正交法優化復方腫節風合劑提取工藝研究

袁榮獻劉天翔曾 真梁 會

（1.貴陽中醫學院第二附屬醫院，貴州貴陽550001；2.貴州省建筑醫院，貴州貴陽550001）

正交法優化復方腫節風合劑提取工藝研究

袁榮獻1劉天翔2曾 真1梁 會1

（1.貴陽中醫學院第二附屬醫院，貴州貴陽550001；2.貴州省建筑醫院，貴州貴陽550001）

目的：建立復方腫節風合劑制備工藝。方法：采用正交試驗法，對復方腫節風合劑制備工藝進行研究，以其有效成分反丁烯二酸的提取量為考察指標，對浸泡時間、煎煮次數、溶劑用量、提取時間等主要影響因素進行考察，篩選最佳提取工藝。結果：最佳提取工藝參數為浸泡1h，第1次加8倍量水（扣除藥材吸水），第2、3次加6倍量水，提取時間0.5h，煎煮3次。結論：本產品各項技術參數與工藝優選條件相同，且工藝條件穩定，說明工藝可行，適合批量生產。

復方腫節風合劑 提取工藝 反丁烯二酸 正交試驗

復方腫節風合劑是由處方腫節風、魚腥草等組成，是在貴陽中醫學院第二附屬醫院五官科長期臨床實踐的經驗方基礎上，按照國家第6類中藥新藥的要求研制的新藥，主治急慢性咽炎及扁桃體炎[1]。

原工藝生產可行，質量穩定，臨床療效確切，但原劑型為湯劑，不能起到局部理療的作用，藥液不能直接到達患處，因此，將該品改變劑型為合劑（使用前將其霧化），使用方便，起霧效果好。經口腔黏膜超聲霧化給藥后，既起到局部理療的作用，又使藥液直達患處以清熱解毒、抗炎、消腫止痛、潤喉利咽。

本實驗在沿用原工藝路線基礎上，以復方腫節風合劑君藥腫節風有效成分反丁烯二酸的提取量指標對工藝進行評價，采用L9（34）正交試驗，篩選最佳提取工藝條件，同時對主要有效成分進行定性、定量控制，提高了質量標準，以期獲得更好的療效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀；梅特勒-托利多AL204電子分析天平；真空干燥箱；電熱鼓風干燥箱；EM-202MS1微波真空干燥機。

1.2 試藥 反丁烯二酸 （中國藥品生物制品檢定所，批號:1541-200001）；乙腈為色譜純 （江蘇漢邦）；娃哈哈純凈水；磷酸、乙醇均為分析純；液相用水為超純水。

2 方法與結果

2.1 指標選擇 為了使工藝能充分反映藥物療效，并結合本方藥物組成的特點及功能主治，以本方中腫節風的有效成分反丁烯二酸的提取量為考察指標對工藝進行評價。

2.2 反丁烯二酸含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱為 Hypersil ODS2柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相乙腈-0.1%磷酸溶液（2∶98），檢測波長210nm，柱溫30℃，進樣量5μL；流速1.0mL/min，色譜圖見圖1。

圖1 對照品（a）、復方腫節風合劑（b）的HPLC圖

2.2.2 供試品溶液的制備 按1/45處方量取藥材39g，精密稱定，加8倍量水煎煮3次，每次煎煮0.5h，藥液用200目濾布過濾后，定容到100mL，搖勻，精密量取5mL置50mL量瓶中，加蒸餾水至刻度，定容，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，取續濾液，即得。

2.2.3 對照品溶液的制備 精密稱取反丁烯二酸對照品適量，置10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，超聲，搖勻，即得2.49μg/mL的對照品溶液。

2.3 提取工藝優化

2.3.1 單因素考察

2.3.1.1 藥材吸水率的測定 按1/10處方量稱取藥材（魚腥草除外）175g，加10倍量水浸泡，浸泡不同時間，濾過，稱濕藥重量（至藥材重量不再增加為止），測定藥材吸水率。結果見表1。可見藥材吸水率為210%，為方便操作，以吸水率為200%計算，即藥材吸水量為藥材重的2.0倍。因此首次水提時應該多加2.0倍量的水。

