不同程度阿爾茨海默病患者血清可溶性Fas及其配體水平的變化

陳同偉

(嘉善縣中醫醫院檢驗科，浙江嘉善314100)

隨著全球人口老齡化日益加劇，老年期認知障礙的發病率也逐漸增加，其中阿爾茨海默病(Alzheimer disease，AD)的發病率最高，已成為當今社會面臨的難題之一。AD是一種以進行性認知障礙和記憶能力損害為主的中樞神經系統退行性疾病。有研究表明[1]在多種神經系統疾病中存在細胞凋亡的異常，而 Fas/Fas配體(sFas ligand，FasL)系統在介導細胞凋亡過程中起到重要的信號傳遞作用。研究表明Fas介導的細胞凋亡參與了AD的病理生理過程[2]。為此，本研究通過檢測不同程度的AD患者的血清可溶性Fas(soluble Fas，sFas)及其配體(sFasL)水平，探討其與AD發生的關系。

材料和方法

一、研究對象

選取2012年10月至2013年12月在嘉善縣中醫醫院住院的AD患者100例，男55例，女45例，年齡56～83歲，均符合美國精神障礙診斷與統計手冊(第4版)制定的AD診斷標準。根據臨床癡呆評定量表(clinical dementia rating，CDR)評分將AD患者分為輕度癡呆組(30例，男16例，女14例，年齡54～80歲)、中度癡呆組(45例，男24例，女21例，年齡57～84歲)和重度癡呆組(25例，男15例，女10例，年齡62～86歲)。另選取同期嘉善縣中醫醫院體檢者100例，根據臨床體檢結果有無異常分為老年疾病對照組和正常對照組。老年疾病對照組共54例，男28例，女26例，年齡60～87歲，包括17例糖尿病患者、18例高血壓患者、15例高血脂患者及4例其它內分泌疾病患者。正常對照組共46名，男20名，女16名，年齡57～85歲，均無心腦血管疾病、無高血壓、無智能障礙、無神經精神科疾病史、內分泌疾病史及癡呆家族史，近期無感染性疾病。各組之間年齡及性別構成差異無統計學意義(P＞0.05)，見表1。所有研究對象均簽署知情同意書。

表1 AD組和對照組一般資料比較

二、納入及排除標準

1.納入標準 (1)根據神經心理量表檢測證實有癡呆，簡易智能精神狀態量表(mini-mental state examination，MMSE)評分 ＜17(文盲)、20(小學)、24(中學及以上)測評確定;Hachinski缺血指數量表(Hachinski ischemic scale，HIS)＜4分，不以抑郁為起病形式;(2)至少有兩項認知功能的受損:記憶力、計算力或定向力等;(3)記憶或其他認知功能進行性損害;(4)無意識障礙;(5)發病年齡在50～90歲;(6)進行性記憶力和其他認知功能障礙，不能用系統性疾病或其它腦部疾病來解釋;(7)病程半年以上。

2.排除標準 (1)突然地卒中樣起病;(2)早期出現局灶性神經系統特征，如偏癱、感覺喪生、視野缺損、共濟失調;(3)早期或起病時出現癲癇發作或步態障礙;(4)近期有感染性疾病發生;(5)近期服用激素類藥物;(6)顱內腫瘤、占位性病變等疾病。

三、方法

1.測試工具 (1)以MMSE為癡呆篩查工具，篩選對照組;(2)以HIS評定癡呆類型，4分以下多為AD;(3)以CDR評定癡呆程度。以上評定均由2名具有高級職稱的臨床醫生進行。

2.標本的采集和測定 血樣本采集均經當事人或家屬同意，患者于入院后次日早晨8點前抽取空腹靜脈血4 mL，室溫靜置凝集1 h后，以900×g離心10 min，取血清分裝于EP管中，置－70℃保存待檢。體檢者同樣按上述要求留取血樣保存待檢。采用酶聯免疫吸附試驗(enzymelinked immunosorbent assay，ELISA)檢測血清 sFas和sFasL水平，試劑盒購自美國R＆D公司，嚴格按照操作說明書進行。測定標本在450 nm波長下的吸光度(A)值，根據標準曲線的直線回歸方程計算出sFas和sFasL水平。

四、統計學方法

采用SPSS 13.0軟件進行統計分析。數據均呈正態分布，采用±s表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組比較采用單因素方差分析，相關分析采用Pearson相關。以P＜0.05為差異有統計學意義。

結 果

一、AD組、老年疾病對照組及正常對照組血清sFas、sFasL水平比較

AD組血清sFas、sFasL水平明顯高于老年疾病對照組和正常對照組(P＜0.01)。AD組輕度癡呆、中度癡呆及重度癡呆血清sFas、sFasL水平明顯高于正常對照組(P＜0.01)，且隨著癡呆程度的加重，血清sFas和sFasL水平也逐漸增高。見表2。

二、AD患者血清 sFas和 sFasL與病程、年齡、MMSE評分及HIS評分的相關性分析

血清sFas與年齡、病程、MMSE評分呈正相關(r值分別為 0.856、0.834、0.799，P ＜0.01)，與 HIS評分呈負相關(r= －0.714，P ＜0.01);血清sFasL與年齡、病程呈正相關(r值分別為0.863、0.857，P ＜0.01)，與 MMSE、HIS 評分呈負相關(r值分別為 －0.801、－0.745，P ＜0.01)。

