PTTG mRNA和CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌鑒別診斷中的應用

李雅萍

PTTG mRNA和CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌鑒別診斷中的應用

李雅萍

目的 探討垂體腫瘤轉化基因（PTTG）mRNA和囊性纖維跨膜轉運調節因子（CFTR）mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌疾病中的變化及臨床意義。方法 選擇慢性胰腺炎患者20例，胰腺癌患者30例；采用實時逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）技術檢測兩組組織中PTTG mRNA和CFTR mRNA表達狀況，比較分析兩標志物的變化。結果 慢性胰腺炎組織中CFTR mRNA的表達水平明顯高于胰腺癌（P＜0.01），PTTG mRNA在慢性胰腺炎組織中的表達水平明顯低于胰腺癌（P＜0.01）。PTTG mRNA和CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌組織中的表達量具有相關性（r=-0.526、-0.539，P＜0.01）。結論 檢測PTTG mRNA表達水平可用于胰腺癌診斷，檢測CFTR mRNA表達水平可用于慢性胰腺炎診斷，且均具有較強的靈敏性。

垂體腫瘤轉化基因 囊性纖維跨膜轉運調節因子 慢性胰腺炎 胰腺癌

慢性胰腺炎及胰腺癌早期均會有腹痛黃疸等臨床癥狀，二者鑒別有一定難度。囊性纖維跨膜轉運調節因子（CFTR）是一種與慢性胰腺炎及胰腺癌相關的蛋白，國外研究發現，CFTR基因突變及多態性與慢性胰腺炎密切相關［1］。垂體腫瘤轉化基因（PTTG）是來源于垂體瘤組織中的原癌基因，PTTG的高表達能促進細胞增殖轉化，在腫瘤形成過程中起重要作用［2～4］。本文采用實時逆轉錄-聚合酶鏈反應技術（RT-PCR）檢測胰腺癌和慢性胰腺炎組織中PTTG mRNA和CFTR mRNA的表達水平，探討其相互關系及臨床意義。

1 臨床資料

1.1 一般資料 回顧性分析2005年9月至2014年9月本院收治的胰腺癌患者手術切除標本30例，男19例，女11例；年齡38～72歲，平均（53±15）歲。均為胰腺導管癌。其中高分化腺癌12例、中分化腺癌7例、低分化腺癌11例。經臨床和（或）病理證實發生胰腺外轉移者20例。另選取同期慢性胰腺炎患者手術切除標本20例，男13例，女7例；年齡35～73歲，平均（50±13）歲。懷疑胰腺癌而行手術切除的慢性胰腺炎患者16例，癌旁慢性胰腺炎組織者4例。其中伴有發熱者3例，伴有不同程度黃疸者8例，伴有脂肪肝者8例，合并門靜脈高壓者1例。各組性別、年齡比較差異無統計學意義（P＞0.05）。本項目經本院倫理委員會批準，所有對象均簽署知情同意書。

1.2 方法 （1）mRNA表達水平檢測：RT-PCR技術檢測胰腺癌和慢性胰腺炎組織中PTTG mRNA和CFTR mRNA表達狀況。（2）儀器、試劑和引物：RNA提取試劑盒由美國Invitrogen公司提供。德國Roche公司light Cycler熒光PCR儀。PCR試劑盒由上海久盛醫療用品有限公司提供。（3）細胞分離和總RNA提?。篢rizol法提取組織中總RNA，通過分光光度計檢測A260/280比值以驗證RNA純度。（4）PCR擴增：引物設計采用Primer5軟件，PTTG引物序列為：正義鏈5'-CAGGCACCCGTGTGGTTGCT-3'，反義鏈 5'-AGGCTGGTGGGGCATCGAAC-3'，產物長度116 bp。CFTR引物序列為：正義鏈5'-CGGAAAAGATGAGGTTCTTCCAG-3'，反義鏈 5'-TCTTGAACTTCTTCTTCTGTCTC-3'，產物長度116bp。內參基因為β-actin，引物序列為：正義鏈5‘-ACCATGGATGATGATATCGCC-3'，反義鏈5'-GCCTTGCACATGCCGG-3'。反應條件：95℃，10min→95℃，30 s→52℃，30 s→72℃，30 s，40個循環→72℃，10 min→4℃保存。（5）基因序列分析：采用BLAST應用軟件及Gen Bank對比分析基因序列同源性。對擴增的目的片斷進行凝膠電泳，通過紫外光凝膠成像系統進行掃描并記錄，用四維成像處理系統測定各組cDNA特異性，RNA表達量與內參基因的比值表示mRNA的相對表達量。

1.3 統計學方法 采用SPSS 18.0統計軟件。計量資料以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數資料組間比較采用χ2檢驗及Fishers精確概率法檢驗，相關性分析采用Pearson 法，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 組織PTTG mRNA和CFTR mRNA表達率比較 CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌組織中的表達率分別為50.0%（10例）和3.3%（1例）；PTTG mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌組織中的表達率分別為10.0%（2例）和63.0%（19例）。CFTR mRNA在慢性胰腺炎組織中的表達率明顯高于胰腺癌（χ2=10.15，P＜0.01），PTTG mRNA在慢性胰腺炎組織中的表達率明顯低于胰腺癌（χ2=14.01，P＜0.01）。

