免疫組化和PCR方法檢測乳癌腋窩淋巴結微轉移的比較

摘要：目的 對乳癌腋窩淋巴結微轉移患者采用免疫組化和PCR方法檢測，觀察和分析其的診斷效果。方法 此次研究中，一共收集了216個采用常規組織學檢查為陰性的腋窩淋巴結，然后分別采用免疫組化和PCR方法進行檢測，分別檢測MUC1蛋白和MUC1mRNA表達。結果 經過檢測發現，MUC1mRNA陽性檢出率為66.0%與蛋白表達檢出率21.0%相比較，差異顯著，具有統計學意義（P<0.05）。結論 臨床上，采用PCR方法檢測乳癌腋窩淋巴結微轉移更為敏感，進而為患者預后和臨床治療提供一定的參考。

關鍵詞：免疫組化；PCR方法；乳癌；腋窩淋巴結微轉移

臨床上，采用常規病理檢查則難以對2mm以下的癌轉移病灶檢測出，同時對于淋巴結微轉移是否存在，則對患者的預后產生直接性的影響。近年來，隨著醫學技術地快速發展，檢測方法也逐漸增加[1]。為了研究和分析不同方法的優勢，我院采用免疫組化和PCR方法對微轉移病灶進行診斷，取得一定成效，報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 此次研究的標本則來自40例乳腺癌組織和相對應的216個腋窩淋巴結手術切除標本以及52例乳腺良性腫瘤標本。這些患者均為我院在2009年4月～2012年9月收治。這些標本均在手術后115h內將其放置在液氮中進行保存。同時留取部分進行常規的病理學檢查和免疫組化分析。此外，選擇同期來院治療的膽結石患者肝十二腸韌帶淋巴結作為此次研究的對照組。

1.2方法 免疫組化：采用SP法染色，兔抗人MUC1多抗。操作方法則按照說明書進行。每個批次都使用已知的乳腺癌陽性切片來作為對照[2]。然后使用PBS來代替一抗進行陰性對照。陽性判斷標準：胞漿內如果出現棕黃色顆粒則為陽性細胞，否則則為陰性細胞。

判定標準：（-）：陽性細胞<10.0%；（+）：陽性細胞在10.0～30.0%；（++）：陽性細胞在30.0～50.0%；（+++）：陽性細胞>50.0%。然后根據臨床胞漿染色情況和細胞的形態來決定微轉移情況[3]。

RT-PCR法：采用MUC1基因序列號為A1（（5'-CGTCGTGGA-CATTGATGGTACC-3.），A2（5'-GTACCTCCTCT-CACCTCCTCCAA-3.）進行實驗[4]。其內參照B2-微球蛋白基因進行[5]。

1.3統計學方法 數據采用SPSS19.0軟件處理，檢出率采用（%）表示，采用χ2或t檢驗，P<0.05具有統計學意義。

2 結果

2.1 MUC1基因免疫組化情況 見表1。

2.2乳癌MUC1 mRNA表達情況 見表2。

2.3兩種方法檢測MUC1基因表達結果比較 見表3。

3 討論

近年來，臨床上發生乳癌的人數逐漸增多，目前主要采用外科手術方法治療。然而對患者術后預后影響的因素較多，比如腋窩淋巴結有無轉移和淋巴結轉移數量、水平和等對患者的預后有非常重要的作用。經過相關的研究發現，導致患者死亡的主要原因是惡性腫瘤細胞發生轉移，然而淋巴道則是其中的一個轉移途徑[6]。此外，淋巴結轉移和患者的生存率呈現為負相關性。

在對轉移腫瘤細胞進行檢測時，一般采用生物學標志物。由于大多數的乳癌來源于上皮組織，因此，上皮組織的一些特異性標志物則可以作為轉移腫瘤細胞的標志物，并能夠使用其對淋巴結中微轉移灶檢測。MUC1粘蛋白則是一種高分子膜量糖蛋白，其的分布有很明顯的組織特異性[7]。其一般存在于上皮性組織以及器官中。比如乳腺和胰腺以及結腸。其在所有的正常組織和乳癌組織中都能夠表達，但是在間葉組織來源的淋巴結中并不能表達。經過相關實驗發現，使用RT-PCR對10個來源于膽結石患者的正常淋巴結進行檢測，均沒有發現MUC1mRNA表達現象[8]。所以，在臨床上，MUC 1則只能作為乳腺癌患者淋巴結中中轉移腫瘤細胞的標志物，并將其用來診斷微轉移。

臨床上，對患者進行常規組織病理學檢測時，則很容易發現2mm以上的轉移瘤灶。但是對于2mm以下的微轉移灶則難以發現。進行免疫組化分析則能夠提高對微轉移的檢出率，但是，其的操作十分的復雜，價格也較為昂貴，因此，難以推廣。經過免疫組化研究發現，在正常的乳腺和乳腺良性疾病以及乳癌轉變過程中，MUC1的表達出現逐漸增強，同時其分布極性也慢慢地消失，最終其將在整個細胞膜、漿中出現表達。經過相關研究發現，腋窩淋巴結中所檢出的微轉移細胞大多表現為散在性分布，采用常規病理檢查則難以發現。采用免疫組化染色則能夠使得轉移細胞和背景細胞存在一定的差異，進而能夠檢出單個腫瘤細胞。

此次研究中，采用PCR法對微轉移進行檢測，主要是針對性一些腋淋巴結陰性乳癌高危人群，同時為臨床預后提供一定的參考依據。在乳癌患者人群中，一旦其發生微轉移情況，則其預后一般較差。患者當出現微轉移細胞進入到淋巴結后，其將可能繼續增生而最終形成更大的轉移病灶，最終出現全身轉移。此外，其也可能被機體免疫系統所清除或者其進入到暫時的靜止期，當環境適宜時就再次發生轉移。經過此次研究發現，經過檢測發現，MUC1mRNA陽性檢出率為66.0%與蛋白表達檢出率21.0%相比較，差異顯著，具有統計學意義（P<0.05）。臨床上，采用PCR方法檢測乳癌腋窩淋巴結微轉移更為敏感，進而為患者預后和臨床治療提供一定的參考。

參考文獻：

[1]韋志永，項鋒鋼.三陰乳癌組織CXCL12與CXCR4表達及其意義[J].齊魯醫學雜志，2011，03：214-215+218.

[2]王盛楠，侯琳，韓琳琳，等.散發性乳癌WIF-1基因啟動子區多態性研究[J].齊魯醫學雜志，2011，04：290-292+294.

[3]方圣，曹明智，王群.STK15在乳癌組織中的表達[J].齊魯醫學雜志，2011，06：484-485+488.

[4]趙潔，王繼綱.提高乳癌HER2陽性檢出率的免疫組化染色方法探討[J].青島大學醫學院學報，2011，06：525-526.

[5]劉煥英，葛銀林，劉永超，等. 乳癌組織TSLC1基因mRNA表達及啟動子甲基化狀態[J]. 齊魯醫學雜志，2012，03：189-192.

[6]沈智勇，張建兵，季秀珍，等.乳癌彩超血流信號與Survivin表達及淋巴結轉移的關系[J].鄭州大學學報（醫學版），2010，01：97-99.

[7]王繼綱，高涵，陳樺.P物質和神經激肽1在乳癌組織的表達及意義[J].齊魯醫學雜志，2010，05：396-398.

[8]權松霞，張振中，邵彥江，等.脂質體介導的hTERT PEI/ASODN縮合體對乳癌MCF-7細胞生長及hTERT表達的影響[J].鄭州大學學報（醫學版），2010，04：554-559.

編輯/哈濤