NSF對慢性腎衰大鼠脂質代謝的影響

摘要：目的 觀察NSF對慢性腎衰大鼠脂質代謝相關指標TG、LDL-C、HDL-C和血清M-CSF的影響。方法 采用5/6腎切除手術建立大鼠慢性腎功衰模型。檢測血Urea、Crea，血脂TG、LDL-C、HDL-C的變化；免疫組化法檢測脂代謝機制相關指標血清M-CSF含量。結果 NSF組與模型組比較：Urea、Crea明顯降低 （ P<0.05）； TG、LDL-C明顯降低（P<0.05），HDL-C明顯升高（P<0.05）；血清巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF）表達明顯降低（P<0.05）。結論 NSF能夠改善腎臟功能；可能通過下調M-CSF的表達，調節慢性腎衰大鼠脂質代謝指標TG、LDL-C和HDL-C，改善脂質代謝狀況，發揮對慢性腎功能衰竭及脂質代謝障礙相關并發癥防治作用。

關鍵詞：慢性腎衰；脂質代謝；巨噬細胞集落刺激因子

慢性腎衰竭（CRF）是各型原發或繼發性腎臟疾病進展到終末期的共同表現，最終進展至終末期腎臟病（End stage renal disease，ESRD）。研究顯示動脈粥樣硬化（AS）性心血管疾病已成為CRF患者最常見的并發癥和引起死亡的首要原因；而AS的危險因素中，又以脂代謝異常最為突出[1]。腎衰末期治療常依靠血液透析或腎臟移植維，給患者帶來沉重經濟和精神負擔。中藥地耳草具有保肝、抗菌、增強免疫作用，臨床常應用于肝炎治療[2]，在CRF的腎功改善方面也有臨床報道[3]。NSF是地耳草提取的有效成分提取物，本課題組前期研究顯示NSF能延緩CRF的發展，改善腎纖維化及相關細胞因子指標。為進一步探討NSF對CRF的防治機制，研究NSF對CRF時脂質代謝的影響，本實驗通過建立5/6腎切除大鼠模型，選取脂質代謝關鍵效應因子TG、LDL-C和HDL-C，以及血清中脂質代謝相關炎癥因子M-CSF指標進行檢測；確定其對CRF脂質代謝的改善作用，并探索其可能對CRF脂質代謝及相關并發癥的影響。

1資料與方法

1.1實驗動物 雄性清潔級SD大鼠72只，體重（210±10）g，成都中醫藥大學實驗動物研究中心提供。常規條件下飼養，自由飲水，普通飲食，適應性喂養7d。

1.2實驗用藥 NSF由成都南山藥業有限公司提供，依照委托單位提供的供試品人臨床擬用劑量（1.2g/人·d）為主要依據，按照體表面積換算成大鼠的等效劑量（人的體重按60kg計）。金水寶膠囊，江西濟成可信金水寶制品有限公司，批號，20111203，以臨床人用量（0.33g/粒，18粒/人·d））經體表面積轉換成大鼠等效劑量作為本實驗劑量。

1.3主要試劑與儀器 全自動生化分析儀：日立7180型；酶標儀：Thermo Mulliskan Ascant 公司；類標準胎牛血清：中美合資蘭州民海生物工程有限公司 批號：20100424；雙抗100X：PAA-Strasse1.4061 Pasching .Austria 批號：P01010-1446；免疫組化試劑盒：生產商：北京博奧森生物技術有限公司，批號： FP-0023。

1.4 方法

1.4.1模型制作 大鼠適應性喂養7d，稱重，編號，隨機分為四組，每組選取18只為假手術組，剩余54只采用5/6腎切除術制作大鼠腎衰模型。參考文獻[4]分2次，間隔7d切除5/6腎組織。

1.4.2分組給藥 手術操作后的大鼠隨機分為三組，每組18只。分別為模型對照組、陽性對照組、NSF組。所有大鼠于2次手術后第31d開始灌胃給予相應藥物：假手術組和模型對照組以0.5%CMC-Na溶液灌胃，1ml/100g.bw；陽性對照組：金水寶膠囊5.7mg/kg；NSF組：NSF120 mg/kg。連續給藥30d。

1.4.3 標本收集 用完藥后禁食12h，次日稱重，10%水合氯醛麻醉，腹主動脈取血。留取血清做生化檢測及elisa檢測。

1.4.4檢測指標及方法

1.4.4.1一般情況觀察 動態觀察造模期間大鼠存活率、進食情況、精神狀態、活動度、皮毛光澤度等。

1.4.4.2血清Urea、Crea 最后1次給藥后次日，10%水合氯醛麻醉，腹主動脈取血。留取血清，以全自動血生化分析儀檢測Urea、Crea變化。

1.4.4.3 脂質代謝效應指標TG、LDL-C、HDL-C 最后1次給藥后次日，10%水合氯醛麻醉，腹主動脈取血。留取血清，以全自動血生化分析儀檢測TG、LDL-C、HDL-C變化。

