尿蛋白檢測技術(shù)與糖尿病腎病的早期診斷

摘要：糖尿病腎病是糖尿病微血管并發(fā)癥和糖尿病常見的死因之一，早期發(fā)現(xiàn)和治療對于改善糖尿病患者預(yù)后，延長生存期具有重要意義。本文介紹了尿蛋白檢測技術(shù)在糖尿病腎病早期診斷中的作用及最新進展，非濃縮尿蛋白電泳是診斷糖尿病早期腎損害的敏感方法，運用尿蛋白組學(xué)技術(shù)篩選早期診斷標志物為該病的研究開辟了新的方向。

關(guān)鍵詞：糖尿病腎病；尿蛋白檢測；尿蛋白組學(xué)；非濃縮尿蛋白電泳糖尿病腎病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病的一個嚴重并發(fā)癥。據(jù)世界衛(wèi)生組織報告，大約10%~20%的糖尿病患者死于腎衰竭。對于糖尿病腎病的診斷，雖然腎活檢病理檢查具有極高的診斷價值，但存在一定的危險性，而尿蛋白電泳可在無損傷的情況下及時判斷腎臟損傷的部位與程度，因此，尿蛋白電泳在糖尿病腎病中的應(yīng)用價值已被多數(shù)學(xué)者認同，為腎臟疾病的鑒別診斷、療效監(jiān)控，預(yù)后判斷提供可靠依據(jù)。

尿蛋白譜的確定以往多采用經(jīng)典的蛋白電泳技術(shù)，如醋酸纖維薄膜電泳、瓊脂糖凝膠電泳、免疫電泳等，隨著染色方法和檢測分析技術(shù)的不斷改進，電泳分析技術(shù)在尿蛋白譜確定方面也有了長足進步。這也為我們探索新的非侵入性的、更早期的糖尿病腎病檢測方法提供了技術(shù)支持，從而更好地識別和治療糖尿病腎病高風(fēng)險個體，有效改善糖尿病患者的預(yù)后。

DN早期表現(xiàn)為腎小球高濾過狀態(tài)，繼之出現(xiàn)微量白蛋白，尿中白蛋白含量逐漸增高進入臨床白蛋白尿期，最后發(fā)展為終末期-腎功能不全失代償 期[1]。因此正確判斷蛋白尿性質(zhì)來源，了解腎臟的損傷類型及程度對臨床具有重要意義。腎臟是糖尿病微血管病變最常受累的器官之一，可累及腎血管、腎小球、腎小管和間質(zhì)[2]，在糖尿病腎病早期起病隱匿，進展緩慢，易被忽視。判斷尿蛋白質(zhì)性質(zhì)和來源，對有效的治療、阻止、延緩糖尿病腎病的病程有非常重要的臨床價值。

從電泳結(jié)果看，腎小球型蛋白尿的比例居多，占52．5％；其次為混合型蛋白尿，占27．5％；而腎小管型蛋白尿和生理型蛋自尿所占比例較小，分別占14．5％、5．5％。以上結(jié)果提示DN以腎小球損傷為主，對腎小管的損傷較輕[3]。檢測中還發(fā)現(xiàn)尿蛋白含量與腎臟受損程度并不呈正比，有些患者尿蛋白定性++時，尿蛋白電泳顯示腎臟損傷并不局限于腎小球，同時累及腎小管，呈現(xiàn)混合型蛋白尿；而有些患者尿蛋白定性+++，但病變僅局限于腎小球，排出的蛋白皆為大、中分子量蛋白，呈部分選擇性腎小球型蛋白尿。因DN發(fā)病隱匿，進展緩慢，逐漸引起全身的小動脈硬化病變，腎臟為最常受累的靶器官之一，可累及腎小球和腎小管，在沒有干預(yù)的情況下，微量清蛋白尿患者在7年內(nèi)有50％進入尿毒癥期。這給糖尿病早期腎損害的患者提供了臨床診斷依據(jù)，得到早期治療。

綜上所述，糖尿病有1/3發(fā)展為腎病，成為糖尿病患者壽命和生活質(zhì)量的主要威脅。而早期診斷和早期介入可大大推遲腎合并癥的發(fā)生。因此，可將SDS-AGE非濃縮尿蛋白電泳作為診斷糖尿病早期腎損害的敏感方法，其簡便，無創(chuàng)性，比其它項目檢測更直觀地了解尿蛋白的組分及腎臟受損的部位和程度，對糖尿病腎病的早期診斷、鑒別診斷、指導(dǎo)治療具有較大價值。

