高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用在醬油苯甲酸檢測中的應(yīng)用

【摘 要】 本文主要闡述了在用高效液相色譜檢測醬油中的苯甲酸時特殊情況的處理方法。如果檢驗結(jié)果與食品標簽中的標注不符，一定要進一步分析，即先用內(nèi)標法進行定性，內(nèi)標法無法定性的，再用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進行定性，直到確認其組分究竟“是”還是“不是”苯甲酸為止。

【關(guān)鍵詞】 苯甲酸 醬油 高效液相色譜 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

【DOI編碼】 10.3969/j.issn.1674-4977.2015.10.004

筆者在檢驗醬油中苯甲酸時曾遇到過這樣一個問題：某企業(yè)生產(chǎn)的醬油標簽配料表中未標明添加苯甲酸，但檢驗員用GB/T23495-2009《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定高效液相色譜法》方法標準檢出該醬油中含有苯甲酸，檢驗員非常負責任地又用GB/T5009.29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的測定》的第二法高效液相色譜法進行復(fù)驗，該醬油中仍然檢出苯甲酸。但實際上該醬油中根本沒有添加苯甲酸，為了解決這類問題，我們使用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進行了深入的研究。

1 分析儀器及實驗條件

1.1 液相色譜-質(zhì)譜條件

儀器：安捷倫1100液相色譜，安捷倫1296-6460-OPT100液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀

色譜柱：C18柱，250mm*4.6mm，5um

流動相：甲醇+乙酸銨溶液（5%+95%）

流速：1ml/min；檢測波長：230nm

進樣量10ul；質(zhì)譜碎裂電壓：90v

數(shù)據(jù)處理采用：agilent chemstation數(shù)據(jù)處理軟件

1.2 樣品

采用某企業(yè)醬油樣品。

2 高效液相色譜法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀法的檢測原理

高效液相色譜法是根據(jù)樣品中各組分依靠兩相間的分配容量因子的差異而實現(xiàn)分離的。若樣品中各組分在兩相間的分配容量因子不同時，各組分在流動相中被攜帶的速度就不一樣，那么分配容量因子大的組分在柱內(nèi)停留時間長，從柱內(nèi)流出時間晚；分配容量因子小的組分在柱內(nèi)停留時間短，從柱內(nèi)流出時間早，從而達到分離的目的。高效液相色譜不對物質(zhì)的化學結(jié)構(gòu)進行判定。

高效液相色譜的數(shù)據(jù)處理。筆者使用了agilent chemstation工作站軟件進行定性、定量分析，對每一個被測組分的標準物質(zhì)建立一個包含保留時間的校正表，并設(shè)置時間窗口，也就是每一個被測樣品組分不必嚴格等于被測組分標準物質(zhì)的保留時間，而只要在為被測組分的標準物質(zhì)設(shè)定的時間窗口內(nèi)，即被認定為該組分。但有兩種情況需要注意：一種是如果被測樣品中另一組分的色譜保留時間恰好落在設(shè)置的時間窗口內(nèi)而被agilent chemstation工作站軟件認出就會出現(xiàn)誤報；另一種是被測樣品組分的色譜保留時間落在設(shè)置的時間窗口之外而沒有被agilent chemstation工作軟件認出就會出現(xiàn)漏報，這兩種情況對企業(yè)來講都是不公平的。后面的分析結(jié)果表明上述醬油中的苯甲酸就屬于第一種情況。

質(zhì)譜分析是通過對樣品離子的質(zhì)量和強度的測定來進行定性、定量和結(jié)構(gòu)分析的一種分析方法：首先將試樣氣化為氣態(tài)分子或原子，使其轉(zhuǎn)變?yōu)榭焖龠\動的帶電荷粒子（一般為正離子），再利用電磁學原理使帶電荷粒子按質(zhì)荷比（m/e）大小有順序地實行按時間分離或按空間分離，檢測其相對強度，畫出質(zhì)譜圖。通過解析質(zhì)譜圖可以測定分子量、分子結(jié)構(gòu)，進行定性分析和結(jié)構(gòu)分析，通過對特征質(zhì)譜峰峰高的測定進行定量分析。

3 檢測結(jié)果與討論

某企業(yè)醬油樣品檢測到苯甲酸，這次苯甲酸標樣的保留時間為8min，窗口設(shè)為±0.3min，加入一定量苯甲酸后檢測到的苯甲酸峰面積增加，如圖1所示。

采用高效液相色譜-質(zhì)譜對苯甲酸標準樣和某企業(yè)醬油樣品在-ESI模式下質(zhì)荷比（m/e）為121.1的對比圖，沒有發(fā)現(xiàn)樣品中苯甲酸的存在，如圖2所示。

