蛛網膜下腔出血大鼠學習記憶研究

摘要：目的 建立蛛網膜下腔出血SD大鼠模型，觀察蛛網膜下腔出血模型大鼠不同時間段學習記憶功能。方法 隨機分為蛛網膜下腔出血模型組，蛛網膜下腔出血模型假手術組，正常對照組，蛛網膜下腔出血模型組分1d，7d，30d亞組。觀察大鼠行為學改變，采用避暗試驗方法記錄各組大鼠實驗潛伏期（LT）及來回穿梭次數（EN）。結果 蛛網膜下腔出血模型大鼠制作成功后后大鼠有認知改變表現；蛛網膜下腔出血模型大鼠模型組與對照組比學習記憶能力明顯下降（P＜0.05），組間對比，模型組大鼠1d、7d、30d組認知功能逐漸增強，學習記憶有所增強，有統計學意義（P＜0.05），但均較正常組差，比值均有統計學意義（P＜0.05）。結論 蛛網膜下腔出血模型大鼠在不同時間段學習記憶功能不同，證明蛛網膜下腔出血模型大鼠學習記憶等認知功能受損。

關鍵詞：蛛網膜下腔出血（SAH）；學習記憶蛛網膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）一般指顱底或腦組織內部的異常血管破裂，短時間內血液直接進入蛛網膜下腔而引起的一種臨床綜合征，時間快，發展迅速，病情嚴重，約占急性腦卒中的10%，是一種非常嚴重且為常見類急癥病[1]；蛛網膜下腔出血患者在各個不同方面表現認知功能特別是學習記憶方面的功能障礙，經典動物模型可以模擬人體機能方面的變化反映。本研究在與建立蛛網膜下腔出血大鼠模型，檢測大鼠各個時間段學習記憶功能，為臨床提供依據。

1資料與方法

1.1蛛網膜下腔出血大鼠模型的制作

1.1.1實驗動物 6～8w齡健康成年SD大鼠24只，體重（225±25）g均購自河南科技大學醫學院動物實驗中心。所有大鼠單籠飼養，避免強光、強噪音刺激，24h晝夜循環。1w后進行篩選，篩選后大鼠行嚴格固定喂食、喂水時間，嚴格控制食物的量，自由飲水。積極培養本批大鼠統一生活習性及覓食規律。隨機分為蛛網膜下腔出血模型組、蛛網膜下腔出血模型假手術組（同蛛網膜下腔出血組手術方式，只注入生理鹽水，不注入血液，排除手術對大鼠學習記憶的影響）以及空白對照組，，蛛網膜下腔出血組n=8只。假手術組每次按照模型組一樣條件，唯一不同就是不注入血液，注入同用量生理鹽水即可，空白對照組，在每次刺激實驗組的大鼠時以相同的方法刺激抓取1～2次即可，以排除人為刺激影響。

1.1.2模型制作照季鷹等報道的方法完成蛛網膜下腔出血實驗動物模型[2]。在前囪前5mm、中線旁3mm處用電動牙科鉆鉆孔。在手術顯微鏡下仔細將腦膜挑破，切勿傷及腦組織或一級周圍血管，當清亮腦脊液流出時，將PE10塑料管尖端指向雙耳連線中點，緊貼前顱窩底蛛網膜下腔送入，深度約1cm，使該管頂端恰好位于相當于人類Willis環前或中部，盡量不碰及任何血管，以避免腦血管機械性痙攣對結果的影響，蛛網膜下腔出血組自插管內注入非肝素化的自體血，大鼠尾動脈血液100μl。假手術對照組操作步驟同實驗組，但最后經插管注入100μl 生理鹽水，盡量保持與蛛網膜下腔出血組一致，減小手術所引起結果誤差。

1.2學習記憶實驗（避暗試驗）全部大鼠均采用避暗試驗箱進行行為學測試，軟件分析系統進行學習記憶能力測試[3]。由于大鼠有喜暗的習性，將大鼠背對暗室的洞口放入明室，并開始計時，進行學習實驗，大鼠可很快自由進入暗室，此時即為大鼠潛伏期，并記錄，同時接通暗室電源，直流電電擊，受到電刺激后大鼠會逃出暗室，研究大鼠記憶功能，記錄大鼠從明室第1次進入暗室的時間即為本次實驗大鼠LT，大鼠受電擊后會逃避性地跑出暗室，然后記錄10min大鼠進入暗室的次數即EN，并記錄和觀察大鼠在明暗是活動時間和活動路線距離，共同作為記憶成績表現為LT和EN。

1.3統計學處理及分析收集計數資料及計量資料均采用SPSS15.5統計軟件包進行分析避暗試驗所得LT及EN，所得數據以（x±s）表示，數據采用單因素因素方差分析，組間比較用LSD-t檢驗，P＜0.05、1＜0.01為有統計學意義。

2結果

模型制作：蛛網膜下腔出血模型大鼠制作成功后后大鼠有認知改變表現，檢測大鼠腦電波可收集典型的腦電波活動模型。模型制作成功率為97.9%。空白組避暗試驗結果LT為（56.00±2.71）s、EN為（3.29±1.14）次，模型組模型組：模型成功后1d避暗試驗結果的LT為（38.51±1.28）s、EN為（5.15±1.21）次；蛛網膜下腔出血模型組7d避暗試驗結果為LT（42.81±3.31）s、EN為（3.76±1.29）次；蛛網膜下腔出血模型組30d避暗試驗結果(46.73±2.61)s、EN為（2.35±1.01）次，假手術組避暗試驗結果LT為（53.14±3.11）s、EN為（3.55±1.51）次蛛網膜下腔出血模型大鼠模型組與對照組比學習記憶能力明顯下降（P＜0.05），組間對比，模型組大鼠1d、7d、30d組認知功能逐漸增強，學習記憶有所增強，有統計學意義（P＜0.05），但均較正常組差，比值均有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

3討論

腦功能障礙特別是認知功能障礙是目前神經系統疾病患者治愈康復回歸社會生活的主要阻礙因素之一[4-6]，尤為重要，目前國內外多方研究已經得到證實，即使通過多種手段臨床治療預后良好或無明顯神經功能障礙如運動語言等的自發性蛛網膜下腔出血患者，基本大部分會存在不同程度的認知功能損害主要表現為言語功能，文字或非文字學習記憶功能，不同程度認知管理能力及其他認知如思維、學習等區域功能不同程度缺失[7]，本研究通過大鼠蛛網膜下腔出血模型研究蛛網膜下腔出血模型的認知功能，蛛網膜下腔出血模型大鼠制作成功后后大鼠有認知改變表現，檢測大鼠腦電波可收集典型的腦電波活動模型。模型制作點燃成功率為92.4%。蛛網膜下腔出血模型大鼠模型組與對照組比學習記憶能力明顯下降，組間對比，模型組大鼠1d、7d、30d組認知功能逐漸增強，學習記憶有所增強，有統計學意義，但均較正常組差，比值均有統計學意義，從結果看出，大鼠在蛛網膜下腔出血初期，認知功能明顯受損，考慮有多種原因，出血后血液對腦實質的刺激影響，腦功能明顯受損，血管痙攣，出血血液分解后的多種離子對腦組織的影響；蛛網膜下腔出血后，顱腦壓力增高，進一步加強多腦功能的損傷，隨著時間的遷延，腦功能有部分的回復，一部分腦功能有回復可能，但也會給腦功能帶來不可逆的腦損傷，另就是蛛網膜下腔出血后，腦內多種因子的作用，維系腦認知功能的重要因子的減少或缺失等。

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編輯/哈濤