前列益康膠囊水提取工藝的優(yōu)選

孫繼澤，趙 珉*，唐 巖，韓大慶，宋瑛士，劉銀燕，韓崇成，張紅巖

(1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院，長春130021;2.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，長春130021;3.吉林大學(xué)藥學(xué)院，長春130021)

前列益康膠囊由黃柏、虎杖、萹蓄、野菊花等8味中藥組成，主要適用于濕熱下注型慢性前列腺炎，以清熱利濕，通淋解毒為法。黃柏含有小檗堿、黃柏堿、藥根堿、β-谷甾醇、黃柏酮等，可清熱燥濕、瀉火解毒。野菊花主要含有黃酮和萜類化合物，包括蒙花苷、木犀草素、野菊花醇等，可清熱解毒。現(xiàn)代研究［1-2］表明，二者的水提液均具有抗菌、消炎、免疫抑制等作用。本實驗除虎杖外，其余藥材采用水煎煮的方法對藥用成分進(jìn)行提取。以鹽酸小檗堿和蒙花苷含量為指標(biāo)，采用正交試驗設(shè)計法優(yōu)選前列益康膠囊的提取工藝，建立前列益康膠囊提取工藝的最佳工藝參數(shù)，為該藥的制劑研究提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-10AT高效液相色譜儀(島津);SPD-10A紫外檢測儀(島津);XS105電子分析天平(梅特勒托利多，1/100 000);超純水及RO純水機(jī)(上海樂楓生物科技有限公司，Direct-Pure UP)。

1.2 試藥 鹽酸小檗堿對照品(中國藥品生物制品檢定所批號:0713-9906，供含量測定用);蒙花苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:111528-201308，供含量測定用);甲醇，乙腈為色譜純;水為超純水;其他試劑均為分析純。本實驗所用藥材均購自吉林大藥房。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交試驗設(shè)計 采用L9(34)正交試驗法，對黃柏、虎杖、萹蓄、野菊花等藥材水提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，選擇加水量(A)、提取時間(B)、提取次數(shù)(C)3個因素，以鹽酸小檗堿和蒙花苷含量為考察指標(biāo)，確定最優(yōu)工藝，因素水平表見表1。

表1 因素水平表

2.2 正交試驗樣品溶液的制備 按處方比例稱取黃柏、虎杖、萹蓄、野菊花等藥材9分，按表1條件進(jìn)行提取，合并提取液，濾過，濾液濃縮并定容至500 mL，即得。

2.3 鹽酸小檗堿含量測定

2.3.1 色譜條件 Diamonsil-C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動相∶乙腈-0.05 mol/L 磷酸二氫鉀溶液(26∶74)，檢測波長 265 nm，進(jìn)樣量5 μL，流速1 mL/min，柱溫25℃，理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應(yīng)不低于4 000。

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對照品10.15 mg，置于100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 精密量取正交試驗樣品溶液0.5 mL，置于50 mL量瓶中，分別加流動相稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.4 蒙花苷含量測定［3］

2.4.1 色譜條件 Apollo-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相:甲醇-水-冰醋酸(26∶23∶1)，檢測波長 334 nm，進(jìn)樣量 10 μL，流速 1 mL/min，柱溫25℃，理論板數(shù)按蒙花苷峰計算應(yīng)不低于3 000。

2.4.2 對照品溶液的制備 精密稱取蒙花苷對照品6.56 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解(加熱)至澄清，放冷，用甲醇定容至刻度，搖勻，精密量取2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得。

2.4.3 供試品溶液的制備 精密量取正交試驗提取液1.5 mL，置于25 mL量瓶中，分別加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

表2 正交試驗結(jié)果

表3 方差分析結(jié)果表

2.5 正交試驗分析 由直觀分析(見表2)可知，影響水提取的因素大小順序為 C＞A＞B，即提取次數(shù)＞加水量＞提取時間。由方差分析(見表3)可知，提取次數(shù)(因素C)對提取工藝有顯著性影響(P＜0.05)，加水量(因素A)和提取時間(因素B)影響不顯著(P＞0.05)。A因素:鹽酸小檗堿和蒙花苷提取量均以A2為優(yōu)，故A選A2;B因素:鹽酸小檗堿和蒙花苷提取量均以B2為優(yōu)，故B選B2;C因素:鹽酸小檗堿和蒙花苷提取量均以C3為優(yōu)，故C選C3，且二項指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)意義，最終確定最佳水提工藝為A2B2C3，即藥材加8倍量水，提取3次，每次1.5 h。

2.6 驗證試驗 按處方稱取藥材3分，按最佳工藝提取，分別測定鹽酸小檗堿及蒙花苷含量，3批驗證試驗結(jié)果基本一致，都接近正交試驗中的最大值，見表4。且在最佳工藝提取3次的基礎(chǔ)上又增加了提取第4次的試驗，測得鹽酸小檗堿和蒙花苷的含量分別為1.722 4 g和0.241 8 g，結(jié)果表明，提取3次與提取4次含量測定結(jié)果基本一致，故選水煎提取3次，說明該工藝條件穩(wěn)定，重復(fù)性良好。

表4 驗證實驗結(jié)果表

3 小結(jié)

黃柏為常用傳統(tǒng)中藥，分為川黃柏和關(guān)黃柏2種，本研究所用藥材為川黃柏，且為君藥，具有清熱燥濕，瀉火除蒸，解毒療瘡等功效。研究［4-10］表明，黃柏水煎劑有一定免疫抑制作用，對葡萄球菌、鏈球菌、變形桿菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、耐萬古霉素腸球菌有明顯的抑菌作用，還能減少單核細(xì)胞滲出和巨噬細(xì)胞生成，具有良好的抗炎作用。野菊花味苦、辛，性微寒，歸肝、心經(jīng)，具有清熱解毒，瀉火平肝之功，其水提物對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、類白喉桿菌、肺炎克雷伯桿菌均有較好的抑制作用，對異性蛋白致炎因子所致的炎癥作用較好。研究［11］還表明，二者可以與其他中藥配伍治療慢性前列腺炎。本實驗參照《中國藥典》［3］(一部)及文獻(xiàn)，先采用乙腈－0.1%磷酸溶液(50∶50)(每100 mL加十二烷基磺酸鈉0.1 g)為流動相，但分離的峰形不好，且考慮到緩沖鹽易縮短色譜柱的使用壽命，最終選擇乙腈－0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(26∶74)為流動相，峰形好，可明顯縮短保留時間，分離度也較好，且操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確。

本試驗中，雖然采用水提工藝進(jìn)行提取，但并不完善，由于水提取的藥液中含有大量的多糖及大分子成分，且該類成分的作用不明顯，又占有較大的體積，給服用帶來不便，因此考慮去除此類成分，提高療效，以便于服用。所以，對水提液進(jìn)行了純化處理，最大程度地富集有效成分，從而更全面、更合理地優(yōu)選前列益康膠囊的最佳工藝，為其生產(chǎn)和臨床應(yīng)用提供試驗依據(jù)。

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