1早期診斷研究進展

DN起病隱襲，目前臨床上早期診斷DN存在較大困難。腎穿刺活檢術(shù)創(chuàng)傷大，并發(fā)癥多，而且費用較高，患者難以接受，不能作為2型糖尿病患者檢查的常規(guī)項目，而尿液富含腎臟病變信息，取材簡單、無創(chuàng)傷，可重復(fù)取樣，所以在DN早期診斷方面，對尿液的分析一直備受關(guān)注。目前臨床上普遍采用尿微量白蛋白（Microalbuminuria，MALB）作為DN早期診斷指標，但已有許多研究發(fā)現(xiàn)MALB診斷DN的準確性和特異性不高，它受多種因素的影響，比如泌尿系統(tǒng)的炎癥、出血，都會有血漿白蛋白的滲出或漏出，使尿白蛋白排出量增加，且在MALB出現(xiàn)時，DN已發(fā)展到第Ⅲ期，因而只依靠監(jiān)測MALB并不能及時準確地對DN做出診斷，會帶來較高的誤診和漏診。隨著蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的發(fā)展，將其與體液技術(shù)相結(jié)合的尿液蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)為DN早期診斷標志物的篩選提供了技術(shù)支持，利用尿液蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可能發(fā)現(xiàn)一些新的DN早期診斷標志物。

在1型糖尿病中DN有很高的發(fā)病率和病死率，臨床上需要一種能夠在腎臟功能和結(jié)構(gòu)發(fā)生病損之前準確評價DN存在風(fēng)險的方法，Meier等引利用尿蛋白組學(xué)技術(shù)來鑒別尿中的多肽和蛋白，在這項研究中，對44例1型糖尿病患者進行了5年的隨訪研究，以同年齡組正常人群為對照，留取隨機尿作為標本，在不同的時期發(fā)現(xiàn)了相對分子質(zhì)量介于800～66500的千余種不同的多肽，進一步精確分析顯示：54種多肽僅在l型糖尿病患者中出現(xiàn)，另有88種多肽在DN早期患者中出現(xiàn)。

2討論

糖尿病腎病腎功能的改變建立在腎小球和腎小管病理生理改變的基礎(chǔ)之上．最早以腎小球濾過率(GFR)增高和腎體積增大為特征，隨著病情進展，腎小球出現(xiàn)結(jié)構(gòu)改變。腎小球毛細血管基底膜(GBM)增厚和系膜基質(zhì)增加．有微量白蛋白漏出。此時已開始出現(xiàn)腎小球荒廢。進入臨床期。大量白蛋白尿產(chǎn)生，UAER>恤g/min或持續(xù)尿蛋白>0．59/d，為非選擇性蛋白尿。隨著大量尿蛋白丟失可出現(xiàn)低蛋白血癥和水腫．約30％的患者可見典型的糖尿病腎病\"三聯(lián)征\"即大量尿蛋白(>3．0 g/24 h)、水腫和高血壓。

SDS-AGE非濃縮尿蛋白電泳作為診斷糖尿病腎損害的敏感方法．已逐步應(yīng)用于臨床工作，有報道認為SDS-AGE與腎活檢結(jié)果相符，腎活檢雖然對腎臟疾病的病理及免疫分型具有較高的診斷性．但腎穿刺屬于創(chuàng)傷性診斷技術(shù)．可能造成出血、感染等并發(fā)癥狀．而且穿刺技術(shù)及取材部位也會影響穿刺的成敗．而SDS-AGE具備簡便、無創(chuàng)的特點．比其他項目檢測更能直觀地了解尿蛋白的組分及腎臟受損的部位和程度．故對腎損害的早期定位、鑒別診斷、指導(dǎo)治療和預(yù)后判斷具有積極、實用的臨床價值。

另一方面，隨著臨床蛋白組學(xué)的發(fā)展，運用蛋白組學(xué)技術(shù)篩選DN的早期診斷標志物為早期治療DN，延緩其發(fā)展帶來了新的希望。這方面的許多研究都提示DN患者尿液中存在某些特殊的蛋白質(zhì)標記物，但目前尚缺乏進一步的大樣本研究資料及分子生物學(xué)證據(jù)，期待更多蛋白組學(xué)的研究為這些生物標記物的臨床應(yīng)用提供支持。

參考文獻：

[1]Zhenguang Chen，Jinbin Liu，et al.Use of Sodium Lauroyl Sarcosinate in a High-Sensitivity Protein Assay by Resonance Light Scattering Technique[J].Journal of Biomolecular Screening，2006，11:400-406.

[2]Michael S.Kostapanos，Haralampos J，Milionis，et al. Rosovaststin Increases α-1 Microgiobulin Urinary Excretion in Patients With Primary Dyslipidemia[J].The Journal of Clinical Pharmacology，2006，46:1337-1343.

[3]張友華，張敏.蛋白尿的實驗室檢查[J].福建醫(yī)藥雜志，2006，(1):107-109.

編輯/肖慧