人腦膠質瘤中KAI1/CD82的表達及其臨床意義

賈軍李非潘巍巍

1.盤錦市中心醫院神經外科，遼寧盤錦124010;2.遼河油田第二職工醫院，遼寧盤錦124001;3.遼河油田總醫院，遼寧盤錦124001

人腦膠質瘤中KAI1/CD82的表達及其臨床意義

賈軍1李非2潘巍巍3

1.盤錦市中心醫院神經外科，遼寧盤錦124010;2.遼河油田第二職工醫院，遼寧盤錦124001;3.遼河油田總醫院，遼寧盤錦124001

目的探討KAI1/CD82在人腦膠質瘤中的表達及其與惡性程度的關系。方法收集腦膠質瘤病理132例,為膠質瘤組,對照組為20例顱腦外傷內減壓的腦組織,按照膠質瘤級別膠質瘤組分為四個亞組。采用免疫組化方法分析膠質瘤組與對照組間,以及不同惡性程度膠質瘤中KAI1/CD82基因表達。結果KAI1/CD82在膠質瘤組中表達率顯著高于對照組(P＜0.05)。不同惡性程度膠質瘤中KAI1/CD82的表達差異有統計學意義(P＜0.05)。KAI1/CD82的表達與人腦膠質瘤的惡性程度呈正相關,在Ⅲ-Ⅳ級膠質瘤中表達明顯高于Ⅰ-Ⅱ級膠質瘤(P＜0.05)。通過隨訪發現KAI1/CD82陽性組復發率低于陰性組,兩組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。結論KAI1/CD82在膠質瘤的發生和發展中起著重要作用。檢測KAI1/CD82的表達可能成為監測膠質瘤進展及臨床上判斷預后的重要參考指標。

膠質瘤;KAI1/CD82;免疫組化

膠質瘤(glioma)是顱內最常見的原發惡性腫瘤,患者治療失敗和死亡的主要原因是腫瘤的侵襲轉移。KAI1/CD82是近年發現的特異性腫瘤轉移抑制基因,關于KAI1/CD82抑制腫瘤侵襲轉移的作用機制極其復雜，尚未完全闡明。目前國內外,對KAI1/ CD82在膠質瘤中的表達及作用研究較少。本實驗通過免疫組織化學法對KAI1/CD82在不同惡性程度的膠質瘤組織中的表達進行研究,探討KAI1/CD82膠質瘤惡性程度與表達水平之間的關系,為進一步治療和判斷預后提供新的參考依據，現報道如下。

1 資料與方法

1援1一般資料

選取遼寧省盤錦市中心醫院2011年12月-2012年12月收治、手術切除并經病理組織學確診的膠質瘤132例,為膠質瘤組。132例患者中,男58例,女74例,年齡22～67歲、平均49歲。按2000年WHO膠質瘤分類標準進行分級:I級28例,Ⅱ級50例,Ⅲ級38例,Ⅳ級16例;24例正常腦組織標本均為急性顱腦損傷患者行內減壓術切除的腦組織,為對照組。膠質瘤組與對照組患者在年齡、性別、組織部位等一般資料上上無顯著差異,具有可比性。所有標本經10%福爾馬林溶液固定,石蠟包埋。

1.2 主要試劑及免疫組化染色

兔抗人KAI1/CD82單克隆抗體及免疫組化SP試劑盒均購自北京博奧森生物技術有限公司。免疫組化技術采用SP法,標本連續組織切片4～6 μm,常規采用脫蠟,水化,PBS沖洗,3%H2O2室溫15 min,PBS沖洗,高壓PH9.0抗原修復1 min30 s,加入一抗4℃過夜。PBS沖洗,加入二抗37℃孵育30min,PBS沖洗,DAB顯色,蘇木素對比染色,水洗分化,梯度乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片,觀察。用已知陽性組織切片做陽性對照,PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判斷

以在胞漿內出現棕黃色顆粒判定為陽性。根據染色程度及染色陽性細胞占腫瘤細胞總數百分比綜合計分。按照陽性細胞比例計分:≤25%為0分,25%～50%為1分,50%～75%為2分,大于75%為3分;不染色記0分,淡黃色記1分,黃色或深黃色記2分,棕黃色記3分。每張切片的兩項得分之和＜4分為陰性表達,≥4分為陽性表達。

1.4 統計方法

所得數據采用SPSS 17.0軟件進行統計，χ2檢驗及Speaman相關分析,P＜0.05為有統計學意義

2 結果

2.1 KAI1/CD82蛋白在正常腦組織和腦膠質瘤中的陽性表達

腦膠質瘤組織中KAI1/CD82在腦膠質瘤中陽性率為63.63%(84/132),高于對照組29.17%(7/24);差異均有統計學意義(P＜0.05)。

2.2 不同病理級別腦膠質瘤標本中KAI1/CD82陽性表達情況

KAI1/CD82蛋白陽性表達率分別為:I級42.86%(12/28),II級56%(28/50),Ⅲ級78.95%(30/38),Ⅳ級87.5%(14/16),將各相鄰級別腦膠質瘤KAI1/CD82蛋白陽性表達率進行χ2檢驗,差異無統計學意義(P＞0.05);將低級別組(I+Ⅱ)與高級別組(Ⅲ+Ⅳ)的Kiss-1陽性表達率進行χ2檢驗,差異有統計學意義(χ2=6.29,P＜0.05)。