下面就使用高效液相色譜法檢驗醬油中的苯甲酸所遇到的各種情況進行分析：GB7718-2011《預(yù)包裝食品的標簽》中要求“食品標簽應(yīng)標明配料表，配料表中的各種配料應(yīng)要求標示具體名稱，食品添加劑應(yīng)當標示其在GB2760中的食品添加劑通用名稱”，因此在檢驗醬油中的苯甲酸時，一定要看醬油標簽中的配料表。根據(jù)標簽是否標注和高效液相色譜檢出結(jié)果的不同可分為以下四種情況：（1）醬油標簽配料表中標注含有苯甲酸，使用高效液相色譜法檢測時，被測樣品醬油組分的色譜保留時間落在事先設(shè)置的苯甲酸時間窗口內(nèi)，即可確認該醬油中含有苯甲酸。（2）醬油標簽配料表中標注含有苯甲酸，使用高效液相色譜法檢測時，被測樣品醬油組分的色譜保留時間沒有落在事先設(shè)置的苯甲酸時間窗口內(nèi)，那就有兩種可能，一種是確實沒有添加苯甲酸；另一種是苯甲酸的色譜保留時間沒有落在事先設(shè)定的苯甲酸時間窗口內(nèi)，也就是說實際添加了苯甲酸，但高效液相色譜沒有認出。（3）醬油標簽配料表中沒有標注苯甲酸，使用高效液相色譜法檢測時，被測樣品醬油任何組分的色譜保留時間均沒有落在事先設(shè)置的苯甲酸時間窗口內(nèi)，即可確認該醬油中不含苯甲酸。（4）醬油標簽配料表中沒有標注苯甲酸，使用高效液相色譜檢測時，被測樣品醬油某種組分的色譜保留時間落在事先設(shè)置的苯甲酸時間窗口內(nèi)，那就有兩種可能，一種是確實添加苯甲酸，在配料表中沒有標注，欺騙老百姓；另一種情況是一種不是苯甲酸的物質(zhì)的色譜保留時間恰好落在設(shè)定的苯甲酸時間窗口內(nèi)，也就是說實際根本沒有添加苯甲酸，但高效液相色譜卻認出含有苯甲酸（見表1）。（2）、（4）兩種情況如果按照高效液相色譜的檢出結(jié)果進行判定，就可能會誤判。這兩種情況，采用GB/T23495-2009《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定高效液相色譜法》方法標準檢驗，而用GB/T5009.29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的測定》的第二法高效液相色譜法進行復(fù)驗是無效的，因為這兩種方法都是高效液相色譜法，檢出的結(jié)果是一致的，都不是對物質(zhì)的化學結(jié)構(gòu)進行檢測。這兩個標準的區(qū)別在于方法標準GB/T23495-2009《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定高效液相色譜法》適用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉含量的測定，而方法標準GB/T5009.29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的測定》有三個方法（第一法 氣相色譜法、第二法 高效液相色譜法、第三法 薄層色譜法），適用于醬油、水果汁、果醬等食品中山梨酸、苯甲酸含量的測定。

筆者遇到的問題就屬于（4）情況。要想準確地檢出醬油中是否含有苯甲酸，需要進行如下步驟：首先，使用高效液相色譜用內(nèi)標法進行定性，即在被測樣品中加入配置好的標準苯甲酸溶液，再用高效液相色譜進行檢測，將兩張色譜圖進行比較，如果原苯甲酸位置峰出現(xiàn)雙峰或側(cè)峰，即可認定該組分不是苯甲酸，即可以判定該樣品中不含苯甲酸；如果原苯甲酸位置峰增高，則可判定疑是苯甲酸（見圖1），也就是說，該醬油使用高效液相色譜用內(nèi)標法進行定性，在原苯甲酸位置上峰增高，說明該醬油中也可能含有苯甲酸，也可能不含苯甲酸，這就需要進入下一步驟進行判斷，即用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進行定性，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的特點是使用1.8微米的超高壓液相色譜柱進行分離，色譜分離后的物質(zhì)被離子源轉(zhuǎn)換為帶電離子，通過離子的質(zhì)量-電荷比進行定性，苯甲酸的特征質(zhì)荷比是121.1，該醬油中疑是苯甲酸組分在質(zhì)譜對苯甲酸的掃描下沒有信號顯示（見圖2），即可認定該醬油中未檢出苯甲酸。該醬油中疑是苯甲酸的那個組分是什么，筆者沒有繼續(xù)判斷。

4 結(jié)論

在使用GB/T23495-2009《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定高效液相色譜法》方法標準或GB/T5009.29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的測定》的第二法高效液相色譜法檢驗醬油產(chǎn)品中苯甲酸時，當檢驗結(jié)果與食品標簽中的標注不符時，一定要往下繼續(xù)做，即先用內(nèi)標法進行定性，內(nèi)標法無法定性的，還要用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進行定性，總之，直到確認其組分究竟“是”還是“不是”苯甲酸為止。

參考文獻

[1]儀器分析（ISBN 7-80043 148-7）[M].中國石化出版社，2003.

[2]GB/T23495-2009《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定高效液相色譜法》

[3]GB/T5009.29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的測定》的第二法高效液相色譜法

[4]GB7718-2011《預(yù)包裝食品的標簽》

[5]許秀敏，吳西梅，梁春穗，高燕紅.液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用檢測食品中苯甲酸、糖精鈉、山梨酸[j].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2005，15（9）：1057-1059

作者簡介

張超，本科，高級工程師，從事質(zhì)量監(jiān)督檢驗管理工作。

（責任編輯：張曉明）