰老大鼠心臟和肝臟組織SOD、GSH-PX活力，降低MDA含量，是其可能的抗衰老機(jī)制之一。

參考文獻(xiàn)

[1] Finkel T，Holbrook N J.Oxidants，oxidative stress and the biology of aging[J].Nature，2000，408（6809）：239.

[2] 王迪潯，金惠銘.人體病理生理學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：11.

[3] 劉奇，劉雪平.抗衰老學(xué)[M].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，2006：16.

[4]李應(yīng)東，王博雯，周倩倩，等.當(dāng)歸紅芪超濾物對自然衰老大鼠抗氧化作用機(jī)制的研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2012，23（6）：1439-1441.

[5]段亞平，李媛，李姝臻.鐵筷子總黃酮對D-半乳糖致衰小鼠的抗衰老作用研究[J].華西藥學(xué)雜志，2013，28（5）：458-460.

[6] Sairam RK，Singh DV，Srivaatava GC.Changes in activities of antioxidant enzymes in sunflower leaves of different age[J].Biol Plant，2003，47（1）：61.

【摘 要】 目的：觀察九龍蟲對自然衰老大鼠心臟和肝臟自由基的影響。方法：18月齡Wistar大鼠隨機(jī)分為老年對照組、九龍蟲高、中、低劑量組，4月齡大鼠為青年對照組。給藥42天后，生化方法檢測各組大鼠心臟和肝臟組織SOD、GSH-PX活力及MDA含量。結(jié)果：與青年組比較，老年對照組大鼠心臟和肝臟MDA含量顯著升高，SOD、GSH-PX活力明顯下降，九龍蟲各劑量組均能提高大鼠心臟和肝臟SOD、GSH-PX活力，降低MDA含量。結(jié)論：九龍蟲抗衰老作用可能與提高心臟和肝臟抗氧化能力有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 九龍蟲；衰老；心臟；肝臟；自由基

【中圖分類號】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2014）06-0023-02

衰老作為一種自然現(xiàn)象，與體內(nèi)氧自由基的含量密切相關(guān)。九龍蟲，別名“洋蟲”，在《本草綱目拾遺》和《中藥大辭典》均有記載，對多種疾病有良效。在民間，九龍蟲被廣泛用著抗衰老保健食品，本實(shí)驗(yàn)旨在研究九龍蟲對自然衰老大鼠心臟和肝臟中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）和丙二醛（MDA）的影響，為九龍蟲應(yīng)用于抗衰老提供理論依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 動物 Wistar大鼠，清潔級，18月齡40只，體重500±50g，3月齡10只，體重280±20g，雌雄各半，由三峽大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號：SCXK（鄂）2011-0012。

1.2 藥品與試劑 九龍蟲散（自制），用前配成混懸液；丙二醛（MDA）試劑盒（20130328）；超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒（20130617）；考馬斯亮藍(lán)試劑盒（20130408）；谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）試劑盒（20130524），南京建成生物工程研究所。

1.3 儀器 高速離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器公司；UV754紫外可見分光光度計(jì)，上海佑科儀器儀表有限公司。

2 方法

2.1 動物分組及給藥 將18月齡大鼠隨機(jī)分為4組，每組10只，即老年對照組、九龍蟲高劑量組、九龍蟲中劑量、九龍蟲低劑量；3月齡大鼠為青年對照組。給藥，九龍蟲高、中、低劑量組灌胃給予九龍蟲混懸液0.028、0.014、0.007g/kg·d，老年對照組和青年對照組給予生理鹽水15ml/kg·d，連續(xù)42天。末次給藥24h后，各組動物均給予10%水合氯醛（0.35ml/100g）腹腔注射麻醉，迅速打開胸腔取出心臟、打開腹腔取出肝臟，進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)檢測。

2.2 大鼠心臟SOD、GSH-PX活力及MDA含量 取心臟左心室，稱重，加9倍重量生理鹽水制備勻漿，按試劑盒說明進(jìn)行SOD、GSH-PX活力和MDA含量的測定。

2.3 大鼠肝臟SOD、GSH-PX活力及MDA含量 取肝臟右側(cè)葉，稱重，加9倍重量生理鹽水制備勻漿，檢測方法同心臟。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)用spss17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，各實(shí)驗(yàn)組數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，用t檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 對衰老大鼠心臟SOD、GSH-PX活力和MDA含量的影響 與青年對照組比較，老年對照組心臟SOD、GSH-PX活力降低，而MDA含量升高，差異顯著；與老年對照組比較，九龍蟲各劑量組SOD、GSH-PX活力升高，MDA含量降低，差異顯著。見表1。

3.1 對衰老大鼠肝臟SOD、GSH-PX活力和MDA含量的影響 與青年對照組比較，老年對照組肝臟SOD、GSH-PX活力降低，而MDA含量升高，差異顯著；與老年對照組比較，九龍蟲各劑量組SOD、GSH-PX活力升高，MDA含量降低，差異有顯著性意義。見表2。

