補(bǔ)腎法在腰椎間盤退變治療中應(yīng)用對AQP1\\AQP3的影響分析

摘要：目的研究補(bǔ)腎法在腰椎間盤退變治療中應(yīng)用對AQP1、AQP3的影響。方法隨機(jī)選取2012年10月~2013年10月在我院進(jìn)行腰椎間盤突出手術(shù)治療的患者60例，將其隨機(jī)分為對照組和觀察組，對照組患者采用直接手術(shù)法，觀察組患者采用補(bǔ)腎法治療一個(gè)月后再進(jìn)行手術(shù)。對兩組患者腰椎間盤退變治療前后AQP1、AQP3、蛋白的表達(dá)和變化，以及補(bǔ)腎法治療前后AQP1、AQP3、蛋白的表達(dá)變化進(jìn)行分析。結(jié)果觀察組患者的AQP1、AQP3、蛋白表達(dá)水平和對照組患者的AQP1、AQP3、蛋白的表達(dá)水平相比有明顯的增加，P＜0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論腰椎間盤退變時(shí)，AQP1、AQP3、蛋白表達(dá)水平會(huì)下降，在經(jīng)過補(bǔ)腎法治療之后AQP1、AQP3會(huì)得到增加，將AQP1、AQP3的表達(dá)進(jìn)行上調(diào)，在一定程度上恢復(fù)人體水平衡和代謝功能，進(jìn)而緩解腰椎間盤退變癥狀。

關(guān)鍵詞：補(bǔ)腎法；腰椎間盤退變；AQP1；AQP3腰椎間盤突出是常見的顧客疾病，腰椎間盤退變是發(fā)病的基礎(chǔ)，腰椎間盤退變可以會(huì)引發(fā)腰椎間盤突出等疾病，為此在腰椎間盤退變治療中，采用的方法為保守治療和手術(shù)治療，相對于保守治療，手術(shù)治療的效果更高，復(fù)發(fā)率較低。之所以會(huì)出現(xiàn)腰椎間盤退變，是與AQP1、AQP3相關(guān)。在腰腿疼痛治療中，補(bǔ)腎法治療是最常采用的方法，但是補(bǔ)腎法的作用機(jī)制不清楚，腰椎間盤退變是常見的腰腿疼痛病因，為此本文針對補(bǔ)腎法在腰椎間盤退變治療中的應(yīng)用，對AQP1、AQP3表達(dá)變化產(chǎn)生的影響進(jìn)行分析。

1資料與方法

1.1一般資料隨機(jī)選取2012年10月~2013年10月在我院進(jìn)行腰椎間盤突出手術(shù)治療的患者60例，將其隨機(jī)分為對照組和觀察組。觀察組中男性13例，女性17例，年齡在25~41歲，平均年齡為（30.5±4.5）歲，對照組男性14例，女性16例，年齡在26~40歲，平均年齡為（29.5±4.8）歲。對照組直接進(jìn)行手術(shù)，觀察組進(jìn)行一個(gè)月的補(bǔ)腎治療之后，在進(jìn)行手術(shù)。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)①符合腰椎間盤退變診斷標(biāo)準(zhǔn)；②L4~5以及L5~S1椎間盤突出患者；③有MR表現(xiàn)；④術(shù)后證實(shí)腰椎間盤組織退變；⑤患者對本次調(diào)查研究知情，并自愿參與調(diào)查研究。

1.3治療藥物、試劑T4DNA連接酶、pMDI8-T載體試劑、質(zhì)粒抽提試劑、質(zhì)粒小量抽提試劑、膠回收試劑、RT-PCR擴(kuò)增試劑、抽提總RNATrizol試劑、BCA蛋白檢測試劑、抗AQP1、AQP3單克隆抗體、HRP標(biāo)記二抗。