2.2 組織PTTG mRNA和CFTR mRNA表達量比較 CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌組織中的表達量分別為（0.73±0.08）和（0.13±0.02）；PTTG mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌組織中的表達量分別為（0.17±0.03）和（0.80±0.11）。CFTR mRNA在慢性胰腺炎組織中的表達量明顯高于胰腺癌（χ2=30.27，P＜0.01），PTTG mRNA在慢性胰腺炎組織中的表達量明顯低于胰腺癌（χ2=31.57，P＜0.01）。

2.3 相關性及靈敏度分析 PTTG mRNA和CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌組織中的表達量均具有相關性（r=-0.526、-0.539，P＜0.01）。PTTG mRNA和CFTR mRNA鑒別慢性胰腺炎的靈敏度分別為10%和50%，二者比較差異有統計學意義（P＜0.01）。PTTG mRNA和CFTR mRNA鑒別胰腺癌的靈敏度分別為63%和3.3%，二者比較差異有統計學意義（P＜0.01）。

3 討論

PTTG為原癌基因，在垂體腫瘤及其他惡性腫瘤組織中呈高表達［2～4］。有研究認為，PTTG 可通過不同的途徑促進腫瘤的發生和發展，可能與細胞轉化及調控腫瘤血管生成等機制密切相關［5］。更有研究發現，PTTG mRNA高表達者的癌細胞增殖活性及腫瘤血管生成密度高，易轉移復發［6，7］。本文結果顯示，PTTG mRNA在胰腺癌組織中的表達率及相對表達量均明顯高于慢性胰腺炎組織（P＜0.01）。

CFTR是分布于胰腺、腸道等部位上皮細胞膜上的一種氯離子通道，在鹽類轉運、水分流動和離子濃度調節中有重要作用［8～10］。異常 CFTR 表達可導致上皮細胞的液體轉運發生改變，引起局部組織阻塞和感染［1，11］。本研究結果顯示，CFTR mRNA在慢性胰腺炎組織中的表達率和表達量均高于胰腺癌組織（P＜0.01）。同時，PTTG mRNA和CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌組織中的表達量均具有負相關性（P＜0.01），提示兩標志物與慢性胰腺炎和胰腺癌疾病的發生、發展密切相關，有助于胰腺癌和慢性胰腺炎疾病的早期鑒別診斷，降低漏檢率。

1 張敏,王銀萍,倪勁松,等．CFTR及SPINK1蛋白在慢性胰腺炎及胰腺癌中的表達及其意義．中國實驗診斷學,2011,15(10):1625～1628．

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3 Genkai N,Homma J,Sano M,et al．Increased expression of pituitary tumor transforming gene PTTG is correlated with poor prognosis in gliom a patients ．On Rep,2006,15(6):1569～1574．

4 Rehfeld N,Geddert H,Atamna A,et al．The influence the pituitary tumor transforming gene-1(PTTG-1)survival of patients with small cell lung cancer and no small cell lung cancer． J Carcinog,2006,20(5):4．

5 張耀明,周臻濤,鄧國明,等．PTTG和血管生成與結直腸癌的相關性研究．臨床和實驗醫學雜志,2014,13(12):985～988．

6 Shibata Y,Haruki N,Kuwabara Y,et al．Expression of PTTG(pituitary tumor I ransforming gene)in esophageal cancer．Jpn J of Clinical Oncology,2002,32(7):233～237．

7 SoJbach C,Roiler M,Fel Jbaum,et al．PTTG mRNA expression in primary breast cancer:a prognostic marker for lymph node invasion and tumor recurrence．Breast,2004,13(1):80～81．

8 Ignáth I,Hegyi P,Venglovecz V,et al．CFTR Expression but not cl-/invoved in the stimulatory effect of bile acids on apical cl～/exchange activity in human pancreatic duct cells．Pancreas, 2009, 38(8),921～929．

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10 Mornon JP,Lehn P,Callebaut I． Molecular models of the open and closed states of the whole human CFTR protein． Cellular and Molcular Life Science,2009,66(21):3469～3486

11 Keiles S．Kammesheidt A identification of CFTR,PRSS and SPINK1 mutations in 381 patients with pancreatitis．Pancreas,2006,33(30): 221～227．

Objective To explore the application of PTTG mRNA and CFTR mRNA in the differential diagnosis of chronic pancreatitis and pancreatic cancer. Method 20 cases of patients with chronic pancreatitis and 30 cases of patients with pancreatic cancer were selected. The expression of organize PTTG mRNA and CFTRmRNA in the two groups was detected，real-time reverse transcription-polymerase chain reaction（RT - PCR）technology was applied. The changes of the two markers were comparetively analysed. Results The expression rate of CFTRmRNA in chronic pancreatitis group and PTTGmRNA in pancreatic cancer group was respectively obviously higher（P＜0.01）. The expression quantity of PTTGmRNA and CFTRmRNA in chronic pancreatitis and pancreatic cancer were in the correlation（r=-0.526，-0.539，P＜0.01）. Conclution PTTGmRNA has higher sensitivity in diagnosis of pancreatic cancer，so does CFTRmRNA in diagnosis of chronic pancreatitis. Testing organization PTTGmRNA and CFTRmRNA can be used in the differential diagnosis of chronic pancreatitis and pancreatic cancer disease.

PTTGmRNA CFTRmRNA Chronic pancreatitis Pancreatic cancer

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