4 討論

自由基學(xué)說是目前公認(rèn)的衰老機(jī)制之一，而機(jī)體自由基產(chǎn)生的途徑有內(nèi)內(nèi)源性和外源性兩個(gè)方面，另一方面，機(jī)體內(nèi)又具有清除自由基的系統(tǒng)，使自由基在體內(nèi)維持正常水平。研究表明，隨年齡的增長，機(jī)體清除自由基的能力下降，導(dǎo)致自由基蓄積[1]。過量自由基不但可以氧化細(xì)胞膜，還可以氧化酶類、蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子，使細(xì)胞膜上脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)，生物酶活力下降，蛋白質(zhì)和核酸分子交聯(lián)，導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)改變、功能發(fā)生障礙，最終導(dǎo)致機(jī)體衰老、死亡[2]。

抗氧化劑和抗氧化酶類組成機(jī)體抗氧化系統(tǒng)。體內(nèi)抗氧化酶類的主要成分是SOD和GSH-PX。SOD是目前發(fā)現(xiàn)唯一以自由基為底物的酶，在各種生物體內(nèi)廣泛分布，是機(jī)體內(nèi)對抗自由基的第一道防線[3]，它與GSH-PX協(xié)同作用減少脂質(zhì)過氧化，減輕其代謝產(chǎn)物對機(jī)體的損害；。研究表明，衰老動物體內(nèi)SOD活力明顯低于青年動物[4-5]。GSH-PX是一種含硒的水溶性四聚體蛋白酶，對由羥自由基和活性氧誘發(fā)的過氧化脂質(zhì)及過氧化氫有極強(qiáng)的清除能力，從而減輕自由基對機(jī)體細(xì)胞的損害。研究表明，隨年齡的增加，體內(nèi)自由基也會隨之增多，而GSH-PX的活性逐漸降低，因此可作為機(jī)體衰老的又一個(gè)重要評價(jià)指標(biāo)[6]。MDA是自由基損傷生物膜過氧化分解產(chǎn)物，間接地反映了自由基攻擊機(jī)體細(xì)胞的嚴(yán)重程度，因此是老化的重要指標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，九龍蟲可以提高自然衰老大鼠心臟和肝臟組織SOD、GSH-PX活力，降低MDA含量，是其可能的抗衰老機(jī)制之一。

參考文獻(xiàn)

[1] Finkel T，Holbrook N J.Oxidants，oxidative stress and the biology of aging[J].Nature，2000，408（6809）：239.

[2] 王迪潯，金惠銘.人體病理生理學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：11.

[3] 劉奇，劉雪平.抗衰老學(xué)[M].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，2006：16.

[4]李應(yīng)東，王博雯，周倩倩，等.當(dāng)歸紅芪超濾物對自然衰老大鼠抗氧化作用機(jī)制的研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2012，23（6）：1439-1441.

[5]段亞平，李媛，李姝臻.鐵筷子總黃酮對D-半乳糖致衰小鼠的抗衰老作用研究[J].華西藥學(xué)雜志，2013，28（5）：458-460.

[6] Sairam RK，Singh DV，Srivaatava GC.Changes in activities of antioxidant enzymes in sunflower leaves of different age[J].Biol Plant，2003，47（1）：61.

【摘 要】 目的：觀察九龍蟲對自然衰老大鼠心臟和肝臟自由基的影響。方法：18月齡Wistar大鼠隨機(jī)分為老年對照組、九龍蟲高、中、低劑量組，4月齡大鼠為青年對照組。給藥42天后，生化方法檢測各組大鼠心臟和肝臟組織SOD、GSH-PX活力及MDA含量。結(jié)果：與青年組比較，老年對照組大鼠心臟和肝臟MDA含量顯著升高，SOD、GSH-PX活力明顯下降，九龍蟲各劑量組均能提高大鼠心臟和肝臟SOD、GSH-PX活力，降低MDA含量。結(jié)論：九龍蟲抗衰老作用可能與提高心臟和肝臟抗氧化能力有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 九龍蟲；衰老；心臟；肝臟；自由基

【中圖分類號】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2014）06-0023-02

衰老作為一種自然現(xiàn)象，與體內(nèi)氧自由基的含量密切相關(guān)。九龍蟲，別名“洋蟲”，在《本草綱目拾遺》和《中藥大辭典》均有記載，對多種疾病有良效。在民間，九龍蟲被廣泛用著抗衰老保健食品，本實(shí)驗(yàn)旨在研究九龍蟲對自然衰老大鼠心臟和肝臟中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）和丙二醛（MDA）的影響，為九龍蟲應(yīng)用于抗衰老提供理論依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 動物 Wistar大鼠，清潔級，18月齡40只，體重500±50g，3月齡10只，體重280±20g，雌雄各半，由三峽大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號：SCXK（鄂）2011-0012。

1.2 藥品與試劑 九龍蟲散（自制），用前配成混懸液；丙二醛（MDA）試劑盒（20130328）；超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒（20130617）；考馬斯亮藍(lán)試劑盒（20130408）；谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）試劑盒（20130524），南京建成生物工程研究所。

1.3 儀器 高速離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器公司；UV754紫外可見分光光度計(jì)，上海佑科儀器儀表有限公司。