1.4.4.4 脂質代謝機制指標M-CSF 最后1次給藥后次日，10%水合氯醛麻醉，腹主動脈取血。留取血清，采用ELISA法檢測血清M-CSF含量。

1.5統計學方法 計量資料以（x±s）表示，用SPSS17.0統計分析軟件進行非參數檢驗和單因素方差分析。

2結果

2.1一般情況 實驗期間，正常大鼠全部存活，飲食飲水正常，活動靈活，皮毛光澤。造模處理后各組大鼠均出現死亡，各組存活率分別為：模型組66.67%，陽性對照組55.56%，NSF組77.78%；造模后各組大鼠均出現不同程度進食飲水量下降，精神萎靡惡動，毛色發黃干枯，體態消瘦等，尤以模型組最為嚴重。治療后，陽性對照組和NSF組均較模型組有一定程度恢復，進食、活動均有增加。

2.2血清Urea、Crea 各組大鼠Urea、Crea增高，與假手術組相比，具有顯著差異（P<0.05），；NSF組、陽性對照組與模型組比較Urea、Crea降低，有顯著差異（P>0.05），表明NSF能降低血Urea、Crea的含量。見表1。

注：\"*\"P<0.05，與模型對照組比較； \"#\"P<0.05，與假手術組比較

2.3 血脂TG、脂蛋白LDL-C、HDL-C 模型組與假手術組比較，TG、LDL-C和HDL-C改變均有顯著差異（P<0.05）；NSF組、陽性對照組與模型組比較，TG、LDL-C降低，HDL-C升高，均有顯著性差異（P<0.05）；表明NSF能改善模型的血脂代謝紊亂。見表2。

注：\"*\"P<0.05，與模型對照組比較； \"#\"P<0.05，與假手術組比較

2.4血清M-CSF的表達 各組與假手術組比較，M-CSF含量增高，有顯著性差異（P<0.05），；各組與模型組比較，M-CSF含量降低，有顯著性差異（P<0.05） 表明NSF能降低造模引起M-CSF高表達。見表3。

注：\"*\"P<0.05，與模型對照組比較； \"#\"P<0.05，與假手術組比較

3討論

腎臟疾病若缺乏有效治療，其終末易轉為CRF，隨著腎功能逐漸失代償，最終進展至ESRD，同時易出現各種并發癥并導致病情惡化和死亡。其中以動脈粥樣硬化性心血管疾病的發病和死亡風險較高。如何延緩CRF的進展，防治各種并發癥的發生發展，降低死亡率已成為近年研究熱點。

本課題組前期實驗發現，NSF對CRF模型大鼠，有改善腎臟功能、干預腎臟纖維化以及干預模型大鼠血液微炎癥狀態效果。近期研究[5]顯示，CRF存在的微炎癥狀態，與AS的發生存在顯著相關性。M-CSF可由激活的單核細胞、巨噬細胞等分泌產生，也可由腎小管上皮細胞分泌產生，是反映單核-巨噬細胞增殖功能的重要因子，在機體的免疫應答中起重要的作用。CRF可由于腎組織受損，M-CSF表達增高；且升高幅度與腎受損程度呈正相關。且另M-CSF可通過影響單核-巨噬細胞的趨化、增殖和分泌能力及其脂質代謝，參與動脈粥樣硬化的形成。

本實驗通過5/6腎切除復制大鼠CRF模型，觀察NSF對模型大鼠腎功的改善，研究藥物對腎衰模型的治療作用；并選取AS化獨立性危險致病因素：TG、LDL-C、HDL-C和血脂代謝調節相關炎癥細胞因子M-CSF進行檢測，研究藥物對腎衰時脂質代謝紊亂的干預效果，探索NSF對脂質代謝調節的作用機制。實驗結果顯示NSF對該模型大鼠腎臟功能有改善作用；能降低該模型TG、LDL-C的表達，增加HDL-C，該結果提示NSF對5/6腎切除模型大鼠存在的脂質代謝紊亂狀態有治療作用；血清M-CSF的結果則顯示NSF可降低M-CSF表達。以上結果提示NSF能夠改善模型大鼠腎臟功能，調節脂質代謝；其機制可能在于通過下調M-CSF的表達，發揮其對CRF及脂質代謝障礙相關并發癥的防治作用。

參考文獻：

[1]吳學敏，魏鹍.慢性腎功能衰竭并發冠狀動脈粥樣硬化性心臟病危險因素的研究[J]河北醫藥， 2008，30（11）：1788-1790.

[2]廖仰平，賴岳曉，葉建新，等.田基黃及其制劑的研究進展[J].中醫藥導報，2012， 18（3）： 109-111.

[3]余曉紅.地耳草顆粒治療慢性腎功能不全23例[J].華西醫學， 2009， 24（10）： 2711-2711.

[4]鄧聰，魏連波.腎衰養真膠囊對慢性腎衰竭營養不良大鼠Leptin-下丘腦NPY、POMC軸的影響[J]. 中國中西醫結合雜志， 2010， 30（13）： 952-956.

[5]鄧聲京.終末期腎病微炎癥狀態和動脈粥樣硬化的關系[J]. 中國當代醫藥，2013（20）15：45-46.編輯/許言