表2 AD組、老年疾病對照組及正常對照組血清sFas、sFasL水平比較 (±s，μg/L)

表2 AD組、老年疾病對照組及正常對照組血清sFas、sFasL水平比較 (±s，μg/L)

注:與正常對照組比較，*P＜0.01;與老年疾病對照組比較，#P ＜0.01

組別 例數sFas sFasL AD 組 100 52.4 ±16.7*#118.2 ±34.1*#輕度癡呆組 30 34.3 ±5.7*# 89.3 ±11.7*#中度癡呆組 45 50.4 ±8.5*# 107.4 ±22.1*#重度癡呆組 25 64.5 ±12.4*#123.5 ±29.5*#老年疾病對照組 54 20.3 ±8.3* 75.5 ±25.6*正常對照組46 12.4 ±5.5 51.8 ±22.7

討 論

細胞凋亡是機體在生長、發育過程中受到外來刺激時，為保持機體內環境的一種自我調節方式，而Fas/FasL途徑是細胞凋亡中最主要的途徑之一。Fas屬腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)家族，主要在激活的B細胞、巨噬細胞、NK細胞上表達，FasL主要在激活的T細胞上表達，兩者結合可致表達Fas的細胞凋亡[2]。研究認為Fas抗原介導凋亡的機制是通過與之相應的配體(FasL)或單克隆抗體結合后發出凋亡信號，并傳遞至細胞內，調節基因轉錄，從而誘導細胞凋亡。細胞過度凋亡會引起神經退行疾病，如AD。AD是常見的中樞神經系統退行性病變。研究表明Fas介導的細胞凋亡參與了AD的疾病發展過程[3-4]。本研究結果顯示 AD患者血清 sFas和sFasL水平明顯高于正常對照組和老年疾病對照組，與文獻報道[5]相符;且隨著癡呆程度的提高，血清sFas和sFasL呈逐漸升高趨勢。由此提示sFas和sFasL可能參與了AD疾病中的神經細胞凋亡的過程，與AD的發生、發展有密切關系。因此血清sFas和sFasL對于癡呆的嚴重程度有一定的預示作用，臨床上可考慮將血清sFas和sFasL水平作為癡呆病情發展的監測指標之一。

智能水平和腦缺血指數是評定老年人大腦神經細胞功能的量化指標。本研究結果顯示AD患者sFas與年齡、病程及MMSE評分呈正相關(r值分別為0.856、0.834、0.799，P ＜0.01)，而與 HIS評分呈負相關(r= －0.714，P ＜0.01)，這與國外研究結果(隨著年齡增長，sFas的表達明顯增高)[6]相一致。血清sFasL與年齡、病程呈正相關(r值分別為0.863、0.857，P ＜0.01)，而與 MMSE和HIS評分呈負相關(r值分別為 －0.801、－0.745，P ＜0.01)。原因可能是 sFas形成寡聚體與sFasL結合，反過來加劇sFasL陽性細胞的死亡，從而加速患者的癡呆進程，這與PROUSSAKOVA等[7]的報道一致。提示血清sFas和sFasL濃度與患者的智能水平和腦缺血程度存在某些關聯。但因本研究的病例數較少，該結論還需要大樣本、長期的研究才能進一步證實。

總之，AD患者存在血清sFas和sFasL水平異常，且其水平的高低與患者的癡呆程度有關，可能是AD患者病情進一步發展的原因之一。

[1]許靜，蒲傳強.Fas/FasL在神經系統疾病作用的研究進展[J].國際神經病學神經外科學雜志，2013，40(3):297-298.

[2]張玲英，洪華，葉長寧，等.類風濕關節炎患者血清sFas、sFasL和 IL-18水平及意義[J].檢驗醫學，2004，19(2):104-105.

[3]CRAIG-SCHAPIRO R，KUHN M，XIONG C，et al.Multiplexed immunoassay panel identifies novel CSF biomarkers for Alzheimer's disease diagnosis and prognosis[J].PLoS One，2011，6(4):e18850.

[4]SU JH，ANDERSON AJ，CRIBBS DH，et al.Fas and Fas ligand are associated with neuritic degeneration in the AD brain and participate in beta-amyloid-induced neuronal death [J].Neurobiol Dis，2003，12(3):182-193.

[5]ERTEN-LYONS D，JACOBSON A，KRAMER P，et al.The FAS gene，brain volume，and disease progression in Alzheimer's disease[J].Alzheimers Dement，2010，6(2):118-124.

[6]COLLAZIOL D，LUZ C，DORNELLES F，et al.Psychoneurodendocrine correlates of lymphocyte subsets during healthy ageing[J].Mech Ageing Dev，2004，125(3):219-227.

[7]PROUSSAKOVA OV，RABAYA NA，MOSHNIKOVA AB，et al.Oligomerization of soluble Fas antigen indues its cytotoxicity [J].J Biol Chem，2003，278(38):36236-36241.