1.4治療方法將RT-PCR擴(kuò)增得到的AQP1、AQP3、GAPDH目的基因產(chǎn)物通過克隆的途徑轉(zhuǎn)入pMDI8-T載體中，選擇陽性克隆進(jìn)行鑒定，使用質(zhì)粒小量抽提試劑進(jìn)行質(zhì)粒提取，標(biāo)定質(zhì)粒濃度，10倍稀釋之后建立AQP1、AQP3、GAPDH陽性標(biāo)準(zhǔn)品，在-20℃的環(huán)境中進(jìn)行保存，待定量標(biāo)定使用。

提取冰凍樣本，使用RNATrizol試劑提取腰椎間盤組織的總RNA，然后測定其濃度和純度，經(jīng)含有溴化乙錠的1%瓊脂凝膠進(jìn)行電泳，對RNA的質(zhì)量進(jìn)行觀察。完成之后進(jìn)行熒光定量RT-PCR以及Western blot。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理本次研究中的數(shù)據(jù)采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析處理，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

補(bǔ)腎治療前后患者腰椎間盤退變中的AQP1、AQP3、蛋白表達(dá)水平觀察組和對照組相比有明顯的增加，而且差異顯著，P＜0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見圖1，圖2，表1。

圖1 Western blot鑒定中AQP1的表達(dá)

圖2 Western blot鑒定中AQP3的表達(dá)

3討論

水通道蛋白AQPs是跨膜水轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)結(jié)構(gòu)中的膜通道蛋白體，可以在不同細(xì)胞膜下進(jìn)行水轉(zhuǎn)運(yùn)，AQP1和AQP3是AQPs中的兩種蛋白，在腰椎間盤代謝活動(dòng)中發(fā)揮著重要的作用，可以對腰椎間盤組織細(xì)胞的正常形態(tài)、代謝活動(dòng)進(jìn)行維持[1]。

腰椎間盤是一個(gè)水分含量較高的器官，在幼年的腰椎間盤中水分的含量達(dá)到80%以上，即使到了老年，腰椎間盤中的水分含量也在70%，患者出現(xiàn)腰椎間盤退變的一個(gè)明顯特征就是，腰椎間盤中的水分含量急劇下降，所以說水分在腰椎間盤的生理活動(dòng)中發(fā)揮著巨大的作用。

腎臟是人體內(nèi)含有豐富AQPs的器官，腎臟在調(diào)節(jié)人體水平衡中發(fā)揮著重要的作用，水通道分布非常廣泛，在AQPs中，AQP1和AQP3具有重要的生理意義，作為含有豐富AQPs的器官，腎臟在人體代謝中的作用非常大。

從中醫(yī)學(xué)的角度進(jìn)行分析，腎虛可以引發(fā)腰痛，是腰痛病理產(chǎn)生的基礎(chǔ)，而腰椎間盤突出退變是腰痛的常見病因，所以在進(jìn)行腰椎間盤退變治療中，先對腎臟功能進(jìn)行改善，調(diào)節(jié)人體內(nèi)的水平衡，然后再進(jìn)行腰椎間盤退變治療，可以起到良好的治療效果。

本文針對補(bǔ)腎法在腰椎間盤退變治療中應(yīng)用對AQP1，AQP3產(chǎn)生的影響進(jìn)行分析，從觀察組的AQP1和AQP3的表達(dá)變化，可以看出補(bǔ)腎，可以將人體腰椎間盤組織中的AQP1和AQP3增加，進(jìn)而將腰椎間盤組織中的水分改善，促進(jìn)人體代謝平衡[2]。從對照組和觀察組的AQP1和AQP3表達(dá)變化來看，補(bǔ)腎法可以將AQP1、AQP3的表達(dá)進(jìn)行上調(diào)，在一定程度上恢復(fù)人體水平衡和代謝功能，進(jìn)而緩解腰椎間盤退變癥狀。

參考文獻(xiàn)：

[1]曹國永.水通道蛋白在椎間盤退變中的作用及其調(diào)控機(jī)制的研究[D].第三軍醫(yī)大學(xué)，2006.

[2]夏雄智，吳少鵬，鄧崇禮，等.補(bǔ)腎法對人腰椎間盤退變中水通道蛋白AQP1、AQP3表達(dá)的影響[J].疑難病雜志，2013，12(04):281-282.

編輯/孫杰