表1 不同病理級別腦膠質瘤標本中KAI1/CD82陽性表達情況

KAI1/CD82在I級+II級與III級+IV級陽性表達率比較,差異有統計學意義(χ2=6.29,P＜0.05)。

2.3 腦膠質瘤復發率的比較

通過對腦膠質瘤患者術后1年的隨訪,我們發現腦膠質瘤總復發率為42.42%(56/132),KAI1/CD82陽性組復發率為33.33% (28/84),KAI1/CD82陰性組復發率為62.50%(30/48),KAI1/CD82陽性組的1年復發率低于陰性組,兩組比較差異均有統計學意義(P＜0.05),見表2。

表2 腦膠質瘤1年復發率的比較

3 討論

KAI1/CD82是位于人染色體11P11.2上高度保守的抑癌基因,最早是由Dong等研究前列腺癌時發現的,它編碼含有267個氨基酸的蛋白質CD82,具有10個外顯子及9個內含子的,是屬于跨膜4超家族成員之一的細胞表面糖蛋白。后來的研究發現KAI1/CD82在乳腺癌、肝癌、胃癌、肺癌等多種實體腫瘤中存在不同程度的表達較弱或缺失,它在腫瘤的浸潤和轉移中起著非常重要的作用。一些研究[1]發現KAI1/CD82在乳腺正常組織高表達,而在乳腺癌中存在表達減弱,并且它與ER陽性呈正相關。腫瘤惡性程度越低,KAI1/CD82表達越高,越不容易發生淋巴結和遠處轉移[2],患者5年生存率也越高。后來一些研究者[3]發現KAI1/CD82蛋白在肺良性病組的表達高于肺癌組,與臨床分期,病理分化程度和淋巴結轉移相關,但與性別,年齡,腫瘤大小和病理類型無關。KAI1/CD82的高表達能抑制肺癌區域淋巴結的轉移[4],Choi UJ等[5]證實KAI1/CD82的下降通過PI3K/Akt/mTOR信息傳導路徑對H1299肺癌細胞轉移表型下調Rac1的表達。KAI1/CD82在大腸癌中陽性表達約55%,其表達和Dukes'分期,靜脈侵犯,淋巴結轉移,腫瘤分化程度和肝轉移之間有統計上的顯著相關。并且KAI1/CD82表達和Dukes分期被確定為重要和獨立的預后因素[6]。KAI1/CD82表達的減弱或者缺失可能是腫瘤發生和發展的潛在因素。不少文獻報道KAI1/CD82在通過Sprouty2的上調抑制肝癌細胞遷移,野生型p53和JunB的協同作用下,調節著肝癌細胞的KAI1/CD82的蛋白表達[8-9]。

KAI1/CD82作為腫瘤轉移抑制的細胞表面分子,在腦部惡性疾病中的研究尚不多見有研究發現該基因在神經母細胞瘤中的表達與臨床分期呈負相關,其表達下調是神經母細胞瘤分化和轉移的一個標志。其表達是由NF-κB和NF-κB介導的APPct等控制[10],可能減緩遷移,促進成熟的少突膠質祖細胞的分化。相反,下調CD82在腦室管膜下區細胞內,利用逆轉錄病毒載體表達的shRNA,阻止它們分化成髓鞘少突膠質細胞[11]。我國研究者發現神經母細胞瘤細胞系的細胞高表達KAI1/CD82,與人神經母細胞瘤細胞系細胞的體外高轉移潛能呈負相關[12];CD82/KAI1在惡性膠質瘤細胞株中表達,且在U251細胞中表達較CHG-5細胞高. CD82/KAI1可抑制膠質瘤U251細胞的遷移[13]。

本實驗發現,在正常腦組織中KAI1/CD82的陽性表達率為29.17%,顯著低于腦膠質瘤組織63.63%。因此,KAI1/CD82的陽性表達有提示存在腦膠質瘤病變的能力。此外,我們進行膠質瘤分級后的分組研究中發現,KAI1/CD82的表達與人腦膠質瘤的惡性程度呈正相關，在Ⅲ-Ⅳ級膠質瘤中表達明顯高于Ⅰ-Ⅱ級膠質瘤,差異有統計學意義(P＜0.05)。因此,在臨床中發現通過隨訪發現KAI1/CD82的表達較高時可能提示病變分級較高,惡性程度較高。然而,我們通過隨訪研究結合KAI1/CD82的表達缺失可能是腦膠質瘤復發的重要因素。以上的研究結果表明,KAI1/CD82在中樞神經系統中發揮著重要作用,通過調節少突膠質祖細胞的分化,從而限制腦膠質瘤細胞的遷移,是一種伴隨膠質瘤發生發展而發揮功能的保護性因子,這可能正是腦膠質瘤很少發生轉移的原因。但其具體的作用途徑和機制仍需要我們進一步的研究和探索。

綜上,KAI1/CD82在腦膠質瘤的發生和發展過程中起著重要作用,檢測KAI1/CD82在腦膠質瘤中的表達可能有助于對病情的評估,從而為腦膠質瘤的治療和預后奠定基礎。

[1]Mooez S,Malik FA,Kayani MA,et al.Expressional alterations and transcript isoforms of metastasis suppressor genes(KAI1 and KiSS1)in breast cancer patients.[J].Asian Pac J Cancer Prev.2011;12(10):2785-91.

