白芍總皂苷部位的液質聯用分析

陳佩東，周 習（南京中醫藥大學，南京210046）

·方藥研究·

白芍總皂苷部位的液質聯用分析

陳佩東，周 習
（南京中醫藥大學，南京210046）

目的 分析白芍總皂苷部位中的化學成分。方法 應用大孔樹脂純化白芍總皂苷，高效液相-四級桿質譜分析，采用Kromasil C18柱（250mm×6mm，5μm）；流動相A為0.05％甲酸，B為乙腈，梯度洗脫；對白芍總皂苷部位進行分析，對主要離子碎片裂解過程進行解析。結果 白芍總皂苷中鑒定出22個化合物。其中所含的化合物除少數為黃酮、三萜類苷元外，均為白芍苷等蒎烷類單萜苷成分。結論 白芍總皂苷中主要為單萜皂苷類成分。

白芍；白芍苷；總皂苷；液質聯用分析

還不系統深入，為進一步研究白芍總皂苷的藥效基礎，提取、分離純化了白芍中總皂苷，并對總皂苷部位的化學成分進行了液質聯用分析。

1 樣品與儀器

1.1 樣品 白芍飲片（批號：120809，產地：安徽），經南京中醫藥大學鑒定教研室吳德康教授鑒定為毛茛科芍藥屬植物（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根。芍藥苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，110736-201136），氧化芍藥苷和芍藥內酯對照品（成都曼思特生物科技公司Must-120708，Must-120516）。樣品中氧化芍藥苷、芍藥內酯苷、芍藥苷的含量經高效液相測定分別為0.5％，0.71％，1.72％，液相色譜圖見圖1。所用試劑甲醇（江蘇漢邦科技有限公司），乙腈（湖北杜克化學科技有限公司）為色譜純。

1.2 儀器 高效液相為Waters 2695高效液相色譜儀，Waters 2489 UV檢測器，Empower色譜工作站；液質聯用系統為Agilent 1290 Infinity LC System，Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS system，AgilentMassHunterWorkstation software（Version B.03.00）。

2 方法

2.1 色譜條件

2.1.1 液相色譜條件 Kromasil C18（250 mm×6 mm，5μm）色譜柱，柱溫：30℃，流動相（A）為0.05％甲酸，（B）為乙腈，梯度洗脫，0～10min，85％→80％A；10～35 min，80％～75％A；35～55 min，75％～70％A；55～65min，70％～60％A；65～90 min，60％～35％ A；90～92.5 min，35％～5％A；92.5～102.5 min，5％ A；102.5～110 min，5％～85％A；110～115 min，85％ A；流速0.6mL/min，進樣3μL，檢測波長254 nm。

2.1.2 質譜條件 電噴霧離子源，負離子模式掃描；干燥氣溫度350℃，干燥氣流量10 min/L，離子源溫度320℃，霧化氣電壓40 psi，毛細管電壓3 500 V。

2.2 供試樣品的制備 取白芍2 g，以12倍體積的50％乙醇加熱回流2次，每次2 h，合并提取液，回收乙醇，放冷、抽濾，加水至50 mL，制成上樣液。取經預處理的AB-8型大孔吸附樹脂30 mL（濕體積），置于層析柱（2 cm×20 cm）中。白芍提取液上樣，靜置吸附12 h后，用蒸餾水洗脫，至洗脫液無色，棄水液，以80％乙醇洗脫4 BV。收集洗脫液，濃縮，所得樣品含芍藥苷23.4％，芍藥苷轉化率71.89％，干膏得率6.9％。將浸膏溶于50mL甲醇，高速離心（15 000 r/min）、抽濾。取10mL濾液，過0.22μm微孔濾膜，得供試液進行測試。

圖1 白芍中氧化芍藥苷混合對照品和白芍HPLC圖

圖2 白芍總皂苷負離子模式總離子流圖（254 nm）

2.3 白芍總皂苷液質分析 白芍總皂苷負離子模式的總離子流圖見圖2，通過對質譜的分子離子峰和主要碎片離子峰分析，鑒定了其中的22個化合物，結果見表1。

綜上所述，對妊娠期高血壓疾病患者實施認知行為技術干預能夠有效降低患者圍產期血壓值，改善孕產婦心理狀態、妊娠結局和新生兒分娩結局，提高患者滿意度，值得臨床推廣應用。