表1 藥材吸水率考察

2.3.1.2 浸泡時間的考察 稱取魚腥草藥材8份，每份250g，剪碎，分別裝入水蒸氣蒸餾裝置中，各自加入10倍量水，浸泡0、1、3、5h，于水沸后6h收集餾出液，將收集到的混合液倒入分液漏斗，加入一定量的石油醚萃取，減壓旋轉蒸發去溶劑，即可得深黃色精油。用電子天平稱重精油，計算產率，結果見表2。單因素方差分析結果表明，P＜0.05，說明不同的浸泡時間揮發油提取率有顯著性差異，而浸泡1、3、5h之間揮發油提取率無顯著性差異，因此根據節約時間及成本的需要，選用浸泡時間為1h。

表2 魚腥草浸泡時間考察

2.3.1.3 提取時間的考察 稱取魚腥草藥材8份，每份250g，剪碎，分別裝入水蒸氣蒸餾裝置中，各自加入10倍量水，浸泡1h，于水沸后2、4、6、8h收集餾出液，將收集到的混合液倒入分液漏斗，加入一定量的石油醚萃取，減壓旋轉蒸發去溶劑，即可得深黃色精油。用電子天平稱重精油，計算產率，結果見表3。單因素方差分析結果表明，P＜0.05，說明不同的提取時間揮發油提取率有顯著性差異；6h的提取率遠大于2、4h，6h與8h之間提取率無顯著性差異。因此，為節約成本起見，選用提取時間為6h。

表3 魚腥草提取時間考察

2.3.2 正交試驗設計 根據單因素考查結果，本試驗以溶劑用量（A）、煎煮次數（B）、煎煮時間（C）為考察因素，每個因素3個水平，進行L9（34）正交試驗，每次試驗平行3份，篩選最佳工藝條件，因素水平見表4，正交試驗結果見表5，主體間效應的檢驗見表6。從表6的結果分析得知，各因素作用主次為B＞A＞C，B因素有顯著性差異，且因素B中B3＞B2＞B1，則應選擇B3為水提工藝條件參數；其他A、C均無顯著性差異，且A3＞A2＞A1，C3＞C1＞C2，但結合大生產實際，無顯著性差異的A、C因素應選擇A1、C1為水提工藝條件，故選擇水提工藝A1B3C1，即煎煮3次，第1次加8倍量水（扣除藥材吸水），第2、3次加6倍量水，每次提取0.5h。

表4 L9（34）正交試驗設計因素水平

表5 煎煮工藝條件L9（34）正交試驗安排及結果

表6 主體間效應的檢驗表（因變數：總固體物得率）

2.3.3 優化工藝的驗證 對優選的工藝進行了驗證試驗，結果見表7，按條件A1B2C1進行3次重復試驗。結果可見，驗證試驗結果與正交結果相一致，說明此水提工藝條件基本穩定。

表7 正交結果驗證

3 結語

結合腫節風、魚腥草等的有效成分、藥理學的研究、臨床應用及功能主治的特色，腫節風在本方中用水提取是合理的。

在沿用原工藝路線的基礎上，為提高復方腫節風合劑藥物利用率，將原劑型湯劑改變為合劑，同時，為了提高質量標準，本試驗對原工藝進行驗證、細化，對主要有效成分進行定性、定量控制，以期獲得更好的療效。本研究以復方腫節風合劑中反丁烯二酸的含量為考察指標，考察了最佳水提工藝。在單因素試驗的基礎上，選取溶劑倍量、提取時間、煎煮次數進行正交試驗，通過正交試驗優化，確定最佳提取工藝為浸泡1h，煎煮3次，第1次加8倍量水（扣除藥材吸水），第2、3次加6倍量水，每次提取0.5h。本試驗優化的工藝簡便、重復性好，其各項技術參數與工藝優選條件相同，且工藝條件穩定，說明工藝可行，適合批量生產。

[1] 李松林，崔熙，喬傳卓，等.五種金粟蘭屬植物揮發油成分及其抗真菌活性研究.中藥材，1992，15（7）：28

R289.5

A

1672-397X（2015）06-0061-03

袁榮獻（1972—），女，本科學歷，副主任藥劑師，主要從事藥劑學研究。

曾真，碩士。yuanrongxianyr@163.com

2014-11-04

編輯：吳 寧

貴州省中醫藥管理局中醫藥、民族醫藥科學技術課題研究資助項目（QZYY2011-26）；貴陽中醫學院科研項目（貴中醫科院內[201204]號）