[2]Markowska J,Bar J,M dry R,et al.The expression of BRCA1,P53, KAI1,and Nm23 in ovaries of BRCA1 mutation carriers after prophylactic adnexectomy[J].Arch Gynecol Obste，2013，288(4):839-44.

[3]Shiwu WU,Lan Y,Wenqing S,et al.Expression and clinical significance of CD82/KAI1 and E-cadherin in non-small cell lung cancer.[J]. Arch Iran Med，2012，15(11):707-12.

[4]Wu SW,Yu L,Zhou L,et al.[Expression of Gal-3 and CD82/KAI1 proteins in non-small cell lung cancer and their clinical significance].[J]. Zhonghua Zhong Liu Za Zhi，2013 Feb，35(2):124-128.

[5]Choi UJ,Jee BK,Lim Y,et al.KAI1/CD82 decreases Rac1 expression and cell proliferation through PI3K/Akt/mTOR pathway in H1299 lung carcinoma cells[J].Cell Biochem Funct，2009，27(1):40-47.

[6]Ma ZB,Li K,Wang J,et al.Role of KAI1/CD82 polymorphisms in colon cancer risk in Han Chinese population.[J].Med Oncol，2013，30(3):668.

[7]Dai W,Wang C,Wang F,et al.Anti-miR-197 inhibits migration in HCC cells by targeting KAI 1/CD82[J].Biochem Biophys Res Commun，2014，446(2):541-548.

[8]Lee JH,Bae JA,Lee JH,Seo YW,et al.Glycoprotein 90K,downregulated in advanced colorectal cancer tissues,interacts with CD9/CD82 and suppresses the Wnt/beta-catenin signal via ISGylation of beta-catenin.[J]. Gut，2010;59(7):907-917.

[9]Guo C,Liu QG,Zhang L,et al.Expression and clinical significance of p53,JunB and KAI1/CD82 in human hepatocellular carcinoma[J].Hepatobiliary Pancreat Dis Int，2009，8(4):389-396.

[10]Mela A,Goldman JE.CD82 blocks cMet activation and overcomes hepatocyte growth factor effects on oligodendrocyte precursor differentiation.[J].J Neurosci，2013，5(18):7952-7960.

[11]Mela A,Goldman JE.The tetraspanin KAI1/CD82 is expressed by late-lineage oligodendrocyte precursors and may function to restrict precursor migration and promote oligodendrocyte differentiation and myelination[J].J Neurosci，2009，29(36):11172-11181.

[12]孫維勝，鹿洪亭，董蒨，等.不同轉移潛能人神經母細胞瘤細胞系KAI1/CD82的表達[J].中華小兒外科雜志,2013,34(4):249-251.

[13]陳亮,羅文萍,鐘東等.CD82/KAI1在神經膠質瘤細胞株中的表達及對細胞遷移能力的影響[J].第三軍醫大學學報，2010，32(13):1438-1141.

Expression and clinical significance of KAI1/CD82 in human brain glioma

JIA Jun1,LI Fei2,PAN Weiwei3
1.Panjin central Hospital,Panjin,124010,China;2.No.2 Workers′Hospital of Liaohe Oilfield,Panjin,124001,China;3.General Hospital of Liaohe Oilfield,Panjin,124001,China

ObjectiveTo study the expression of KAI1/CD82 in human brain glioma and its relationship with malignant degrees.MethodsGene expression of KAI1/CD82 levels were studied using immunohistochemical methods in 132 cases with different degrees of malignant glioma.Resultsthe expression of KAI1/CD82 had significant difference in different degrees of malignant glioma(P＜0.05).The expression of KAI1/CD82 positively correlated with the malignant degree of brain glioma,and expression inⅢ-Ⅳgrade glioma was significantly higher thanⅠ-Ⅱgrade glioma(P＜0.05).Followed-up,the recurrence rate in KAI1/ CD82positive patients is significant lower than the negative group(P＜0.05).ConclusionKAI1/CD82 plays an important role in the occurrence and development of glioma.To detect the expression of KAI1/CD82 may be an important indicator to monitor the progress and prognosis of glioma.

Glioma;KAI1/CD82;Immunohistochemistry

R5

A

1674-0742（2015）03（b）-0112-02

2014-10-11）

賈軍(1972-),男,遼寧盤錦人，副主任醫師,醫學碩士，研究方向：神經修復方面。