表1 質譜中解析出的化合物

圖3 白芍中的單萜苷磺酸鹽

白芍總皂苷中發現4個單萜皂苷磺酸鹽，結構見圖3。有報道［5］經過炮制的白芍會出現化合物的磺酸鹽，生成的磺酸鹽的藥效與原生苷不同，與文獻對照，1，3，4和10號峰分別為去苯甲酰芍藥苷磺酸鹽、異芍藥苷磺酸鹽、芍藥苷磺酸鹽和沒食子芍藥苷磺酸鹽。在總皂苷部位的負離子模式總離子流圖中，芍藥內酯苷、芍藥苷和牡丹皮苷Ⅰ分子量均為480，但都出現了［M-H＋COO－］525的強豐度離子峰，3″-甲氧基-4″-羥基芍藥苷雖然也出現質荷比為525的離子峰，卻沒有479的碎片峰，芍藥內酯和芍藥苷都出現了479的［M-H］峰，同時也都出現449［M-H-30］的峰，而牡丹皮苷E和I由于葡萄糖6位連接苯酰基，則沒有449的碎片峰［6］，同樣的加羧酸峰也出現在Isomaltopaeoniflorin的基峰中，該化合物分子量為642，得到的離子峰為687，經對照品和文獻［7-9］對照，7，11，12 和13號峰分別為牡丹皮苷E、芍藥內酯苷、芍藥苷和牡丹皮苷I，9號峰為異芍藥苷。異杞柳苷是白芍中的查爾酮類成分，經與文獻［10］對照，5號峰為異杞柳苷。芍藥酮是白芍中的單萜苷元，與文獻［11］對照，14號峰為芍藥酮，結構見圖4。3″-甲氧基，4″-羥基，6′-苯酰基-芍藥苷和4″-羥基，6′-O-（4-甲氧基苯甲酰）-芍藥苷具有相同分子量，不同的是甲氧基的位置，可以根據［M-H-CO2H4］的碎片峰鑒別，與文獻［14］對照，21，22號峰分別為3″-甲氧基，4″-羥基，6′-苯酰基-芍藥苷和4″-羥基，6′-O-（4-甲氧基苯甲酰）-芍藥苷，裂解途徑見圖5。

圖4 芍藥酮的結構

圖5 3″-甲氧基，4″-羥基，6′-苯酰基-芍藥苷的裂解過程

3 小結

通過對白芍中總皂苷的液質聯用分析，可以看出其中所含的化合物除少數為黃酮、三萜類苷元外，均為白芍苷等蒎烷類單萜苷成分。除原生苷外，白芍中尚含有部分磺酸鹽衍生物，在結果分析時應予以考慮。在本實驗條件下，單萜苷類成分的母核不易裂解，產生的［M-H］離子峰均較強，常見［M-H＋COO－］離子，產生裂解的部位是糖和苯酰基上的基團，可以作為今后分析此類化合物的參考。

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Analysis on total glucosides of paeony by HPLC-MS

CHEN Peidong，ZHOU Xi
（Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210046，China）

Objective To analyze the chemical constituents of total glucosides in paeony.M ethods The total glucosides were purified bymacroporous resin，and the compounds in paeonywere analyzed by HPLC-MS.The separation was performed on Kromasil C18（250mm×6mm，5μm）with amobile phase of0.05％formic acid A and acetonitrile B with gradientelution.Parts of total glucosides in paeonywere analyzed and the splitting process ofmain fragment ionwas analized.Results 22 chemical constituents were identified from total glucosides in paeony.Few of the contained chemical constitutes were flavone and triterpenoid saponins，the rest of itwere all paeony such as pinanemonoterpenoid glycoside.Conclusion The main compounds in total glucosides of paeony weremonoterpenes saponins.

Paeonia Lactiflora Pall；total glucosides of paeony；total saponins；HPLC-MSanalysis

book=241,ebook=27

R284.2

A

2095－6258（2015）02－0241－04

10.13463/j.cnki.cczyy.2015.02.008

2014－08－15）

南京中醫藥大學科技創新風險基金（CX201202）。

陳佩東（1970－），男，博士，副教授，主要從事中藥化學研究。