2 方法

2.1 動物分組及給藥 將18月齡大鼠隨機(jī)分為4組，每組10只，即老年對照組、九龍蟲高劑量組、九龍蟲中劑量、九龍蟲低劑量；3月齡大鼠為青年對照組。給藥，九龍蟲高、中、低劑量組灌胃給予九龍蟲混懸液0.028、0.014、0.007g/kg·d，老年對照組和青年對照組給予生理鹽水15ml/kg·d，連續(xù)42天。末次給藥24h后，各組動物均給予10%水合氯醛（0.35ml/100g）腹腔注射麻醉，迅速打開胸腔取出心臟、打開腹腔取出肝臟，進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)檢測。

2.2 大鼠心臟SOD、GSH-PX活力及MDA含量 取心臟左心室，稱重，加9倍重量生理鹽水制備勻漿，按試劑盒說明進(jìn)行SOD、GSH-PX活力和MDA含量的測定。

2.3 大鼠肝臟SOD、GSH-PX活力及MDA含量 取肝臟右側(cè)葉，稱重，加9倍重量生理鹽水制備勻漿，檢測方法同心臟。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)用spss17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，各實(shí)驗(yàn)組數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，用t檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 對衰老大鼠心臟SOD、GSH-PX活力和MDA含量的影響 與青年對照組比較，老年對照組心臟SOD、GSH-PX活力降低，而MDA含量升高，差異顯著；與老年對照組比較，九龍蟲各劑量組SOD、GSH-PX活力升高，MDA含量降低，差異顯著。見表1。

3.1 對衰老大鼠肝臟SOD、GSH-PX活力和MDA含量的影響 與青年對照組比較，老年對照組肝臟SOD、GSH-PX活力降低，而MDA含量升高，差異顯著；與老年對照組比較，九龍蟲各劑量組SOD、GSH-PX活力升高，MDA含量降低，差異有顯著性意義。見表2。

4 討論

自由基學(xué)說是目前公認(rèn)的衰老機(jī)制之一，而機(jī)體自由基產(chǎn)生的途徑有內(nèi)內(nèi)源性和外源性兩個(gè)方面，另一方面，機(jī)體內(nèi)又具有清除自由基的系統(tǒng)，使自由基在體內(nèi)維持正常水平。研究表明，隨年齡的增長，機(jī)體清除自由基的能力下降，導(dǎo)致自由基蓄積[1]。過量自由基不但可以氧化細(xì)胞膜，還可以氧化酶類、蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子，使細(xì)胞膜上脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)，生物酶活力下降，蛋白質(zhì)和核酸分子交聯(lián)，導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)改變、功能發(fā)生障礙，最終導(dǎo)致機(jī)體衰老、死亡[2]。

抗氧化劑和抗氧化酶類組成機(jī)體抗氧化系統(tǒng)。體內(nèi)抗氧化酶類的主要成分是SOD和GSH-PX。SOD是目前發(fā)現(xiàn)唯一以自由基為底物的酶，在各種生物體內(nèi)廣泛分布，是機(jī)體內(nèi)對抗自由基的第一道防線[3]，它與GSH-PX協(xié)同作用減少脂質(zhì)過氧化，減輕其代謝產(chǎn)物對機(jī)體的損害；。研究表明，衰老動物體內(nèi)SOD活力明顯低于青年動物[4-5]。GSH-PX是一種含硒的水溶性四聚體蛋白酶，對由羥自由基和活性氧誘發(fā)的過氧化脂質(zhì)及過氧化氫有極強(qiáng)的清除能力，從而減輕自由基對機(jī)體細(xì)胞的損害。研究表明，隨年齡的增加，體內(nèi)自由基也會隨之增多，而GSH-PX的活性逐漸降低，因此可作為機(jī)體衰老的又一個(gè)重要評價(jià)指標(biāo)[6]。MDA是自由基損傷生物膜過氧化分解產(chǎn)物，間接地反映了自由基攻擊機(jī)體細(xì)胞的嚴(yán)重程度，因此是老化的重要指標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，九龍蟲可以提高自然衰老大鼠心臟和肝臟組織SOD、GSH-PX活力，降低MDA含量，是其可能的抗衰老機(jī)制之一。

參考文獻(xiàn)

[1] Finkel T，Holbrook N J.Oxidants，oxidative stress and the biology of aging[J].Nature，2000，408（6809）：239.

[2] 王迪潯，金惠銘.人體病理生理學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：11.

[3] 劉奇，劉雪平.抗衰老學(xué)[M].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，2006：16.

[4]李應(yīng)東，王博雯，周倩倩，等.當(dāng)歸紅芪超濾物對自然衰老大鼠抗氧化作用機(jī)制的研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2012，23（6）：1439-1441.

[5]段亞平，李媛，李姝臻.鐵筷子總黃酮對D-半乳糖致衰小鼠的抗衰老作用研究[J].華西藥學(xué)雜志，2013，28（5）：458-460.

[6] Sairam RK，Singh DV，Srivaatava GC.Changes in activities of antioxidant enzymes in sunflower leaves of different age[J].Biol Plant，2003，47（1）：61.