小鼠胰島形態學改變與2型糖尿病發病機制研究

摘要：目的通過觀察自發性2型糖尿病小鼠病情發展過程中胰島的形態學變化，進一步探討2型糖尿病的發病機理。方法觀測2型糖尿?。═2DM）動物模型db/db小鼠體重及血糖變化及運用HE染色，在光鏡下觀測其胰島的形態學改變。結果db/db糖尿病小鼠于生后3～4 w齡時，其血糖開始升高，并且隨著糖尿病病情的進展，血糖逐漸升高，糖尿病小鼠隨著糖尿病病情的進展，胰島結構發生了一系列變化，表現為隨著月齡的增加，胰島體積增大，數量增多。與對照組比較，有顯著性差異（P<0.05）。結論2型糖尿病db/db小鼠胰島隨著病情的加重，胰島體積增大，胰島細胞排列紊亂，部分胰島破裂萎縮、崩解，其結構和功能的損傷呈進行性加重，說明胰島細胞功能的損傷對糖尿病的發生、發展起著至關重要的作用。

關鍵詞：2型糖尿?。灰葝u；B細胞；1資料與方法

1.1一般資料 動物來源及飼養：引進日本C57bl/Ksj-db/+m轉基因小鼠，近親（兄妹）交配。db/+m型為糖尿病和肥胖基因攜帶者，其表型正常，后代中雌雄純合子個體發生糖尿病和肥胖，即db/db型。病例組：分別選取3，5，8，10，12月齡db/db自發性糖尿病小鼠每組6只。對照組選取相應年齡段db/+m表型正常小鼠，每組6只。 分組標準：表型：糖尿病小鼠均發生明顯肥胖。血糖：＞10 mmol/L定為糖尿病。

1.2方法

1.2.1血糖測定 斷尾取血，并用美國強生微型血糖儀測定血糖值。（每次測血糖時間均選擇在晨9∶00）。

1.2.2普通光鏡切片制備 取小鼠胰尾，固定、脫水、包埋及切片。

1.3 HE染色 切片常規脫臘至水，蘇木精 染色3 min，自來水沖洗。1%鹽酸分化，自來水沖洗，伊紅染色2 min。常規梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.4陽性細胞圖像分析及統計學處理統計方法 數據處理：所有標本均在Motic Med 6.0數碼醫學圖像分析系統內在相同的放大倍數下（400倍），每個年齡段計數6只小鼠的胰腺，每個標本取3張切片，每個切片取10個視野。HE染色切片計數和測量每張切片中的胰島個數及最大直徑，取其平均值來評價胰島的數量和大小。

所有資料錄入微機，建立數據庫，用SPSS（11.0）軟件包進行統計學分析，集中趨勢及離散趨勢用均數及標準差描述，多組間的比較用單因素設計的方差分析（糖尿病組內，正常對照組內），單因素兩組間比較用t檢驗(同月份糖尿病組和正常對照組)，兩兩比較用q檢驗，檢驗水準（α=0.05）。

2結果

2.1不同病程和年齡階段小鼠血糖值 db/db糖尿病小鼠于生后3~4 w齡時，其血糖開始升高，并且隨著糖尿病病情的進展，血糖逐漸升高，對照組隨著月齡的增高血糖無明顯變化，見圖1。

2.2不同病程和年齡階段小鼠體重 糖尿病組小鼠體重較正常組明顯增加（10月和12月齡時糖尿病小鼠體重雖然急劇下降，但仍高于正常對照組），對照組體重無明顯變化，見圖2。

2.3 HE 染色結果

2.3.1 正常對照組 胰島散在分布于外分泌部中，為圓形或橢圓形，輪廓清晰，較規則，大小不一，染色淺，胰島細胞之間排列緊密，結締組織少。高倍鏡下可見細胞界限清晰，細胞間有豐富的毛細血管。隨著年齡的增長，胰島的數量和結構沒有明顯變化，各月份間平均胰島數量約在5.13~5.38個，正常組間比較，無顯著性差異（P>0.05）。平均胰島直徑約為81.20~83.09 μm，組間比較，無顯著性差異（P>0.05），見表1、表2、圖3、圖4、圖5、圖6。

2.3.2糖尿病組 與正常組比較，胰島形態結構發生了明顯變化，表現為胰島數量增多、體積增大，胰島細胞排列紊亂、間隙增寬、結締組織增多、細胞間可見大量空泡、血管數量增多、擴張，隨著月份的增加上述表現加重，胰島形態變得更不規則，部分胰島萎縮、崩解，見圖7、圖8。糖尿病組各月份平均胰島數量在7.45~10.68個，隨著病情加重，平均胰島數量增多，與同月齡正常組相比胰島數量增多，且有顯著性差異（P<0.05），糖尿病組間比較，各組間均有顯著性差異（P<0.05），見表1、圖3。平均胰島直徑為110.25~184.34 μm，且隨著月齡增加而增大，與同月齡正常組相比直徑增大，有顯著性差異（P<0.05），糖尿病組間比較 ，除外8~10月、10~12月，其它各組間比較均有顯著性差異（P<0.05），見表2、圖4。

3討論

本實驗采用db/db自發性糖尿病小鼠作為實驗動物模型，胰腺HE染色結果，db/db小鼠與正常組比較，隨著月齡的增加，體重和血糖逐漸增加。糖尿病小鼠胰島形態結構發生了明顯變化，表現為胰島體積增大、數量增多，胰島細胞排列紊亂、間隙增寬、結締組織增多、細胞間可見大量空泡、血管數量增多、擴張，隨著月份的增加上述表現加重，胰島形態變得更不規則，部分胰島萎縮、崩解。這提示疾病的早期胰島代償性增生肥大，隨著病情的進展，胰島出現了不可逆損傷，從而出現了血糖控制惡化。

多處報道示隨著病程的延長，胰島的結構和形態改變進一步加重。２型糖尿病胰島B細胞凋亡是造成胰島B細胞功能受損，最終引起血糖的升高 。本研究結果與眾報道結果一致。胰島的形態學改變證明了胰島素抵抗和B細胞功能受損在２型糖尿病發病中的地位和作用。

4結論

2型糖尿病db/db小鼠胰島表現為早期胰島體積增大，胰島細胞排列紊亂，隨著病情的加重，部分胰島破裂萎縮、崩解，其結構和功能的損傷呈進行性加重，說明B細胞功能的損傷對糖尿病的發生、發展起著至關重要的作用。

參考文獻：

[1]宋福林，等.36例糖尿病尸檢病例分析[J].中華糖尿病雜志，2001，9(3):164-165.

編輯/肖慧